Gli autori non hanno nessun ringraziamenti a fare.

Tutte le procedure sono state approvate dal Consiglio di Tongji Medical College sul animale cura Comitato di Università Huazhong di scienza e tecnologia (Wuhan, Cina). Il manoscritto è stato preparato secondo ARRIVE (Animal Research: Reporting di esperimenti In Vivo ) linee guida6.
1. allevamento
<ol><li>Utilizzare ratti Sprague-Dawley (deviazione standard) (n = 20, 10 maschi, 8 settimana-vecchio, pesa 261 a 291 g, significano = 272.85 ±9.07 g) da sperimentali animali centro di Huazhong Università della scienza e della tecnologia e mantenere ratti in conformità con la guida per l'uso e la manutenzione Pubblicato da la US National Institute of Health (NIH pubblicazione No. 85-23, riveduta 1996) gli animali da laboratorio</li>
	<li>Casa in condizioni standard con accesso gratuito per cibo e acqua potabile. Ratti in gabbie di2 cm 530 con rasatura di legno tenere biancheria da letto. Due ratti di casa in ogni gabbia. Tenere tutte le gabbie aperte all'ambiente camera (nessuna micro-isolamento o ingabbiamento ventilato)</li>
	<li>Garantire il personale coinvolto nel protocollo sperimentale gestire regolarmente i ratti.</li>
	<li>Mantenere la temperatura ambiente tra i 21 ° C e 23 ° C. Dare tariffe una normale dieta di sale (0,3% NaCl) in tutto lo studio.</li>
</ol>2. procedura di raccolta del sangue
Nota: Il sistema di raccolta di sangue sotto vuoto costituito da un doppia punta ago [22 G (0,7 mm x 25 mm)], un supporto di plastica e una serie di tubi a vuoto (2 mL) con tappo in gomma (Figura 1).
<ol><li>Posizionare il ratto un supporto in plastica restrittivo e lavare la coda con acqua calda (20-30 ° C) per rimuovere eventuali impurità visibili o feci. Mentre un assistente tiene la coda in posizione estesa, strofinare la coda con etanolo al 70% e pulire con una garza per chiarire la vena.</li>
	<li>Inserire la punta dell'ago di farfalla 22g in uno delle vene coda laterale (circa 5 mm) in una posizione di circa 2-3 cm di distanza dalla punta della coda ad angolo di circa 20 ° (Figura 2). Raccogliere il sangue nella provetta sottovuoto raccolta mediante inserendo la punta di gomma dell'ago farfalla nel tubo di raccolta di sangue sotto vuoto (Figura 3). Nota: Il volume di sangue raccolta massima è 1,2 mL7.</li>
	<li>Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago e applicare una leggera pressione al sito della puntura con una garza per 15-30 s fermare il flusso di sangue. Quindi, rilasciare il ratto dal supporto di plastica restrittivo e tornare il ratto alla sua gabbia.</li>
	<li>Utilizzare le provette contenenti EDTA come anticoagulante per raccogliere il plasma sanguigno. Capovolgere delicatamente la provetta diverse volte per mescolare anticoagulante nel sangue e posizionare i campioni su ghiaccio verticale.</li>
	<li>Centrifugare i tubi di raccolta del campione di sangue in una centrifuga refrigerata a 2.000 x g per 10 min separare il plasma o siero.</li>
	<li>Estrarre il plasma/siero, facendo attenzione a non per disturbare i livelli di globuli rossi e bianchi. Per raccogliere il sangue siero, utilizzare provette senza anticoagulante. Entrambi i tipi di campione possono essere utilizzati immediatamente, o conservati a-80 ° C fino ad un anno. Nota: Il successo del sangue è stato definito come ottenere 1,2 mL di sangue ogni volta. Foratura massima ora è stata impostata a tre prove, se il volume totale del sangue era più basso di 1,2 mL dopo la terza puntura, è stato definito come una raccolta di sangue non riuscita. La durata del campionamento inizia dalla puntura della vena della coda alla rimozione dell'ago farfalla dopo il prelievo di sangue.</li>
	<li>
Raccogliere il sangue due volte entro due settimane7.
	<ol>
<li>Per testare e verificare la fattibilità di questo metodo, è necessario addestrare due studenti di medicina (principianti) per 2 h prima di eseguire questo protocollo di raccolta di sangue. Utilizzare venti ratti e prelevare il sangue da 10 ratti da 2 esperti compagni (gruppo sperimentale) e da 10 ratti dagli studenti medici 2 (gruppo principianti).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. elaborazione statistica
<ol><li>Esprimere i dati come un valore medio ± deviazione standard e analizzare con SPSS statistica 17. Un valore α pari a 0,05 è stato scelto, quindi p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare

