Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo regenerativo, como como a regeneração cardíaca progride após a lesão do miocárdio. A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece alta resolução, não invasiva e avaliação repetível da função cardíaca no axolotl. Além disso, esse método também pode ser aplicado a outros organismos modelo anfíbios, como newts e xenopus.
Comece com o posicionamento de um supino axolotl anestesiado em um leito animal em forma de lábio. Quando o meio é adicionado, o animal flutuará, por isso deve ser protegido com elásticos soltos. Em seguida, encha a cama com anestésicos médios contendo para que o tórax esteja de três a cinco milímetros de profundidade.
Se apenas usar o modo B, o modo Doppler de cor e os dados do modo Doppler de ondas de pulso, então o axolotl pode estar alerta para este procedimento. Nesta situação, posicione o animal propenso a uma rede, e deixe-o se recuperar do estresse por 30 a 60 minutos antes de prosseguir. Para animais brancos ou albinos, tenha uma fonte de luz fria pronta para ajudar a colocar o transdutor.
Para um transdutor, use um modelo de 40 ou 50 hertz, dependendo da massa do animal. Em seguida, prepare o gel de ultrassom do transdutor e prossiga com a coleta de dados. Comece com o posicionamento do transdutor de ultrassom sobre a linha média do animal na região torácica, e paralelo ao seu longo eixo.
Uma pequena porção do ventrículo, posicionada à direita na cavidade torácica, deve aparecer no quadro na diástola ventricular. Uma grande parte de ambos os atrias também devem ser visíveis, assim como o seio venoso. Essas estruturas devem ser identificáveis na vista de diastole ou systole.
Em seguida, traduza o transdutor de um a três milímetros para a direita, para obter a visão ventricular de longo eixo. Em última análise, a posição correta é alcançada quando a área transversal do ventrículo de sístole final está no seu máximo. As medidas corretas de ultrassom 2D são altamente dependentes do posicionamento correto do transdutor.
Pratique a colocação do transdutor meticulosamente e realize análises interoperadoras para minimizar a subjetividade. Agora, no modo B, adquira pelo menos três ciclos cardíacos a um mínimo de 50 quadros por segundo. Escolha entre usar o modo geral de imagem ou o modo de cardiologia.
Em seguida, traduza o transdutor ao longo do longo eixo do animal até que o centro do ventrículo esteja no meio da tela. Em seguida, gire o transdutor 90 graus no sentido horário para obter a visão do eixo curto midventricular. A partir desta posição, avalie a forma circular do ventrículo traduzindo o transdutor ao longo do longo eixo do coração.
Em seguida, devolva o transdutor ao plano de eixo longo, e traduza-o de volta para a linha média para obter uma visão atrial de dois eixos longos. A posição correta é alcançada quando as áreas transversais da atria de sístole final estão em sua máxima, e os dois atria combinados assumem o contorno do número oito quando inclinados cerca de 45 graus para a esquerda. Em seguida, colete imagens no modo B.
Para prosseguir, traduza o transdutor para a direita até que o trato de saída apareça. A visão ventricular de systole final está correta quando o diâmetro da saída está no seu maior, e quando, durante a injeção média, duas das válvulas semiluminares, na entrada do fluxo de saída, são visíveis. A partir desta visão, as medições de velocidade e fluxo podem ser feitas usando imagens doPpler.
Aplique o modo color-Doppler para mapear as velocidades de fluxo sanguíneo no trato de saída durante a injeção cardíaca. Em seguida, aplique imagens doppler de cor e imagens doppler de energia para visualizar o fluxo sanguíneo na visão ventricular, e faça o mesmo na visão atrial. Em seguida, use o modo Color-Doppler direcionado para a localização da velocidade máxima do sangue no trato de saída que corre diretamente em direção ao transdutor.
Quando a saída não estiver completamente perpendicular ao transdutor, aplique um ângulo de feixe e correção angular para corrigir a imagem em até 45 graus. Em seguida, colete dados de tempo de velocidade no modo Doppler de onda de pulso. Durante nenhuma fase do ciclo cardíaco, a válvula espiral se sobrepõe à visão da saída.
