Agradecemos a Colby Carpenter y Spencer Mathias por su ayuda en el diseño de impresión 3D. Agradecemos a Ellen Klinger por su ayuda en la producción de las figuras fotográficas y a Jonathan B. Koch por brindar asistencia con las revisiones. El financiamiento fue proporcionado por la Unidad de Investigación de Biología, Manejo y Sistemática de Insectos Polinizadores del USDA-ARS.

1. Imprima estructuras trampa de polen
<ol><li>Descargue el archivo STL apropiado para la caja nido en la que anidan los abejorros (por ejemplo, colmenas de estilo Biobest o Koppert, https://www.ars.usda.gov/pacific-west-area/logan-ut/pollinating-insect-biology-management-systematics-research/docs/pollen-traps/). Los archivos están disponibles para el público, de forma gratuita para su descarga y modificación por parte del usuario final.</li>
	<li>Abra el archivo STL en el programa de impresora. Siga las instrucciones del fabricante de la impresora para crear los cuatro componentes de la trampa. NOTA: Espere aproximadamente 3 h para que el cuerpo de la trampa imprima, 2 h para que el recipiente de captura imprima y 30 minutos cada uno para que el filtro y el inserto del cierre de la trampa impriman. El tamaño del cuerpo de la trampa es de 6 cm x 3,8 cm x 7 cm.</li>
</ol>2. Montaje de trampas de polen
<ol><li>Retire las estructuras de soporte impresas con el cuerpo de la trampa y el recipiente de captura, incluidas las de la estructura del tamiz del cuerpo de la trampa (Figura 1).</li>
	<li>Use una broca de 3/16 de in (0.476 cm) montada en un taladro manual para limpiar cualquier hebra de plástico que cruce los bordes elevados del filtro de polen que pueda impedir que una abeja se mueva a través de los orificios del filtro. Use una cuchilla de afeitar de corte de caja y papel de lija para igualar cualquier protuberancia o bordes elevados en el lado plano del filtro de polen.</li>
	<li>Coloque el filtro de polen en el cuerpo de la trampa empujando suavemente el filtro de plástico a través de un lado del cuerpo de la trampa. El filtro solo encajará de una manera, ya que el lado izquierdo de la trampa tiene una abertura más grande para acomodar el paso de los conos de filtro elevados.<ol>
<li>Si las rendijas laterales son demasiado pequeñas para que el filtro de polen se deslice suavemente, raspe suficiente plástico lejos de la hendidura en el cuerpo de la trampa con una maquinilla de afeitar u otra herramienta que pueda eliminar pequeñas porciones de plástico a la vez. Asegúrese de que el filtro de polen se ajuste de forma segura en su lugar con no más de un espacio de 2 mm entre el filtro de polen y el cuerpo de la trampa.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Conecte el recipiente de captura al cuerpo de la trampa deslizando los bordes elevados en la parte inferior del cuerpo de la trampa en la ranura en la parte superior de la cuenca de captura. La cuenca de captura debe colocarse directamente debajo de la región del tamiz del cuerpo de la trampa (Figura 1A\u2012E).</li>
	<li>Realice las modificaciones adecuadas cortando o lijando el plástico para permitir una colocación suave y la eliminación del recipiente de captura del cuerpo de la trampa. La colocación de la cuenca de captura asegurará el filtro de polen en su lugar y no se puede quitar hasta que se retire la cuenca de captura, ni se puede insertar el filtro de polen mientras la cuenca de captura esté en su lugar. NOTA: Si se colocan varias colmenas cerca una de la otra, proporcionar a cada colmena una combinación de colores única del cuerpo de la trampa, la cuenca de captura y las estructuras de filtro de polen, además de desplegar colmenas con orientación variada, ayudará a los trabajadores que regresan a encontrar sus nidos.</li>
</ol>3. Preparación de colonias de abejorros
<ol><li>Detener la alimentación de polen 24\u201248 h antes de desplegar colonias. Esto hará que los trabajadores utilicen cualquier polen almacenado y los estimule a abandonar el nido en busca de polen.</li>
	<li>Prepare el cuerpo de la trampa de la colmena para la instalación insertando un inserto de cierre de trampa en la ranura del filtro para evitar que las abejas se escapen mientras instalan la trampa.</li>
	<li>Trabajando bajo luz roja para evitar que las abejas vuelen, levante la caja nido de plástico de la caja exterior de cartón.</li>
	<li>Ubique la entrada del nido de plástico en la parte delantera del nido. Hay dos estilos de entrada dependiendo del proveedor del nido: cajas de estilo Koppert (paso 3.5) y cajas de estilo Biobest (paso 3.6).</li>
	<li>Para las entradas de colmena de estilo Koppert, monte la trampa de polen en la entrada del nido tirando hacia arriba en la pestaña de entrada hasta que ambos orificios de entrada estén abiertos.<ol>
