La medición del dolor en modelos preclínicos de artritis es difícil, pero es esencial para la evaluación de tratamientos regenerativos y analgésicos. Nuestro protocolo es sensible y reproducible para la medición de comportamientos de dolor evocados y espontáneos. Y es simple y relativamente barato.
La artritis es el mayor contribuyente a la discapacidad, y el dolor es la principal causa de discapacidad. El tratamiento de la artritis es actualmente inadecuado. Los modelos preclínicos son una parte importante del desarrollo del tratamiento.
Demostrando este procedimiento estarán Christopher Dorman, un técnico, y Sandra Frizelle, una científica de mi laboratorio. Para evitar que la aguja se inserte demasiado profundamente y salga de la articulación posteriormente, cubra una aguja de punto 5 pulgadas con una vaina de tubo de polietileno hasta que sólo 2,5 milímetros de la aguja sobresalga de la vaina. A continuación, afeitar el pelaje de la rodilla del ratón anestesiado para ser inyectado, y esterilizar la piel expuesta con exfoliación de yodo povidona.
A continuación, inserte la aguja enreda en la articulación en la línea media a través del tendón rotulista justo inferior al borde inferior de la rótula, e inyecte la sustancia de interés. Antes de evaluar el dolor articular evocado, utilice un altímetro de nivel 4 para practicar la aplicación de fuerzas de sietecientos gramos por centímetro al cuadrado de presión constante y firme. El dispositivo emitirá 4 pitidos cuando se aplique el nivel adecuado de presión.
Cuando se puede aplicar de forma fiable la presión adecuada, reveste el ratón en el cuello con el dedo índice y el pulgar lo suficientemente apretados como para evitar el movimiento casual. Y usa el cuarto y quinto dedos para contener la cola. El ratón debe ser capaz de hacer movimientos discretos y breves con esfuerzo y cuando se estimula, pero no debe ser capaz de moverse libre o continuamente.
Administrar palpas repetidas de firme simultáneamente a los lados lateral y medial de cada rodilla con el pulgar y el dedo índice de la mano libre aproximadamente la línea de la articulación una vez por segundo durante 1 minuto. Y pida a un observador que cuente el número de veces que el animal vocaliza y lucha para escapar de la restricción durante este período de aplicación de presión de 1 minuto. La suma de las mordeduras y vocalizaciones se considera la Puntuación de Dolor Evocado.
Abra el programa de software de rodamientos de peso dinámico avanzado y seleccione Mice"como tipo de sensor. Antes de cada experimento, seleccione la calibración completa"en el menú de calibración. Y escriba cero"para el valor de tara.
Y el peso de la almohadilla de espuma, tablero de fibra de densidad media, vaso de precipitados de plástico y agua como el peso de calibración. Seleccione next"y tare"Y cubra la almohadilla del sensor con la almohadilla de espuma, la placa de fibra de densidad media y el vaso de plástico de agua. Cuando todos los materiales se han colocado en la almohadilla del sensor, seleccione la vista previa de ganancia"Y ajuste el peso de calibración hasta que se distribuya uniformemente entre los sensores individuales.
Cuando el valor del indicador de calibración es superior a noventa y cinco, seleccione la definición de ganancia"para producir una media normalizada para los sensores individuales y para confirmar la integridad de los sensores. A continuación, seleccione siguiente" y guarde el archivo de calibración en la carpeta de calibración. Seleccione new" e introduzca el proyecto y los nombres de los animales para el primer ratón que se va a probar.
Seleccione examinar" y abra el archivo de calibración que se creó para el proyecto. A continuación, seleccione siguiente"confirmar que habilitar la captura de vídeo" está seleccionado, y seleccione ok"Siguiente, pesar el animal. Seleccione capture" y registre el peso en el software.
Después de seleccionar ok"coloque el ratón en la cámara durante 5 minutos. Y seleccione launch"El software grabará la actividad del animal, capturará un video y sincronizará con los datos del sensor, y dividirá automáticamente el video en segmentos analizables y no analizables. Al final del período de ensayo, seleccione la puntuación fácil"y el ajuste de pausa independiente"Y seleccione avance rápido"para pasar al primer segmento analizable.
Si una zona estable no tiene la pata correcta identificada, mantenga el cursor sobre esa zona y presione la tecla de método abreviado adecuada correspondiente a la parte del cuerpo correcta. El software avanzado de cojinete de peso dinámico calculará automáticamente el porcentaje de tiempo analizado invertido y el porcentaje de peso corporal colocado en cada una de las 4 extremidades. A continuación, seleccione results"export"and yes" para exportar las primeras 5 líneas de resumen de datos al programa de hoja de cálculo adecuado.
Para cada animal adicional en el mismo grupo, seleccione new"e introduzca un nombre de animal único sin cambiar el nombre del proyecto. A continuación, capture la actividad de cada animal en la cámara como se acaba de demostrar. Puntuaciones de dolor evocadas para el cuidado inflamatorio agudo-a-gen-a artritis inducida, f-roy-nes completo inflamatorio crónico add-jav-ent artritis inducida, y crónica no inflamatoria cole-ag-in-a inducido aumento sobre los observados para animales ingenuos sin inyectar para los tres tipos de dolor articular.
Las hembras, pero no los hombres con dolor articular crónico degenerativo, demuestran reducciones similares en las medidas de peso dinámico por adelantado en comparación con los ratones ingenuos en el dolor articular inflamatorio agudo y crónico. Los machos con dolor articular inflamatorio agudo transfieren más peso a las 4 extremidades que los animales ingenuos. El peso que afecta a las 4 extremidades aumenta en ratones hembra en comparación con los animales ingenuos, pero no en los machos con dolor articular crónico degenerativo.
Tanto en machos como en hembras con dolor articular crónico degenerativo, no hay diferencia en el tiempo que pasa en las extremidades traseras izquierdas en comparación con los animales ingenuos. Y las hembras con dolor articular crónico degenerativo pasan más tiempo en la extremidad posterior derecha no artrítica en comparación con los ratones no inyectados. Finalmente, los ratones macho con dolor articular inflamatorio agudo, y las hembras con dolor articular crónico degenerativo, pasan significativamente más tiempo en sus 4 extremidades que los animales ingenuos.
La correcta identificación de la parte posterior de los pies del animal en relación con su cuerpo es muy importante. Concéntrese en la parte posterior del animal en lugar de en su cabeza. Con este método, somos capaces de probar la afectividad de nuevos analgésicos interarticulares nuevos.