Colete dados de pelo menos três ciclos cardíacos. Em seguida, sem mover o transdutor, adquira dados no modo B a partir de pelo menos três ciclos cardíacos. Em seguida, apenas para animais anestesiados, gire o animal 90 graus para que a parte certa do animal esteja voltada para cima, e mova o transdutor para a vista oblíqua para-brânquia, apenas paralela e posterior às brânquias salientes.
Esta visão oferece uma medição alternativa da velocidade de fluxo sanguíneo no trato de saída. O trato de saída deve estar correndo para baixo em cerca de 45 graus, e o atria deve aparecer sob o trato de saída durante a injeção. Finalmente, mude para o modo Doppler de onda de pulso e posicione o transdutor para ver a velocidade máxima do sangue fugindo do transdutor no trato de saída.
Conforme necessário, use até 45 graus de ângulo de feixe e correção angular para tornar a saída perpendicular ao transdutor. Em seguida, colete dados no modo Doppler de ondas de pulso e no modo B a partir da mesma posição de antes. A aquisição 3D leva um tempo, então o axololo deve ser anestesiado.
Coloque-o supino na cama animal em forma de lábio. Fixá-lo com elásticos, e submergir sua superfície torácica em três a cinco milímetros de meio de ultrassom contendo um anestésico. Os movimentos durante a aquisição 3D são prejudiciais para a reconstrução subsequente.
Se o animal se mover durante a aquisição do ultrassom 3D, o procedimento deve ser repetido desde o início. Em seguida, posicione o transdutor sobre a linha média na região torácica, e coloque-o paralelo ao eixo longo para uma gravação 3D sagital, ou ortogonal ao eixo longo para gravação 3D transversal. Em seguida, traduza o transdutor para garantir que toda a região cardíaca fique coberta na captura 3D subsequente.
Mova-o tanto na dimensão do plano quanto na dimensão fora do avião. Para o modo de imagem, se a frequência cardíaca do animal estiver entre 20 e 60 batimentos por minuto, selecione o modo geral de imagem. Caso contrário, escolha o modo de cardiologia.
Desligue a luz. Agora, na imagem bruta do modo B, ajuste o ganho 2D a um nível onde as estruturas anatômicas são pouco reconhecíveis. Isso aumentará a relação sinal-ruído nas reconstruções finais.
Em seguida, decida o tamanho da espessura do passo Z ou da fatia. Agora, traduza o transdutor um passo Z de cada vez, fazendo uma gravação contendo 1.000 quadros em cada passo Z até que toda a região cardíaca tenha sido coberta. Uma análise ecocardiográfica 2D de um axolotl de 10 gramas e 10 centímetros foi realizada utilizando-se a técnica descrita.
A visão de eixo longo proporcionou um bom ponto de partida. O plano médio mostrou o seio venoso, atria e partes do ventrículo. A visualização do plano ventricular mostrou que o ventrículo era esférico e altamente trabeculado.
No plano atrial, o atria parecia mais irregular e mal trabeculado. O centro do trato de saída está próximo ao centro do ventrículo. Medições do ciclo cardíaco usando doppler de ondas de pulso do eixo longo e do plano para-brânquio oblíquo tiveram algum ruído de fundo.
Este ruído era superável ao fazer medições do tempo de velocidade integral. Color-Doppler e imagem power-Doppler mostraram o padrão de fluxo através das câmaras cardíacas. As vistas eram possíveis a partir do ventrículo, do atria, e do trato de saída.
A ecocardiografia 3D também foi realizada. Essa visão multiplanar do coração tem muitos usos, como reconstruções de superfície e volume, ou segmentação e geração de modelos 3D. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a ecocardiografia 2D e 3D no axolotl.
Uma vez dominada, a técnica de ultrassom 2D pode ser feita em menos de cinco minutos por animal, se for realizada corretamente, enquanto a aquisição 3D pode levar até uma hora por animal. Após este procedimento, outros métodos como extração cardíaca e histologia podem ser realizados a fim de responder a perguntas adicionais relacionadas à estrutura cardíaca e anatomia.