<li>Inserte los dos tubos de la trampa de polen en los orificios de entrada, asegurándose de que el tamiz de la trampa de polen esté en la parte inferior. Empuje suavemente hacia abajo la pestaña de entrada de plástico para asegurar la trampa de polen en su lugar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para instalar la trampa de polen en las entradas de la colmena de estilo Biobest, use un destornillador de cabeza plana para sacar suavemente el dispositivo de entrada de plástico de la caja nido. Inserte la trampa de polen en los orificios de entrada del nido hasta que la trampa de polen esté firmemente contra el nido (Figura 1E).<ol>
<li>Asegure la trampa al nido con cinta adhesiva o pegamento seco rápido donde la trampa entre en contacto con la caja nido si es necesario.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Devuelva la caja nido de plástico a la caja de cartón. Es posible que sea necesario cortar el cartón para acomodar la trampa de polen.</li>
</ol>4. Despliegue de nidos
<ol><li>Coloque cajas nido en el área de estudio. Proporcionar cobertura para proteger de las precipitaciones y el anclaje para el viento, ya que estos pueden afectar negativamente la calidad y cantidad de polen que se recoge. Proporcione colmenas colocadas en invernaderos con una cubierta solar adecuada para reducir el sobrecalentamiento.</li>
	<li>Retire el inserto de cierre de la trampa del cuerpo de la trampa para permitir que las abejas se forrajeen libremente para que los recolectores puedan orientarse con el área circundante y la ubicación de su nido. El tiempo de vuelo de orientación debe completarse en 24 h en condiciones normales.</li>
</ol>5. Recolección de polen
<ol><li>Para activar la trampa, deslice el filtro de polen en la ranura del filtro, asegurándose de que esté bien colocado.</li>
	<li>Instale el recipiente de captura deslizándolo sobre el cuerpo de la trampa desde la parte delantera hasta que esté completamente cerrado. Si el recipiente de captura está excesivamente suelto o se cae del cuerpo de la trampa, use una banda elástica para asegurarlo al cuerpo de la trampa.</li>
	<li>Observe a las abejas entrando y saliendo de la trampa de polen en el primer despliegue para asegurarse de que los orificios del filtro de polen sean lo suficientemente grandes como para acomodar a las abejas.<ol>
<li>Si los trabajadores no pueden pasar a través del filtro de polen, retire el filtro y luego use brocas de más de 3/16 de in (0.476 cm) para aumentar el tamaño de los agujeros. Hágalo de manera secuencial, aumentando el diámetro del orificio 1/32 in (0.079 cm) cada vez, ya que los agujeros que son demasiado grandes no recogerán ningún polen.</li>
		<li>Una vez que las abejas puedan pasar a través del filtro, continúe observando la entrada para asegurarse de que el polen se elimine al volver a entrar. NOTA: Las abejas deben tener alguna dificultad para moverse a través de los orificios del filtro de polen, especialmente las primeras veces que pasan. Si pasan con demasiada facilidad, el polen no puede ser desalojado de los corbículos.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Después del período designado de recolección de polen, deslice y retire la cuenca de captura del cuerpo de la trampa.</li>
	<li>Procese las cargas de polen de acuerdo con su diseño experimental.</li>
	<li>Retire el filtro de polen para permitir que los trabajadores se forrajeen libremente hasta el próximo período de recolección de polen. El cuerpo de la trampa puede permanecer unido a la colmena durante la duración del experimento. NOTA: Las trampas de polen pueden ser activadas durante el tiempo que el investigador desee recolectar polen de una colonia. Sin embargo, el despliegue de trampas de polen durante más de 24 horas en una semana puede provocar la inanición de la cría en una colmena y retrasar el desarrollo de la colonia.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Michener, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The bees of the world. , (2000).</li><li>Corbet, S. A., Williams, I. H., Osborne, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bees+and+the+pollination+of+crops+and+wild+flowers+in+the+European+Community.">Bees and the pollination of crops and wild flowers in the European Community.</a> Bee world. 72 (2), 47-59 (1991).</li><li>Cameron, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+widespread+decline+in+North+American+bumble+bees.">Patterns of widespread decline in North American bumble bees.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (2), 662-667 (2011).