Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo de regeneração de tecidos duros e moles. A principal vantagem dessa técnica é que o uso de um rato permite uma análise detalhada da regeneração óssea. Comece com um rato adulto totalmente anestesiado.
Raspe cuidadosamente e desinfete a área cirúrgica com solução de 10% de iodo. Em seguida, administre 0,5% de cloridrato de lidocaína no membro inferior direito. Então, depois de fazer uma incisão de pele longitudinal de 15 milímetros na perna inferior direita com um bisturi número 15, separe sem rodeios os músculos subjacentes, tomando cuidado para não remover todo o periósteo.
Em seguida, corte a fíbula com uma tesoura. Segure o tornozelo com fórceps estreitos e finos, e use uma agulha de calibre 27 para fazer um buraco no osso, cerca de cinco milímetros do calcanhar. A agulha deve penetrar na pele, osso e pele nessa ordem.
Quando a agulha penetrar completamente, corte a ponta e a raiz com um nipper de modo que a agulha seja de cerca de 15 milímetros. Faça outro buraco da mesma maneira, cerca de dois a três milímetros proximais. Em seguida, segure ao redor do tornozelo, e passe uma agulha de calibre 25 sob o joelho da mesma maneira.
Depois que a agulha penetrar, corte a ponta e a raiz com um nipper. Faça outro buraco da mesma maneira, cerca de dois a três milímetros distal. Coloque o distrato personalizado de tal forma que seja paralelo à direção de extensão.
Fixar as agulhas e o dispositivo com resina dentária de polimerização suficiente para preencher as ranhuras do dispositivo. Aguarde a polimerização para completar, o que deve levar aproximadamente cinco minutos. Em seguida, tomando muito cuidado para não danificar os tecidos circundantes, corte o meio da diafísica da tíbia usando um disco de corte muito fino enquanto aplica uma solução salina.
Feche a ferida com uma sutura de nylon 4-0. Dê injeções subcutâneas de buprenorfina para analgesia imediatamente após a cirurgia. Há vários relatórios sobre o período de latência e taxa de distração, mas aqui, protocolos representativos são mostrados.
Após um período de latência de cinco dias, comece o procedimento de distração. Para extensão, use o pino preso ao parafuso de expansão rápida. Mova o pino na direção da seta amarela presa ao parafuso de extensão.
Segure a cauda com o dedo mindinho e a palma da mão, e fixe o dispositivo de extensão com o dedo indicador e o polegar. Execute a extensão movendo o pino na direção da seta amarela 0,2 milímetros para uma curva de um quarto. Continue se alongando à taxa de 0,2 milímetros a cada 12 horas durante oito dias, o que resultará em uma diferença total de 3,2 milímetros.
Esta imagem mostra descobertas típicas de radiografia em quatro semanas após a distração no modelo. Osso recém-formado é visto no local da distração. Os resultados da hematoxilina e da eosina são vistos aqui.
Uma ponte óssea recém-formada foi observada, e o osso recém-formado poderia ser facilmente distinguido do osso nativo. Apresentamos um modelo do do tibial do mouse desenvolvido usando um distraídor feito sob medida. O uso de um modelo DO mouse facilita uma análise mais detalhada.
É particularmente adequado para experimentos usando ratos de nocaute.
