Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de regeneración de tejidos duros y blandos. La principal ventaja de esta técnica es que el uso de un ratón permite un análisis detallado de la regeneración ósea. Comience con un ratón adulto completamente anestesiado.
Afeita y desinfecta cuidadosamente el área quirúrgica con una solución de 10% de yodo. Luego, administrar 0.5%hidrocloruro de lidocaína en la extremidad inferior derecha. Luego, después de hacer una incisión longitudinal de la piel de 15 milímetros en la parte inferior derecha de la pierna con un bisturí número 15, separe sin rodeos los músculos subyacentes, teniendo cuidado de no eliminar todo el periosteo.
Luego, corta el peroné con tijeras. Sujete el tobillo con fórceps estrechos y delgados, y use una aguja del calibre 27 para hacer un agujero en el hueso, a unos cinco milímetros del talón. La aguja debe penetrar la piel, el hueso y la piel en ese orden.
Cuando la aguja penetre completamente, corte la punta y la raíz con un pinza para que la aguja sea de unos 15 milímetros. Hacer otro agujero de la misma manera, de dos a tres milímetros proximal. A continuación, sostenga alrededor del tobillo y pase una aguja del calibre 25 debajo de la rodilla de la misma manera.
Después de que la aguja penetre, corte la punta y la raíz con un mordisqueo. Hacer otro agujero de la misma manera, de dos a tres milímetros distal. Coloque el distractor personalizado de modo que sea paralelo a la dirección de la extensión.
Fije las agujas y el dispositivo con suficiente resina dental de polimerización para llenar las ranuras del dispositivo. Espere a que se complete la polimerización, que debe tardar aproximadamente cinco minutos. Luego, mientras tenga mucho cuidado de no dañar los tejidos circundantes, corte la mitad de la diáfisis de la tibia utilizando un disco de corte muy delgado mientras aplica una solución salina.
Cierre la herida con una sutura de nylon 4-0. Dar inyecciones subcutáneas de buprenorfina para analgesia inmediatamente después de la cirugía. Hay varios informes sobre el período de latencia y la tasa de distracción, pero aquí se muestran los protocolos representativos.
Después de un período de latencia de cinco días, comience el procedimiento de distracción. Para la extensión, utilice el pasador conectado al tornillo de expansión rápida. Mueva el pasador en la dirección de la flecha amarilla unida al tornillo de extensión.
Sostenga la cola con el dedo meñique y la palma, y fije el dispositivo de extensión con el dedo índice y el pulgar. Realice la extensión moviendo el pasador en la dirección de la flecha amarilla 0,2 milímetros para un giro de un cuarto. Continúe alargando a una velocidad de 0,2 milímetros cada 12 horas durante ocho días, lo que resultará en una brecha total de 3,2 milímetros.
Esta imagen muestra los hallazgos típicos de la radiografía a las cuatro semanas después de la distracción en el modelo. El hueso recién formado se ve en el sitio de distracción. Aquí se observan los resultados de tinción de hematoxilina y eosina.
Se observó un puente óseo recién formado, y el hueso recién formado se podía distinguir fácilmente del hueso nativo. Presentamos un modelo DO tibial de ratón desarrollado usando un distractor hecho a medida. El uso de un modelo DO de ratón facilita un análisis más detallado.
Es particularmente adecuado para experimentos con ratones knockout.