</li><li>Goulson, D., Nicholls, E., Bot&#237;as, C., Rotheray, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bee+declines+driven+by+combined+stress+from+parasites,+pesticides,+and+lack+of+flowers.">Bee declines driven by combined stress from parasites, pesticides, and lack of flowers.</a> Science. 347 (6229), 1255957 (2015).</li><li>Jha, S., Stefanovich, L. E. V., Kremen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bumble+bee+pollen+use+and+preference+across+spatial+scales+in+human-altered+landscapes.">Bumble bee pollen use and preference across spatial scales in human-altered landscapes.</a> Ecological Entomology. 38 (6), 570-579 (2013).</li><li>Thomson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competitive+interactions+between+the+invasive+European+honey+bee+and+native+bumble+bees.">Competitive interactions between the invasive European honey bee and native bumble bees.</a> Ecology. 85 (2), 458-470 (2004).</li><li>Kleijn, D., Raemakers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+analysis+of+pollen+host+plant+use+by+stable+and+declining+bumble+bee+species.">A retrospective analysis of pollen host plant use by stable and declining bumble bee species.</a> Ecology. 89 (7), 1811-1823 (2008).</li><li>Harmon-Threatt, N. H., Kremen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bumble+bees+selectively+use+native+and+exotic+species+to+maintain+nutritional+intake+across+highly+variable+and+invaded+floral+resource+pools.">Bumble bees selectively use native and exotic species to maintain nutritional intake across highly variable and invaded floral resource pools.</a> Ecological Entomology. 40, 471-478 (2015).</li><li>Harmon-Threatt, N. H., Valpine, P., Kremen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+resource+preferences+of+a+native+bumblebee:+the+effects+of+availability+and+use-availability+models+on+preference+estimates.">Estimating resource preferences of a native bumblebee: the effects of availability and use-availability models on preference estimates.</a> Oikos. , (2016).</li><li>Martin, A. P., Carreck, N. M. L., Swain, J. L., Goulson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+system+for+trapping+and+mass-marking+bumblebees:+applications+for+studying+food+choice+and+foraging+range.">A modular system for trapping and mass-marking bumblebees: applications for studying food choice and foraging range.</a> Apidologie. 37, (2006).</li><li>Saifuddin, M., Jha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colony-level+variation+in+pollen+collection+and+foraging+preferences+among+wild-caught+bumble+bees.+(Hymenoptera:+Apidae).">Colony-level variation in pollen collection and foraging preferences among wild-caught bumble bees. (Hymenoptera: Apidae).</a> Environmental Entomology. 42 (2), 393-401 (2014).</li><li>Heinrich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bumblebee Economics. , (2004).</li><li>Leonhart, S. D., Bluthgen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+same,+but+different:+pollen+foraging+in+honeybee+and+bumblebee+colonies.">The same, but different: pollen foraging in honeybee and bumblebee colonies.</a> Apidologie. 43, (2012).</li><li>Kriesell, L., Hilpert, A., Leonhardt, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+but+the+same:+bumblebee+species+collect+pollen+of+different+plant+sources+but+similar+amino+acid+profiles.">Different but the same: bumblebee species collect pollen of different plant sources but similar amino acid profiles.</a> Apidologie. 48, 102-116 (2017).</li><li>Al-Tikrity, W. S., Benton, A. W., Hillman, R. C., Clarke, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+the+amount+of+unsealed+brood+in+honeybee+colonies+and+their+pollen+collection.">The relationship between the amount of unsealed brood in honeybee colonies and their pollen collection.</a> Journal of Apicultural Research. 11 (1), 9-12 (1972).</li><li>Spaethe, J., Weidenm&#252;ller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+variation+and+foraging+rate+in+bumblebees+(Bombus+terrestris).">Size variation and foraging rate in bumblebees (Bombus terrestris).</a> Insectes Sociaux. 49 (2), 142-146 (2002).</li><li>Goodwin, R. M., Perry, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+pollen+traps+to+investigate+the+foraging+behaviour+of+honey+bee+colonies+in+kiwifruit.">Use of pollen traps to investigate the foraging behaviour of honey bee colonies in kiwifruit.</a> New Zealand Journal of Crop and Horticulture Science. 20 (1), 23-26 (1992).</li><li>Chua, C. K., Leong, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 3D PRINTING AND ADDITIVE MANUFACTURING: Principles and Applications (with Companion Media Pack) of Rapid Prototyping. , (2014).</li><li>Kearns, C. A., Inouye, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Techniques for Pollination Biologists. , (1993).