Nuestro exclusivo sistema de administración de fármacos, que utiliza partículas de oro de 20 nanómetros en dos péptidos cortos específicos, puede estabilizar nanopartículas de oro en solución fisiológica y mejorar su absorción celular, y así, entregar eficazmente fármacos basados en péptidos u otros fármacos en las células. Nuestro híbrido peptídico GNP es fácil de sintetizar y estable. Mediante el uso de híbrido de péptido de nanopartículas de oro como portadores de fármacos, podemos transferir fármacos peptídicos a las células de manera efectiva y en abundancia.
Tratamos la lesión por isquemia-reperfusión en los pulmones con nuestro híbrido GNP/PKCi. El GNP introduce péptidos inhibidores de la PKC en el citoplasma. Este método de administración fue capaz de reducir la lesión pulmonar más grave utilizando una dosis más baja de PKCi que otros métodos de administración.
Para comenzar este procedimiento, recupere los péptidos de un congelador a menos 20 grados centígrados y descongelarlos a temperatura ambiente. Utilice una micro báscula para pesar 0,01 gramos de cada péptido descongelado y transfiera cada péptido a un tubo cónico separado de 50 mililitros. Añadir 18,74 mililitros de agua desionizada al tubo P2, y 16,93 mililitros de agua desionizada al tubo P4.
Añadir 8,21 mililitros de 50%acetonitrilo diluido en agua desionizada al tubo inhibidor del delta PKC. Vortex las soluciones de péptidos brevemente. A continuación, coloque los tubos en un sonicador a 40 megahercios durante cinco minutos.
Después de esto, transfiera las soluciones a un gabinete de bioseguridad. Es fundamental colocar el tubo cónico de 50 ml en un sonicador durante cinco minutos. Si se omite este paso, el GNP/PKCi formará agregaciones.
Transfiera un mililitro de cada solución de péptido a su propio tubo cónico nuevo de 50 mililitros. Añadir 19 mililitros de agua desionizada a los tubos que contienen P2 y P4. Y añadir 19 mililitros de 50%acetonitrilo al tubo que contiene inhibidor del delta PKC. Añadir 475 mililitros de la solución P2, 25 microlitros de la solución P4, 500 microlitros de la solución inhibidora del delta PKC a un tubo de 15 mililitros.
A continuación, agregue nueve mililitros de una solución GNP de 20 nanómetros al mismo tubo. Retire la solución combinada del gabinete de bioseguridad y envuelva el tubo en papel de aluminio. Coloque el tubo en una coctelera durante la noche.
Al día siguiente, devuelva las muestras al gabinete de bioseguridad. Transfiera una mililitro alícuotas de la solución GNP/PKCi a microtubos de 1,5 mililitros. Centrifugar los microtubos a una micro centrífuga a 15294 g y a cuatro grados Centígrados durante 30 minutos.
Transfiera los microtubos de nuevo al gabinete de bioseguridad y retire el sobrenadante de cada tubo, mientras se asegura de que el pellet DEP no se perturbe. Resuspender cada pellet en el disolvente deseado de acuerdo con la concentración requerida. Para evaluar la solubilidad híbrida GNP/PKCi, vierta 0,5 mililitros de la solución de GNP/PKCi en una cubeta de acumulación.
Coloque la cubeta en un espectrofotómetro UV-Vis y pruebe la absorción máxima. En este estudio, el inhibidor de la proteína quinasa C-delta se conjuga con nanopartículas de oro para formar un híbrido GNP/PKCi. Se debe tener cuidado con la evaluación de las propiedades biofísicas del híbrido, ya que las nanopartículas de oro tienden a acumularse en un disolvente.
Cuando las nanopartículas se agregan, el color de la solución cambiará de rosa a púrpura. Las muestras se analizan con un espectrofotómetro UV-Vis que es capaz de detectar con un alto grado de sensibilidad. Si el híbrido no se agrega, el pico de una absorción debe estar a 525 nanómetros.
Si el PNB se agrega, el pico de absorción se desplazará hacia la derecha. Como se puede ver, cuando se han formado agregados, la densidad óptica delta disminuye. Al formular los híbridos de péptidos GNP, es importante recordar que la proporción de péptidos con la solución de PNB debe ser de uno a nueve.
Esta fórmula de GNP/PKCi se puede utilizar para la lesión por isquemia-reperfusión en sistemas de órganos distintos del pulmón. Cualquier péptido puede adherirse al PNB si esos péptidos tienen un residuo de cisteína en el N-terminus. Esto significa que el híbrido de péptido GNP se puede utilizar para transportar otros medicamentos peptídicos a la célula.
Los péptidos de diseño racional son una nueva tecnología que puede traer una interacción específica proteína-proteína dentro de esas células. Esta técnica, desarrollada aquí, se puede utilizar para la entrega de nuevos medicamentos peptídicos o para versiones modificadas de fármacos existentes.
