Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo regenerativo, como cómo progresa la regeneración cardíaca después de una lesión miocárdica. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona una evaluación de alta resolución, no invasiva y repetible de la función cardíaca en el axolotl. Además, este método también se puede aplicar a otros organismos modelo de anfibios, como newts y xenopus.
Comience con la colocación de un axiol anafinizado supino en un lecho de animal en forma de labio. Cuando se añade el medio, el animal flotará, por lo que debe ser asegurado con bandas de goma sueltas. A continuación, llene la cama con anestésicos medianos que contengan anestésicos para que el tórax tenga de tres a cinco milímetros de profundidad.
Si solo se utilizan datos de modo B, modo Doppler de color y doppler de onda de pulso, el axolotl puede estar alerta para este procedimiento. En esta situación, coloque al animal propenso en una hamaca, y deje que se recupere del estrés durante 30 a 60 minutos antes de proceder. Para animales blancos o albinos, tenga una fuente de luz fría lista para ayudar a colocar el transductor.
Para un transductor, utilice un modelo de 40 o 50 hercios dependiendo de la masa del animal. A continuación, prepare el gel de ultrasonido del transductor y proceda a recopilar datos. Comience con la colocación del transductor de ultrasonido sobre la línea media del animal en la región torácica, y paralelo a su eje largo.
Una pequeña porción del ventrículo, colocada a la derecha en la cavidad torácica, debe aparecer en el marco en la diástole ventricular. Una gran parte de ambas aurículas también debe ser visible, al igual que el sinusal venoso. Estas estructuras deben ser identificables en la vista de la diástole o la sistole.
A continuación, traduzca el transductor de uno a tres milímetros a la derecha, para obtener la vista ventricular del eje largo. En última instancia, se alcanza la posición correcta cuando el área transversal del ventrículo del sistema de sistólico final está en su máximo. Las mediciones correctas del ultrasonido 2D dependen en gran medida del posicionamiento correcto del transductor.
Practique la colocación del transductor meticulosamente y realice análisis entre operadores para minimizar la subjetividad. Ahora, en modo B, adquirir al menos tres ciclos cardíacos a un mínimo de 50 fotogramas por segundo. Elija entre usar el modo de imagen general o el modo de cardiología.
A continuación, traduzca el transductor a lo largo del eje largo del animal hasta que el centro del ventrículo esté en el centro de la pantalla. A continuación, gire el transductor 90 grados en el sentido de las agujas del reloj para obtener la vista del eje corto del ventricular medio. Desde esta posición, evalúe la forma circular del ventrículo traduciendo el transductor a lo largo del eje largo del corazón.
A continuación, vuelva a colocar el transductor en el plano del eje largo y tradúzcalo de nuevo hacia la línea media para obtener una vista de dos cámaras de eje largo auricular. La posición correcta se logra cuando las áreas transversales de las aurículas del sistema de extremo están en su máxima, y las dos aurículas combinadas asumen el contorno del número ocho cuando se inclinan unos 45 grados a la izquierda. A continuación, recopile imágenes en modo B.
Para continuar, traduzca el transductor a la derecha hasta que aparezca el tracto de salida. La vista ventricular del sistole final es correcta cuando el diámetro de la salida está en su mayor, y cuando, durante la inyección media, dos de las válvulas semiluminares, en la entrada de la salida, son visibles. Desde esta vista, las mediciones de velocidad y flujo se pueden realizar utilizando imágenes Doppler.
Aplique el modo color-Doppler para mapear las velocidades del flujo sanguíneo en el tracto de salida durante la inyección cardíaca. A continuación, aplique imágenes Doppler de color y imágenes Power-Doppler para visualizar el flujo sanguíneo en la vista ventricular y haga lo mismo en la vista auricular. A continuación, utilice el modo color-Doppler dirigido a la ubicación de la velocidad máxima de la sangre en el tracto de salida que va directamente hacia el transductor.
Cuando la salida no sea completamente perpendicular al transductor, aplique un ángulo de haz y una corrección angular para corregir la imagen hasta 45 grados. A continuación, recopile datos de velocidad-tiempo en el modo Doppler de onda de pulso. Durante ninguna fase del ciclo cardíaco si la válvula espiral se superpone a la vista de la salida.