Il rapporto presente descrive un metodo di raccolta di sangue facile da imparare in ratti. I nostri risultati hanno mostrato che questo metodo è fattibile per la raccolta ripetutamente un grande volume di sangue dai ratti. Inoltre, questo metodo potrebbe essere imparato facilmente con una breve curva di apprendimento. Questa procedura può essere eseguita in ratti anestetizzati con non e solo causa di minimo stress agli animali.
Sangue può essere raccolto da ratti in varie località. La vena della coda è una posizione superiore per sangue campionamento4. Tuttavia, non è sempre facile da ottenere abbastanza volume di sangue dalla vena sangue sottile e basso flusso coda dei ratti. Il sistema di raccolta di sangue sotto vuoto viene solitamente utilizzato per la raccolta di campioni di sangue dai pazienti nella pratica clinica quotidiana. Questo sistema di raccolta di sangue sotto vuoto è stato utilizzato in pazienti e ricerca gli animali per un lungo periodo di tempo8,9,10. Questo sistema è costituito da un tubo di raccolta di sangue sotto vuoto con ago di farfalla e parete tubo interno rivestito in silicone. Essa si basava sul principio di pressione negativa di vuoto e permette il disegno di sangue senza il rischio di raccolta di sangue, che inoltre riduce il rischio di contaminazione ed emolisi11continuo. Il volume di campione di sangue nel catetere è di circa 0,3 mL. Dopo aver ritirato l'ago dalla vena della coda, il sangue bloccato nel catetere scorrerà nel tubo di aspirazione raccolta a causa del vuoto. Questo metodo è anche applicabile per la raccolta di sangue da ratti che pesano meno di 100 g con l'uso di un ago puntura più piccolo.
Questo metodo di raccolta di sangue ha diversi vantaggi. Questa procedura provoca solo lesioni minime ai ratti e raccolta del sangue può essere eseguita senza l'uso di anestetici, così si può evitare l'influenza della risposta allo stress e anestetici sul campione di sangue. Le nostre osservazioni hanno mostrato che ratti erano tranquille sul supporto in plastica restrittivo durante la procedura e non ci erano morti durante questi esperimenti. In secondo luogo, ripetuto il prelievo di sangue ogni uno o due giorni è possibile, che consente il campionamento frequente di sangue con un volume adeguato per vari scopi di ricerca. Infine, questo metodo è facile da imparare e facilmente è stato masterizzato da principianti dopo un periodo di apprendimento brevi (2 h), come indicato dai simili tassi di successo e puntura volte tra i gruppi sperimentali e principiante in questo rapporto. In una precedente relazione, Lee et al hanno dimostrato un simile metodo di campionamento di sangue dalla vena laterale della coda di ratto4. Il nostro metodo è più semplice di quello riportato da Lee et al. 4 in che inseriamo direttamente l'ago puntura in vena caudale e l'altra estremità del tubo è collegato direttamente al tubo a vuoto per la raccolta del sangue, senza l'uso di una siringa supplementare e manuale di aspirazione del sangue e senza la necessità di ' latte ING' la vena per facilitare il flusso sanguigno. Raccolta di sangue con questo sistema chiuso riduce la probabilità di contaminazione del sangue. Uso del supporto di plastica restrittivo anche riduce lo stress al ratto e facilita la fissazione della coda.
I due passaggi seguenti sono fondamentali per la riuscita applicazione di questo metodo. 1) estendere la coda ed evitare il movimento della coda; 2) delicatamente forare la vena con un angolo di 20 ° per evitare la puntura attraverso la vena e mantenere la puntura dell'ago nella vena.
In conclusione, il metodo di raccolta sangue vuoto adottato nei ratti è sicuro, fattibile e facile da praticare. Questo metodo consente frequente prelievo di sangue con un volume di sangue adeguato ottenuto da ratti non anestetizzati.

