Este método se puede utilizar para responder preguntas clave sobre el papel del microambiente de la médula ósea y la supervivencia de los tumores de mieloma injertado. La principal ventaja de este procedimiento es que se puede aplicar a estudios longitudinales anti-drogas y se utiliza para ensayor múltiples vías bioquímicas de una manera no invasiva. El día del experimento lave por primera vez las 8226 células transfactadas Luciferase tres veces en PBS helado a 200 RCF durante cinco minutos por centrifigación y resuspend el pellet en PBS frío fresco a cinco veces diez a las sextas células por cada 200 microlitros de PBS frío de hielo por ratón.
A continuación, confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del y el dedo del dedo del otro y aplicar un ratón NOG de cuatro a seis semanas de edad y aplicar un ungán oftálmico a los ojos del animal. Cargue las células en una jeringa de insulina de un mililitro equipada con una aguja de calibre 26. Inyectar todo el volumen de células en la vena de la cola del animal, antes de devolver el ratón a su jaula, monitoreando hasta la recuperación completa.
Diez a veinte días después del desafío, inyectar cada animal injertado con 200 microlitros de sustrato de D-luciferina grado in vivo en la salina estéril intraperitonealy. Coloque los animales anestesiados en la posición supina en un sistema de imágenes de animales pequeños dentro de los 5 a 10 minutos de la inyección. Mida el resplandor medio en determinadas regiones de interés dentro del software de imágenes correspondiente.
Para la terapia dirigida de los tumores 8226 Luciferase, Después de medir la bioluminiscencia basal en cada animal como acaba de demostrarse, aleatorizar a los animales en grupos de tratamiento y tratar cada ratón con una serie de 200 microlitro inyección IP de Temsirolimus o un control salino. Mida la actividad de Luciferase dos veces por semana y trace los cambios en la bioluminiscencia a lo largo del tiempo. Para medir los cambios en el metabolismo tumoral, primero retire los alimentos de la jaula casera de los ratones durante 24 horas para evitar el exceso de absorción de fludeoxidasa radiomarcada en exceso.
Al día siguiente diluir de 500 a 100 microcuries de 18 sondas de Fludeoxglucosa radiomarcadas por flúor en solución salina estéril a un volumen final de 100 microlitros por ratón y registrar el tiempo y la actividad de las sondas con un calibrador de dosis. Cuando las sondas estén listas, coloque al primer animal anestesiado en una almohadilla calefactora con la cabeza hacia otro lado y utilice una jeringa de insulina blindada de un mililitro equipada con una aguja de calibre 26 para inyectar 100 microlitros de la sonda en la vena de la cola. Mida la radiactividad residual en la aguja y la jeringa con el calibrador de dosis y observe la actividad y el tiempo.
A continuación, mida la actividad radiomarcada de la fludeoxglucosa en determinadas regiones de interés que corresponden a los tumores injertados en un sistema de imágenes por TC PET animal pequeño. Un injerto exitoso de tumores de médula ósea puede confirmarse mediante imágenes de bioluminiscencia como se ha demostrado. Se pueden utilizar imágenes en serie de varios animales para visualizar la distribución de los tumores de mieloma múltiple injertados en la médula ósea.
Además, el análisis óptico de rayos X muestra una determinación rápida y no invasiva de la ubicación exacta y la distribución de los tumores de mieloma múltiple dentro del esqueleto del ratón. La bioluminiscencia producida por estas células tumorales injertadas se puede medir en serie y de forma no invasiva para evaluar los cambios en el crecimiento tumoral. Además, se puede controlar la supervivencia de los ratones tratados con el inhibidor de mTOR Temsirolimus y se pueden utilizar pruebas de emisión de positrones y análisis de tomografía computarizada para la captación de fludexiglucosa radiomarcada por tumor para demostrar cambios mediados por Temsirolimus en el metabolismo de la glucosa.
Al realizar este procedimiento es importante inyectar las células IEV. Hemos descubierto que si no se inyectan las células en la vena se produce la formación de células tumorales no injertadas en la médula cerca del lugar de la inyección. Después de este procedimiento, otros métodos como la inmunohistoquímica y la micro-CT se pueden utilizar para abordar preguntas sobre el impacto de los tumores en la arquitectura ósea y los componentes celulares y moleculares no tumorales del entorno de la médula.