Recopilar datos de al menos tres ciclos cardíacos. Luego, sin mover el transductor, adquirir datos en modo B de al menos tres ciclos cardíacos. A continuación, sólo para animales anestesiados, gire el animal 90 grados de modo que la parte derecha del animal esté mirando hacia arriba, y mueva el transductor a la vista oblicua de para-gill, sólo paralela y posterior a las branquias salientes.
Esta vista ofrece una medición alternativa de la velocidad del flujo sanguíneo en el tracto de salida. El tracto de salida debe estar corriendo hacia abajo a unos 45 grados, y las aurículas deben aparecer debajo del tracto de salida durante la inyección. Finalmente, cambie al modo Doppler de onda de pulso y coloque el transductor para ver la velocidad máxima de sangre que corre lejos del transductor en el tracto de salida.
Según sea necesario, utilice hasta 45 grados de ángulo de haz y corrección angular para hacer que la salida sea perpendicular al transductor. A continuación, recopile datos en modo Doppler de onda de pulso y en modo B desde la misma posición que antes. La adquisición 3D tarda un tiempo, por lo que el axolotl debe ser anestesiado.
Colóquelo supino en el lecho de animales en forma de labio. Asegúrelo con bandas de goma, y sumerja su superficie torácica en tres a cinco milímetros de medio de ultrasonido que contiene un anestésico. Los movimientos durante la adquisición 3D son perjudiciales para la reconstrucción posterior.
Si el animal se mueve durante la adquisición de ultrasonido 3D, el procedimiento debe repetirse desde el principio. A continuación, coloque el transductor sobre la línea media en la región torácica y colóquelo paralelo al eje largo para una grabación 3D sagital, o ortogonal al eje largo para la grabación 3D transversal. A continuación, traduzca el transductor para asegurarse de que toda la región cardíaca se cubra en la captura 3D posterior.
Muévalo tanto en la cota en plano como en la cota fuera de plano. Para el modo de imagen, si la frecuencia cardíaca del animal está entre 20 y 60 latidos por minuto, seleccione el modo de imagen general. De lo contrario, elija el modo de cardiología.
Apaga la luz. Ahora, en la imagen en modo B sin procesar, ajuste la ganancia 2D a un nivel donde las estructuras anatómicas apenas son reconocibles. Esto aumentará la relación señal-ruido en las reconstrucciones finales.
A continuación, decida el tamaño del grosor del paso Z o del corte. Ahora, traduzca el transductor un paso Z a la vez, tomando una grabación que contiene 1.000 fotogramas en cada paso Z hasta que toda la región cardíaca haya sido cubierta. Se realizó un análisis ecocardiográfico 2D de un axolotl de 10 gramos y 10 centímetros utilizando la técnica descrita.
La vista de eje largo proporcionaba un buen punto de partida. El plano de línea media mostró el seno venoso, las aurículas y partes del ventrículo. Al ver el plano ventricular, el ventrículo fue esférico y altamente trabeculado.
En el plano auricular, las aurículas parecían más irregulares y apenas trabeculadas. El centro del tracto de salida está cerca del centro del ventrículo. Las mediciones del ciclo cardíaco utilizando Doppler de onda de pulso desde el eje largo y desde el plano oblicuo para-gill tenían algo de ruido de fondo.
Este ruido era superable al realizar mediciones del tiempo de velocidad integral. Las imágenes Color-Doppler y power-Doppler mostraron el patrón de flujo a través de las cámaras cardíacas. Las vistas eran posibles desde el ventrículo, desde las aurículas y desde el tracto de salida.
También se realizó ecocardiografía 3D. Esta vista multiplanar del corazón tiene muchos usos, como reconstrucciones de superficies y volúmenes, o segmentación y generación de modelos 3D. Después de ver este video, usted debe tener una buena comprensión de cómo realizar ecocardiografía 2D y 3D en el axolotl.
Una vez dominada, la técnica de ultrasonido 2D se puede hacer en menos de cinco minutos por animal, si se realiza correctamente, mientras que la adquisición 3D puede tomar hasta una hora por animal. Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como la extracción cardíaca y la histología con el fin de responder a preguntas adicionales relacionadas con la estructura cardíaca y la anatomía.
