Este protocolo de un modelo de enfermedad que se ve infección por el virus del dengue en el cerebro se convierte en una plataforma in vivo para la detección de vectores virales y de huésped asociados con la neuropaogénesis. A diferencia de los modelos anteriores, nuestros modelos utilizan herramientas de la infección con un título viral bajo, para infectar a los ratones lecantes del Instituto de Investigación del Cáncer para la inducción de la enfermedad encefalética. Demostrando el procedimiento será Ting-Jing Shen, un candidato al doctorado de mi laboratorio.
Antes de iniciar el procedimiento de infección, diluir el virus del dengue no adaptado dos poblaciones, a una por 10 a la quinta placa formando unidades por cada 40 microlitros de RPMI 1640 concentración media. A continuación, cargue una jeringa de 0,3 mililitros equipada con una aguja de calibre 30 con 10 microlitros de virus diluidos. Y una jeringa de 0,3 mililitros equipada con una aguja de calibre 30, con 30 microlitros de virus por animal.
Para la entrega intercerebral del virus, presione el oráculo entre el pulgar y el dedo índice para restringir suavemente un ratón del Instituto de Investigación del Cáncer de siete días de edad en una posición propensa e inyecte el volumen de 10 microlitro del virus diluido en el área lambda, en la intersección de la sutura sagital y lambdoide. Después de la inyección intercerebral, utilice el pulgar y el dedo índice para sostener el ratón en una posición supina, y suavemente intraperitonealmente, inyectar el volumen de 30 microlitros del virus diluido, en el abdomen murino. Para la puntuación de la progresión de la enfermedad, asigne una puntuación de cero a cinco a cada ratón inoculado diariamente, de acuerdo con el grado de enfermedades víricas agudas similares a la encefalitis, y trazar las puntuaciones de cada día como una figura basada en curva, utilizando la media más y menos la desviación estándar de las puntuaciones de la prueba diaria en cada grupo.
En comparación con los cambios de peso corporal medidos en ratones simulados, medianos solo inoculados, los animales inoculados del virus del dengue presentan una disminución del peso corporal en cada momento durante el ensayo. Además, los animales infectados por el virus del dengue demuestran un aumento significativo en las posturas de espalda encorvaidas, convulsiones límbicas, debilidad límbica, parálisis y muerte en comparación con los síntomas mostrados por animales inoculados simulados. De hecho, los ratones infectados por el dengue presentan una reducción dependiente del tiempo en las tasas de supervivencia que no se observa en animales simulados inoculados, lo que confirma el establecimiento de un modelo infeccioso del virus del dengue dentro del sistema nervioso central que demuestra la progresión de enfermedades similares a la encefalitis viral aguda en ratones.
La punción del sitio equivocado puede resultar en la obstrucción de la aguja por la puntuación y el desbordamiento de la solución de virus fuera de la cabeza, lo que resulta en una inyección fallida y una infección fallida. Después del procedimiento, las muestras cerebrales se pueden cosechar para detectar daños patológicos, infiltración de células inmunitarias y análisis de replicación viral por citometría de flujo de tinción de hematoxilina y eosina, y ensayo de formación de placas, respectivamente. Nuestro modelo de murino inmunocompetente, proporciona una plataforma para explorar los mecanismos patógenos de la infección por el virus del dengue, para el desarrollo de vacunas contra el virus del dengue, o fármacos contra el virus del dengue.
El virus del dengue es un patógeno de nivel dos de bioseguridad y, como tal, todos los experimentos con este virus deben completarse en un laboratorio de nivel dos de bioseguridad animal cualificado.