</li><li>Velthuis, H. H., van Doorn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+century+of+advances+in+bumblebee+domestication+and+the+economic+and+environmental+aspects+of+its+commercialization+for+pollination.">A century of advances in bumblebee domestication and the economic and environmental aspects of its commercialization for pollination.</a> Apidologie. 37 (4), 421-451 (2006).</li><li>Moisan-Deserres, J., Girard, M., Chagnon, M., Fournier, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pollen+loads+and+specificity+of+native+pollinators+of+lowbush+blueberry.">Pollen loads and specificity of native pollinators of lowbush blueberry.</a> Journal of Economic Entomology. 107 (3), 1156-1162 (2014).</li><li>Medler, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nest+of+Bombus+huntii+Greene+(Hymenoptera:+Apidae).">A nest of Bombus huntii Greene (Hymenoptera: Apidae).</a> Entomological News. 70, 179-182 (1959).</li><li>Husband, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+on+colony+of+bumblebee+species+(Bombus+spp).">Observation on colony of bumblebee species (Bombus spp).</a> Great Lakes Entomologist. 10, 83-85 (1977).</li><li>Buttermore, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+of+successful+Bombus+terrestris++(L),+(Hymenoptera:+Apidae)+colonies+in+Southern+Tasmania.">Observations of successful Bombus terrestris (L), (Hymenoptera: Apidae) colonies in Southern Tasmania.</a> Australian Journal of Entomology. 36, 251-254 (1997).</li><li>Goulson, D., Peat, J., Stout, J. C., Tucker, J., Darvill, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+alloethism+in+workers+of+the+bumblebee,+Bombus+terrestris,+be+explained+in+terms+of+foraging+efficiency.">Can alloethism in workers of the bumblebee, Bombus terrestris, be explained in terms of foraging efficiency.</a> Animal Behaviour. 64 (1), 123-130 (2002).</li><li>Couvillon, M. J., Jandt, J. M., Duong, N. H. I., Dornhaus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+worker+body+size+distribution+in+bumble+bee+(Bombus+impatiens)+colonies.">Ontogeny of worker body size distribution in bumble bee (Bombus impatiens) colonies.</a> Ecological Entomology. 35 (4), 424-435 (2010).</li><li>Russell, A. L., Morrison, S. J., Moschonas, E. H., Papaj, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+pollen+and+nectar+foraging+specialization+by+bumblebees+over+multiple+timescales+using+RFID.">Patterns of pollen and nectar foraging specialization by bumblebees over multiple timescales using RFID.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-13 (2017).</li><li>Hagbery, J., Nieh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individual+lifetime+pollen+and+nectar+foraging+preferences+in+bumble+bees.">Individual lifetime pollen and nectar foraging preferences in bumble bees.</a> Naturwissenschaften. 99 (10), 821-832 (2012).</li><li>Baur, A., Strange, J. P., Koch, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foraging+economics+of+the+Hunt+bumble+bee,+a+viable+pollinator+for+commercial+agriculture.">Foraging economics of the Hunt bumble bee, a viable pollinator for commercial agriculture.</a> Environmental Entomology. 48 (4), 799-806 (2019).</li><li>Winter, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importation+of+non-native+bumble+bees+into+North+America:+potential+consequences+of+using+Bombus+terrestris+and+other+non-native+bumble+bees+for+greenhouse+crop+pollination+in+Canada,+Mexico,+and+the+United+States.">Importation of non-native bumble bees into North America: potential consequences of using Bombus terrestris and other non-native bumble bees for greenhouse crop pollination in Canada, Mexico, and the United States.</a> San Francisco. 33, (2006).</li><li>Ruz, L., Herrera, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+observations+on+foraging+activities+of+Bombus+dahlbomii+and+Bombus+terrestris+(Hym:+Apidae)+on+native+and+non-native+vegetation+in+Chile.">Preliminary observations on foraging activities of Bombus dahlbomii and Bombus terrestris (Hym: Apidae) on native and non-native vegetation in Chile.</a> Acta Horticulturae. 561, 165-169 (2001).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La recolección de polen de las entradas de colonias de abejorros puede permitir una variedad de estudios ecológicos y agrícolas. Identificar las fuentes florales de las que los abejorros recolectan polen proporciona información valiosa y una visión de la diversidad de plantas que contribuyen a la dieta general de una colonia19. La identificación de la fuente de polen tiene implicaciones tanto para la producción agrícola como para los estudios de los servicios ecosistémicos en tierras...

