Die Messung von Schmerzen in präklinischen Modellen von Arthritis ist schwierig, aber es ist wichtig für die Bewertung von regenerativen und schmerzstillenden Behandlungen. Unser Protokoll ist empfindlich und reproduzierbar für die Messung sowohl evozierter als auch spontaner Schmerzverhalten. Und es ist einfach und relativ preiswert.
Arthritis ist der größte Beitrag zur Behinderung, und Schmerzen sind die Hauptursache für Behinderungen. Die Behandlung von Arthritis ist derzeit unzureichend. Präklinische Modelle sind ein wichtiger Bestandteil der Behandlungsentwicklung.
Das werden Christopher Dorman, ein Techniker, und Sandra Frizelle, eine Mitarbeiterin meines Labors, demonstrieren. Um zu verhindern, dass die Nadel zu tief eingesetzt wird und das Gelenk nach hinten verlässt, verdecken Sie eine 5-Zoll-Nadel des Punktes mit einem Mantel aus Polyethylenschläuchen, bis nur 2,5 Millimeter der Nadel aus dem Mantel herausragen. Als nächstes rasieren Sie das Fell aus dem Knie der anästhesierten Maus injiziert werden, und sterilisieren die exponierte Haut mit Povidon Jod Peeling.
Dann setzen Sie die ummantelte Nadel in das Gelenk an der Mittellinie durch die Patellasehne nur unter dem unteren Rand der Patella, und injizieren Sie die Substanz von Interesse. Vor der Beurteilung der evozierten Gelenkschmerzen, verwenden Sie einen Altmesser Stufe 4, um die Anwendung von siebenhundert Gramm Kräfte pro Zentimeter quadratisch von konsistentem und festem Druck zu üben. Das Gerät gibt 4 Signaltöne aus, wenn der entsprechende Druckpegel angewendet wird.
Wenn der entsprechende Druck zuverlässig ausgeübt werden kann, zerschrubben Sie die Maus am Hals mit dem Zeigefinger und Daumen fest genug, um lässige Bewegung zu verhindern. Und verwenden Sie den vierten und fünften Finger, um den Schwanz zu bremsen. Die Maus sollte in der Lage sein, diskrete, kurze Bewegungen mit Anstrengung und wenn stimuliert, aber sollte nicht in der Lage sein, frei oder kontinuierlich zu bewegen.
Verabreichen Sie wiederholte feste Palpationen gleichzeitig auf die seitlichen und medialen Seiten jedes Knies mit dem Daumen und Zeigefinger der freien Hand bei etwa der Gelenklinie einmal pro Sekunde für 1 Minute. Und lassen Sie einen Beobachter zählen, wie oft das Tier während dieser 1 Minute Druckanwendungszeit lautstark und kämpft, um der Zurückhaltung zu entkommen. Die Summe der Bisse und Vokalisationen wird als Evoked Pain Score betrachtet.
Öffnen Sie das erweiterte Softwareprogramm für dynamisches Gewichttragen, und wählen Sie Mäuse" als Sensortyp aus. Wählen Sie vor jedem Experiment die vollständige Kalibrierung"unter dem Kalibrierungsmenü aus. Und geben Sie Null" für den Tare-Wert ein.
Und das Gewicht des Schaumstoffpads, der Mitteldichte-Faserplatte, des Plastikbechers und des Wassers als Kalibriergewicht. Wählen Sie next"and tare"Und decken Sie das Sensorpad mit dem Schaumstoffpad, der Mitteldichte Faserplatte und Kunststoffbecher Wasser. Wenn alle Materialien auf dem Sensorpad platziert wurden, wählen Sie Gain Preview"Und passen Sie das Kalibriergewicht an, bis es gleichmäßig auf die einzelnen Sensoren verteilt ist.
Wenn der Wert des Kalibrierindikators über fünfundneunzig liegt, wählen Sie die Gain-Definition aus, um einen normalisierten Mittelwert für die einzelnen Sensoren zu erzeugen und die Integrität der Sensoren zu bestätigen. Wählen Sie dann als nächstes aus" und speichern Sie die Kalibrierungsdatei im Kalibrierungsordner. Wählen Sie neu" und geben Sie die Projekt- und Tiernamen für die erste zu testende Maus ein.