Prelievo di sangue da ratti è necessario per un'ampia varietà di studi sperimentali. Tecniche per la raccolta del sangue dal ratto includono puntura del cuore, plesso retro-orbitale, vena giugulare, vena safena, vasi sanguigni coda, dell'arteria carotica, aorta addominale e della vena cava. La maggior parte delle tecniche (ad eccezione della vena safena e puntura del vaso sanguigno di coda) richiedono anestesia1,2. Le vene della coda del ratto sono ordinariamente forate per il prelievo di sangue e iniezione vascolare. Dopo aver trattato la coda con acqua calda, i vasi sanguigni sono ben dilatata e adatto per la manipolazione, anche quando i ratti sono anestetizzati3.
Nonostante lo sviluppo di tecniche nuove e migliorate per ottenere campioni di sangue nel piccolo laboratorio animali2, non è sempre facile ottenere abbastanza sangue durante il campionamento da piccoli animali. La vena della coda dei ratti è una posizione superiore per sangue campionamento4. Tuttavia, la vena caudale è sottile, così a volte è difficile da forare e richiederebbe un tempo lungo per ottenere abbastanza sangue a causa del suo flusso di sangue basso. Raccolta del sangue tramite un sistema di tubo di aspirazione è un metodo tipico nella pratica clinica quotidiana. Questo sistema chiuso per la raccolta del sangue riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e ha reso più facile prendere campioni multipli da un singolo prelievo venoso5. Il rapporto presente descrive un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando il sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo è facile da padroneggiare e può essere utilizzato per ottenere un grande volume di sangue ripetutamente in ratti.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

Sangue può essere raccolto da ratti in un certo numero di punti di campionamento. Per esempio, la vena di coda è una posizione superiore per il prelievo di sangue. Tuttavia, vena caudale è sottile in modo che a volte è difficile perforare. Inoltre, vena caudale ha flusso sanguigno basso e richiede un tempo di campionamento lungo per ottenere sangue sufficiente. Il rapporto presente descrive un metodo di campionamento del sangue semplice, il metodo di raccolta di sangue sotto vuoto, che viene solitamente utilizzato per ottenere campioni di sangue dai pazienti, qui usati per ratti anestetizzati con non. La punta dell'ago di farfalla 22 G è stata inserita in una delle vene coda laterale circa 2-3 cm dalla punta della coda con un angolo di circa 20° e il sangue è stato raccolto nel tubo sottovuoto raccolta inserendo alla fine di gomma dell'ago farfalla il va tubo di raccolta sangue di aspirazione. I presenti risultati sperimentali mostrano che il tasso di successo era 95% nel gruppo sperimentale e il 90% nel gruppo di principianti. Il tasso di successo e puntura volte erano simili tra i due gruppi. La durata del campionamento era significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di principianti. In conclusione, questo metodo di raccolta del sangue di vuoto per il campionamento sequenziale sangue dalla vena caudale del non - ratti anestetizzati è fattibile e facile da imparare, che potrebbe servire come un'alternativa affidabile agli altri convenzionalmente usato tecniche di campionamento di sangue per ratti.