Los abejorros (Bombus spp.) son insectos grandes y robustos que se encuentran en las regiones templadas, alpinas y árticas del mundo1. Son importantes para las comunidades de plantas y proporcionan un importante servicio de polinización para los cultivos agrícolas que visitan2. Las recientes disminuciones en la abundancia y distribución de varias especies han llevado su importancia como polinizadores a la vanguardia de la conciencia pública3. Los investigadores han identificado varios factores estresantes que probablemente contribuyen a la disminución de la población, incluida la falta de recursos florales diversos y abundantes en los que se alimentan los abejorros4. Identificar de qué especies de plantas se forrajean los abejorros permite a los investigadores y administradores de tierras comprender cómo los abejorros pueden estar respondiendo a los cambios en la disponibilidad de recursos, la competencia y las perturbaciones antropogénicas5,6.
Los estudios que investigan las preferencias de forrajeo de polen de los abejorros a menudo son realizados por investigadores que capturan abejas individuales que se alimentan de flores y luego eliminan las cargas de polen corbicular de los especímenes para su posterior procesamiento e identificación7,8,9,10. Si bien este método proporciona información sobre cómo una especie o un conjunto de especies de abejorros utiliza los recursos en un área7,requiere mucho tiempo y las diferencias potenciales en las preferencias entre las colmenas no se pueden discernir sin análisis moleculares adicionales para identificar la colonia de origen de la abeja forrajea11.
Para algunos estudios de dinámica de forrajeo, se desea realizar los estudios en colonias individuales; sin embargo, los nidos de abejorros silvestres generalmente se encuentran bajo tierra o a nivel del suelo, lo que los hace difíciles de localizar12. Las colmenas de abejorros producidas comercialmente proporcionan a los investigadores un mayor acceso y un mejor control experimental, y la eliminación del polen de los trabajadores todavía se lleva a cabo principalmente mediante la captura de recolectores a medida que regresan a la colmena y la eliminación manual de sus cargas de polen corbicular13,14. La eliminación del polen a mano de los corbículos de una abeja requiere mucho tiempo con un bajo rendimiento horario de polen, especialmente en las entradas de la colmena, donde la tasa de retorno de los recolectores de polen puede ser baja. Además, la eliminación manual del polen de las abejas puede provocar picaduras de trabajadores perturbados.
Las trampas de polen se han utilizado para la eliminación experimental del polen de las abejas melíferas durante décadas15; sin embargo, no se ha desarrollado un método pasivo para eliminar el polen de los abejorros. El principal obstáculo en el desarrollo de un mecanismo para eliminar el polen de los abejorros forrajeros que regresan es la gran variación de los tamaños de los trabajadores que existen en una colonia de abejorros16. Las trampas de polen de abeja melífera son efectivas en gran parte porque el tamaño del trabajador de la abeja melífera no varía mucho. Además, estas trampas requieren solo manipulaciones menores después de la instalación y no requieren que las abejas sean sacrificadas17. Esto se logra utilizando pantallas o superficies plásticas que desalojan el polen de las patas traseras de los trabajadores a medida que regresan a la colmena. Estas trampas eliminan solo una parte de las cargas de polen de los recolectores que regresan y los diversos diseños de los mismos dan como resultado eficiencias variadas en la recolección de polen. A medida que el polen se elimina de las patas de las abejas, cae a través de una pantalla y en un recipiente de recolección al que las abejas no tienen acceso, de modo que el investigador puede eliminarlo con solo una pequeña perturbación de la colmena.
El objetivo del presente estudio es adaptar las técnicas utilizadas para la recolección de polen de colmenas de abejas melíferas y aplicarlas a nidos de abejorros utilizando estructuras impresas en 3D y probar los diseños de trampas en colonias de Bombus huntii. El proceso de diseño siguió los supuestos de que las trampas deberían ser baratas de producir, adaptables a una variedad de especies de abejorros, causar un daño o perturbación mínimos a las abejas, y que la tasa de eliminación de polen debería exceder la recolección manual de polen. La tecnología de impresión tridimensional es versátil, de fácil acceso y una herramienta rentable que permite a los investigadores replicar y modificar objetos para fines específicos18. La técnica presentada aquí instruye al usuario a construir trampas de polen y colocarlas en colonias de abejorros disponibles comercialmente. Las trampas no están diseñadas para ser usé con colonias silvestres. Estas trampas eliminan pasivamente las cargas de polen corbicular de las patas traseras de los abejorros portadores de polen a medida que regresan a sus cajas nido.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:461px;" width="462">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:71px;">MakerBot Replicator+</td>
			<td style="width:87px;">MakerBot</td>
			<td style="width:87px;">Model PABH65</td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:71px;">MakerBot Tough Material</td>
			<td style="width:87px;">PLA Filament</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td>various colors</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:71px;">Nest Box</td>
			<td style="width:87px;">Biobest</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td>Not sold publicly without bee purchase</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a 3d printed pollen trap for bumble bee (bombus) hive entrances