Wählen Sie durchsuchen aus"und öffnen Sie die Kalibrierungsdatei, die für das Projekt erstellt wurde. Wählen Sie dann next"bestätigen, dass Videoaufnahme aktivieren" ausgewählt ist, und wählen Sie ok"Weiter, wiegen Sie das Tier. Wählen Sie Capture" und zeichnen Sie das Gewicht in der Software auf.
Nach der Auswahl ok"stellen Sie die Maus in der Kammer für 5 Minuten. Und wählen Sie Launch"Die Software zeichnet die Aktivität des Tieres auf, nimmt ein Video auf und synchronisiert sich mit den Sensordaten und partitioniert das Video automatisch in analyzierbare und nicht analyzierbare Segmente. Wählen Sie am Ende der Testperiode einfache Punktzahl" und unabhängige Pauseneinstellung"Und wählen Sie schnell vorwärts", um zum ersten analyzierbaren Segment zu wechseln.
Wenn in einer stabilen Zone nicht die richtige Pfote identifiziert wurde, halten Sie den Cursor über diese Zone, und drücken Sie die entsprechende Tastenkombination, die dem richtigen Körperteil entspricht. Die fortschrittliche Software für die dynamische Gewichtung berechnet automatisch den Prozentsatz der analysierten Zeit und den Prozentsatz des Körpergewichts, der auf jeder der 4 Gliedmaßen platziert wird. Wählen Sie dann Ergebnisse"export" und ja aus, um die ersten 5 Zusammenfassungszeilen von Daten in das entsprechende Tabellenkalkulationsprogramm zu exportieren.
Wählen Sie für jedes weitere Tier in derselben Gruppe neu aus" und geben Sie einen eindeutigen Tiernamen ein, ohne den Projektnamen zu ändern. Dann erfassen Sie die Aktivität jedes Tieres in der Kammer, wie gerade gezeigt. Evoked Pain Scores for acute inflammatory care-a-gene-a induced arthritis, chronic inflammatory complete f-roy-nes add-jav-ent induced arthritis, and chronic non-inflammatory cole-ag-in-a induced arthritis increase over those observed for naive un-injected animals for all three types of joint pain.
Weibchen, aber keine Männchen mit chronischen degenerativen Gelenkschmerzen, zeigen ähnliche Reduktionen der dynamischen Gewichtshaltung im Voraus im Vergleich zu naiven Mäusen bei akuten und chronisch entzündlichen Gelenkschmerzen. Männchen mit akuten entzündlichen Gelenkschmerzen übertragen mehr Gewicht auf die 4 Gliedmaßen als naive Tiere. Das Gewicht, das sich auf die 4 Gliedmaßen auswirkt, nimmt bei weiblichen Mäusen im Vergleich zu naiven Tieren zu, nicht aber bei Männern mit chronischen degenerativen Gelenkschmerzen.
Sowohl bei Männern als auch bei Frauen mit chronischen degenerativen Gelenkschmerzen gibt es keinen Unterschied in der Zeit, die sie an den linken Hinterbeinen verbringen, im Vergleich zu naiven Tieren. Und Frauen mit chronischen degenerativen Gelenkschmerzen verbringen mehr Zeit auf der nicht-arthritischen rechten Hintergliedmaße als nicht injizierte Mäuse. Schließlich verbringen männliche Mäuse mit akuten entzündlichen Gelenkschmerzen und Weibchen mit chronischen degenerativen Gelenkschmerzen deutlich mehr Zeit auf ihren 4 Gliedmaßen als naive Tiere.
Die korrekte Identifizierung des hinteren Fußes der Tiere in Bezug auf seinen Körper ist sehr wichtig. Konzentrieren Sie sich auf das Hinterteil des Tieres und nicht auf den Kopf. Mit dieser Methode sind wir in der Lage, die Affektivität neuartiger, neuer interartikulärer Analgetika zu testen.