Durata di campionamento, la massa del corpo e volume di raccolta di sangue dei due gruppi Sangue è stato raccolto da 10 ratti (5 maschi) due volte nell'arco di due settimane in ogni gruppo. La massa corporea medio in entrambi i gruppi era simile (272,00 ±9.66 g e g 273.70 ±8.87). Durata di campionamento era significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di principianti (2,77 ±0.53 min vs 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabella 1).
Successo valuta e volte di due gruppi di foratura Il tasso di successo era 95% (19/20) nel gruppo sperimentale e il 90% (18/20) nel gruppo di principianti (p > 0.05). Puntura volte non erano significativamente differenti fra i due gruppi (1.50 ±0.61 min vs 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabella 2). Questi risultati indicano questo metodo è facile da imparare, e la tecnica potrebbe essere masterizzata dopo l'allenamento per 2 h.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Figura 1 : 2 mL vuoto provetta da prelievo (a sinistra); ago a farfalla G 22 (centro); il supporto di plastica restrittivo (a destra). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Figura 2 : La punta dell'ago è stata inserita nella vena caudale laterale (circa 5 mm) in corrispondenza della posizione circa 2-3 cm di distanza dalla punta della coda ad angolo di circa 20 °. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Figura 3 : Successo venipuntura. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Gruppo sperimentale</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Gruppo di principianti</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Genere</td>
			<td>Peso corporeo (g)</td>
			<td>Volume di sangue prelevato (mL)</td>
			<td>durata di campionamento (min)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Genere</td>
			<td>Peso corporeo (g)</td>
			<td>Volume di sangue prelevato (mL)</td>
			<td>durata di campionamento (min)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>18V</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>274</td>
			<td>0.9</td>
			<td>4.87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>18V</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4,38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4,57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2,77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">It-1: numero di serie dei ratti nel gruppo sperimentale per la prima raccolta di sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">It-2: numero di serie dei ratti nel gruppo sperimentale per la seconda raccolta di sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-1: numero di serie dei ratti nel gruppo di principianti per la prima raccolta di sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-2: numero di serie dei ratti nel gruppo di principianti per la seconda raccolta di sangue.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 1: Risultati del sangue raccolti nel gruppo sperimentale e il gruppo di principianti.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Tempi di raccolta del sangue</td>
			<td>Media puntura volte</td>
			<td>Una sola puntura tempo</td>
			<td>Puntura di due volte</td>
			<td>Puntura di tre volte</td>
			<td>Non riuscita</td>
			<td>Tasso di successo</td>
		</tr>
<tr>
<td>Gruppo sperimentale</td>
			<td>20</td>
			<td>1.50 ±0.61</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Gruppo di principianti</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.75 1.85</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Una sola puntura tempo: numero di ratti con successo del sangue dopo la prima puntura</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Due volte la puntura: numero di ratti con successo del sangue dopo la puntura secondo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Tre volte la puntura: numero di ratti con successo del sangue dopo la terza puntura</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">Non riuscita: numero di ratti con errore prelievo di sangue dopo la terza puntura</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 2: Confronto dei tempi di puntura e tassi di successo del gruppo sperimentale e il gruppo di principianti.

Watch this Scientific Journal Video about Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System at JoVE.com

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Qui, descriviamo un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando un sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e semplifica prendendo campioni multipli da un singolo prelievo venoso.

Ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

repeated-blood-collection-from-tail-vein-non-anesthetized-rats-with

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K Views.  Jianghan University. Qui, descriviamo un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando un sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e semplifica prendendo campioni multipli da un singolo prelievo venoso.

Video: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Protocollo di raccolta per pancreas umano

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Ricerca

Medicina

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

Sangue secco Spot Raccolta di salute biomarcatori per massimizzare la partecipazione negli studi di popolazione

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

Raccolta, isolamento e analisi citofluorimetrica di campioni endocervicali umano

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolic occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) per l&#39;ictus ischemico con omologhi coaguli di sangue nei ratti

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Routine di metodo di Screening per microparticelle in trasfusioni della piastrina

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

Elettrocardiografia simultanea registrazione e invasiva sangue pressione misura in ratti

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Una nuova pratica migliore per la convalida di coda vena iniezioni nel ratto con agenti vicino-infrarosso-Labeled

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Prelievo di sangue attraverso la puntura della vena subclavia nei topi

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

Caratterizzazione citometrica a flusso simultaneo di più tipi di cellule recuperate dal cervello del mouse/cavo spinale attraverso diversi metodi di omogeneizzazione

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...