La evidencia experimental y clínica muestra que la reperfusión de isquemia hepática puede aumentar la formación de focos metastásicos mediante la circulación de células cancerosas y el crecimiento de la enfermedad micrometastática. Este modelo murino reproducible permite el estudio pertinente tanto del establecimiento de metástasis como del crecimiento del tumor preexistente en el hígado. La cirugía hepática, el sangrado y el shock séptico están asociados con la reperfusión de isquemia hepática y pueden afectar el crecimiento de la enfermedad metastásica.
Estas técnicas permiten el estudio de este fenómeno en un esfuerzo por diagnosticar y prevenir mejor el efecto perjudicial de la reperfusión de isquemia en el crecimiento tumoral en un entorno clínico. Después de confirmar una falta de respuesta a la pellizca del dedo del pie en un macho anestesado de ocho a 12 semanas de edad C57 negro 6 ratón, desinfectar la piel expuesta de la pared abdominal con un exfoliante povidona-yodo y utilizar fórceps dentados para levantar la piel. Usando un bisturí quirúrgico, haz una incisión de línea media en la piel y levanta el músculo abdominal y el peritoneo para facilitar la creación de una incisión de línea media de tres centímetros para exponer el contenido abdominal.
Después de colocar un hemostat a ambos lados de la incisión y debajo del proceso de xifoide, tire y pegue la cola hacia abajo para extender el abdomen y use un aplicador de punta de algodón estéril de seis pulgadas para separar y exponer el bazo del tejido graso pancreático. A continuación, vórtice la suspensión de la célula cancerosa de interés para disociar cualquier grupo celular y cargar las células en una jeringa de insulina de 0,5 mililitros equipada con una aguja de calibre 28. Inyecte lentamente y cuidadosamente 100 microlitros de células en la punta del bazo, colocando una punta de algodón adyacente al lado de la punción de la aguja para absorber cualquier posible derrame tumoral en la cavidad peritoneal mientras agrega una presión suave para estabilizar el bazo durante la inyección.
Una inyección exitosa será evidente por un cambio en el color del hígado. Cuando todas las células hayan sido entregadas, coloque un pedazo de gasa estéril empapada por PBS sobre el área diseccionada y coloque el ratón en una almohadilla de calentamiento durante 15 minutos para permitir que las células cancerosas circulen dentro del sistema. Para inducir una isquemia y una lesión por reperfusión, utilice dos puntas de algodón humedecido para mover suavemente el intestino de la cavidad para exponer la vena porta y coloque el ratón bajo un microscopio diseccionador.
Levante la mediana y los lóbulos hepáticos laterales izquierdos contra el diafragma. Coloque un pequeño hisopo de algodón húmedo entre el lóbulo mediano y el lóbulo lateral derecho para crear suficiente espacio para sujetar y pasar cuidadosamente un vaso de fuerzas dilatadores detrás de la tríada del portal y, utilizando los fórceps dilatadores del vaso, utilice una pieza de 10 centímetros de sutura de polipropileno de 4-0 para pasar detrás y levantar la tríada del portal. Utilice un aplicador de abrazadera de micro-serifina con una cerradura para colocar una abrazadera microvascular a la izquierda y la mediana de los lóbulos hepáticos para ocluir todas las estructuras de la tríada del portal.
Cuando se observe blanqueo, retire la sutura de polipropileno 4-0 y el pequeño hisopo de algodón y devuelva cuidadosamente el intestino a la cavidad abdominal. Cubra la pared abdominal con una nueva pieza de gasa empapada en PBS y cubra la gasa con una envoltura de plástico para minimizar la pérdida evaporativa. A continuación, vuelva a colocar el ratón en la almohadilla calefactora durante 60 minutos.
A lo largo del intervalo isquémico, visualice el blanqueamiento pálido de los lóbulos medial, medial izquierdo y lateral derecho para confirmar la evidencia de la lesión de isquemia. Al final del período de lesión, retire la abrazadera. Para realizar una esplenectomía, levante cuidadosamente el bazo con fórceps lisos y utilice un dispositivo cautery de mano para cauterizar los vasos sanguíneos esplénicos para evitar el sangrado excesivo.
Transecte los vasos en la sección cauterizada para eliminar el bazo e inmediatamente utilizar 4-0 suturas de polipropileno para cerrar las incisiones musculares y de la piel en un patrón de sutura de doble capa. A continuación, vuelva a colocar el ratón en su jaula de inicio con monitoreo hasta la recuperación completa. El estrés quirúrgico aumenta significativamente la cantidad de micrometastas preestablecidas dentro del hígado.
Esta diferencia se observa incluso dos semanas después de la reperfusión de isquemia en comparación con los ratones no-isquemia reperfundidos. La reperfusión de isquemia hepática y la inyección de células tumorales pueden verse afectadas por la temperatura ambiente y la viabilidad celular, así que tenga cuidado de controlar estas variables. Esta técnica facilita el estudio de los efectos del estrés quirúrgico y la lesión hepática en el crecimiento de la enfermedad metastásica.
Esto ayudará a los investigadores a comprender mejor el fenómeno del crecimiento tumoral inducido por la cirugía.
