La misurazione del dolore nei modelli preclinici di artrite è difficile, ma è essenziale per la valutazione dei trattamenti sia rigenerativi che analgesici. Il nostro protocollo è sensibile e riproducibile per la misurazione di comportamenti di dolore sia evocati che spontanei. Ed è semplice e relativamente economico.
L'artrite è il principale contributore alla disabilità e il dolore è la principale causa di disabilità. Il trattamento dell'artrite è attualmente inadeguato. I modelli precli clinici sono una parte importante dello sviluppo del trattamento.
A dimostrare questa procedura saranno Christopher Dorman, un tecnico, e Sandra Frizelle, una scienziata dello staff del mio laboratorio. Per evitare che l'ago venga inserito troppo profondamente e esci dal giunto posteriormente, copri un ago punto da 5 pollici con una torcia di tubi di polietilene fino a quando solo 2,5 millimetri dell'ago sporgono dalla tosta. Successivamente, radere la pelliccia dal ginocchio del topo anestetizzato da iniettare e sterilizzare la pelle esposta con lo scrub allo iodio povidone.
Quindi inserire l'ago intarsiato nell'articolazione a metà linea attraverso il tendine patellare appena inferiore al bordo inferiore della rotula e iniettare la sostanza di interesse. Prima di valutare il dolore articolare evocato, utilizzare un livello altimetrico 4 per esercitarsi ad applicare settecento grammi di forze per centimetro al quadrato di pressione costante e ferma. Il dispositivo emetterà 4 segnali di sicurezza quando viene applicato il livello di pressione appropriato.
Quando la pressione appropriata può essere applicata in modo affidabile, scruffare il mouse al collo con l'indice e il pollice abbastanza strettamente da evitare movimenti casuali. E usa la quarta e la quinta dita per trattenere la coda. Il mouse dovrebbe essere in grado di fare movimenti discreti e brevi con sforzo e quando stimolato, ma non dovrebbe essere in grado di muoversi liberamente o continuamente.
Somministrare ripetute palpazioni ferme contemporaneamente ai lati laterali e mediali di ogni ginocchio con il pollice e l'indice della mano libera all'incirca la linea articolare una volta al secondo per 1 minuto. E far contare a un osservatore il numero di volte in cui l'animale vocalizza e combatte per sfuggire alla moderazione durante questo periodo di applicazione della pressione di 1 minuto. La somma dei morsi e delle vocalizzazioni è considerata la partitura del dolore evocato.
Aprire l'avanzato programma software di cuscinetto dinamico del peso e selezionare Mouse"come tipo di sensore. Prima di ogni esperimento, selezionare la calibrazione completa"sotto il menu di calibrazione. E immettere zero"per il valore della tara.
E il peso del cuscinetto in schiuma, della scheda in fibra a media densità, del becher di plastica e dell'acqua come peso di calibrazione. Selezionare next"and tare"E coprire il pad del sensore con il cuscinetto in schiuma, la scheda in fibra di media densità e il becher di plastica dell'acqua. Quando tutti i materiali sono stati posizionati sul pad del sensore, selezionare l'anteprima del guadagno"E regolare il peso di calibrazione fino a quando non viene distribuito uniformemente tra i singoli sensori.
Quando il valore dell'indicatore di calibrazione è superiore a novantacinque, selezionare la definizione del guadagno"per produrre una media normalizzata per i singoli sensori e confermare l'integrità dei sensori. Quindi, selezionare avanti"e salvare il file di calibrazione nella cartella di calibrazione. Selezionare new" e immettere i nomi del progetto e degli animali per il primo mouse da testare.
Selezionare sfoglia"e aprire il file di calibrazione creato per il progetto. Quindi, selezionare avanti"conferma che abilita acquisizione video" è selezionato, quindi selezionare ok"Avanti, pesare l'animale. Selezionare capture"e registrare il peso nel software.
Dopo aver selezionato ok"posizionare il mouse nella camera per 5 minuti. E selezionare launch"Il software registrerà l'attività dell'animale, acquisterà un video e si sincronizzarà con i dati del sensore e partizionerà automaticamente il video in segmenti aalizzabili e non aalizzabili. Alla fine del periodo di dosaggio, selezionare un punteggio facile"e un'impostazione di pausa indipendente"E selezionare avanti veloce"per passare al primo segmento aalizzabile.
Se in una zona stabile non è identificata la zampa corretta, tenere premuto il cursore su tale zona e premere il tasto di scelta rapida appropriato corrispondente alla parte corretta del corpo. L'avanzato software di cuscinetto dinamico del peso calcolerà automaticamente la percentuale di tempo analizzato trascorso e la percentuale di peso corporeo posizionata su ciascuno dei 4 arti. Quindi selezionare risultati "export" e yes"per esportare le prime 5 righe di dati di riepilogo nel programma di foglio di calcolo appropriato.
Per ogni animale aggiuntivo nello stesso gruppo, selezionare nuovo" e immettere un nome di animale univoco senza modificare il nome del progetto. Quindi cattura l'attività di ogni animale nella camera come appena dimostrato. Punteggi di dolore evocati per l'artrite acuta infiammatoria-a-gene-a indotta, l'artrite infiammatoria cronica completa f-roy-nes add-jav-ent indotta e l'artrite cronica non infiammatoria cole-ag-in-a indotta aumentano rispetto a quelli osservati per animali ingenui non iniettati per tutti e tre i tipi di dolori articolari.
Le femmine, ma non i maschi con dolori cronici degenerativi articolari, dimostrano riduzioni simili nelle misure di sopportazione dinamica anticipata del peso rispetto ai topi ingenui nel dolore articolare infiammatorio acuto e cronico. I maschi con dolori articolari infiammatori acuti trasferiscono più peso ai 4 arti rispetto agli animali ingenui. Il peso che porta sui 4 arti aumenta nei topi femmine rispetto agli animali ingenui, ma non nei maschi con dolori articolari degenerativi cronici.
Sia nei maschi che nelle femmine con dolori cronici degenerativi articolari, non c'è differenza di tempo trascorso sugli arti posteriori sinistro rispetto agli animali ingenui. E le femmine con dolore cronico degenerativo articolare trascorrono più tempo sull'arto posteriore destro non artritico rispetto ai topi non iniettati. Infine, i topi maschi con dolori articolari infiammatori acuti e le femmine con dolore cronico degenerativo articolare trascorrono molto più tempo sui loro 4 arti rispetto agli animali ingenui.
La corretta identificazione del posteriore dei piedi dell'animale in relazione al suo corpo è molto importante. Concentrati sul posteriore dell'animale piuttosto che sulla sua testa. Con questo metodo, siamo in grado di testare l'affettività di nuovi analgesici inter-articolari.
