La simultáneación y las interacciones de líneas entre el cerebro y la microbiota intestinal sigue siendo desconocida. Utilice esta técnica, alteraciones en la microbiota intestinal después de lesión cerebral traumática en ratones se pueden examinar. La principal ventaja de esta técnica es que es relativamente simple y eficiente.
Demostrando el procedimiento estará Wendong You, un estudiante graduado de mi laboratorio. Para la inducción de lesiones cerebrales traumáticas, confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie en un ratón anestesiado, y aplique ung ón en los ojos del animal. Después del afeitado, desinfecta la piel expuesta del cuero cabelludo con 70% de etanol antes de incitar el cuero cabelludo en un plano sagital.
Usando fórceps, retraiga la incisión en ambos lados y separe ligeramente el periosteo. Utilice un marcador para dibujar un círculo de tres milímetros de diámetro en el área parietal derecha del cráneo a dos milímetros de distancia de la línea media. Utilice un taladro eléctrico para penetrar cuidadosamente el cráneo sin dañar la dura.
Retire el colgajo óseo para exponer una ventana ósea de tres milímetros y coloque una cánula de lesión plástica sobre la craneotomía. Después de cementar la cánula al cráneo con acrílico dental, utilice una jeringa de cinco mililitros para llenar la cánula con solución salina estéril 0,9%normal, teniendo cuidado de evitar burbujas. Encienda el osciloscopio y el amplificador.
Confirme que el tubo de alta presión del dispositivo de lesión de percusión de fluido lateral está libre de burbujas de aire, y entregue alrededor de 10 pulsos de prueba, hasta que el dispositivo dé una señal estable. Ajuste el ángulo de la posición inicial del péndulo para alcanzar una intensidad de pulso de aproximadamente dos atmósferas estándar y conecte la cánula de lesión al dispositivo de lesión de percusión fluida lateral. Apriete el gatillo para liberar el péndulo, induciendo la lesión cerebral.
A continuación, obtenga y transmita un pulso a la dura a través de todo el sistema de tubos cerrado y lleno de líquido. Después de la inducción de la lesión cerebral, retire la cánula y sutura la incisión. A continuación, coloque el ratón sobre una almohadilla de calefacción con supervisión hasta que esté ambulatorio, antes de devolver el animal a su jaula de origen con acceso ad libitum a alimentos y agua.
En los puntos de tiempo experimental indicados, exponga los intestinos de acuerdo con los protocolos estándar y utilice fórceps atraumáticos para separar suavemente el cecum de los otros tracto intestinales. Cuando el tejido ha sido localizado, cortar el cecum con tijeras afiladas y extraer manualmente el contenido de cecum en un apósito estéril. A continuación, transfiera el contenido a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros, para un almacenamiento de menos 80 grados Celsius hasta el análisis del microbioma.
La secuenciación del ADN recombinante 16S demuestra una menor diversidad en la microbiota de cecum en ratones tres días después de una lesión cerebral traumática, con los taxones más abundantes dentro del contenido de cecum de los grupos de lesiones cerebrales falsas y traumáticas que se muestran en la figura. Además, la escala multidimensional no métrica revela cambios en la composición de la microbiota del cecum después de una lesión cerebral traumática. Recuerde mantener la dura intacta al perforar el cráneo, y ser suave al localizar y separar el caecum de otras vías intestinales.
Después de este procedimiento, se puede realizar la tinción y análisis de hematoxilina y eosina para examinar el cambio histológico y la respuesta inflamatoria dentro de las vías intestinales después de una lesión cerebral traumática.