Para verificar las fuentes vegetales de las que los abejorros se buscan polen, se deben recolectar individuos para eliminar sus cargas de polen corbicular para su análisis. Esto se ha hecho tradicionalmente mediante la red de recolectores en las entradas de los nidos o en las flores, enfriando las abejas en el hielo y luego eliminando las cargas de polen de los corbiculas con forrceps o un cepillo. Este método requiere mucho tiempo y mano de obra, puede alterar el comportamiento normal de búsqueda de alimento y puede provocar incidentes punzantes para el trabajador que realiza la tarea. Las trampas de polen, como las que se usan en las colmenas de abejas melíferas, recolectan el polen desalojando las cargas de polen corbicular de las patas de los trabajadores a medida que pasan a través de las pantallas en la entrada del nido. Las trampas pueden eliminar una gran cantidad de polen de las abejas forrajera que regresan con un trabajo mínimo, sin embargo, hasta la fecha no hay tal trampa disponible para su uso con colonias de abejorros. Los trabajadores dentro de una colonia de abejorros pueden variar en tamaño, lo que dificulta la selección del tamaño de las entradas para adaptar este mecanismo a las colmenas de abejorros criados comercialmente. Utilizando programas de diseño de impresión 3D, creamos una trampa de polen que elimina con éxito las cargas de polen corbicular de las patas de los recolectores de abejorros que regresan. Este método reduce significativamente la cantidad de tiempo requerido por los investigadores para recolectar polen de los recolectores de abejorros que regresan a la colonia. Presentamos el diseño, los resultados de las pruebas de eficiencia de eliminación de polen y sugerimos áreas de modificaciones para que los investigadores adapten las trampas a una variedad de especies de abejorros o diseños de cajas nido.

Se probaron ocho diseños diferentes de filtros de polen para determinar su eficacia y eficiencia en la eliminación de las cargas de polen corbicular de los trabajadores de abejorros que regresan. Todos los diseños tuvieron éxito en la eliminación de al menos una carga de polen corbicular de un recolector que regresa. Sin embargo, se encontró que algunos imponieron que los trabajadores salieran o ingresaran a la colmena o no eliminaron las cargas de polen(Tabla 1). Las trampas de polen con varios f...

Watch this Scientific Journal Video about A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances at JoVE.com

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

Presentamos un mecanismo no letal y automatizado para recolectar polen de los trabajadores de abejorros(Bombus)que regresan a una colmena. Se incluyen instrucciones para producir, preparar, instalar y usar los dispositivos. Mediante el uso de objetos impresos en 3D, la modificación del diseño fue oportuna, eficiente y permitió una respuesta rápida para las pruebas.

Una trampa de polen impresa en 3D para las entradas de la colmena deabejorros (Bombus)

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis.  ...

a-3d-printed-pollen-trap-for-bumble-bee-bombus-hive-entrances

Research

JoVE Journal

Biology

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee (Bombus) Hive Entrances

5.0K vistas.  Utah State University. Presentamos un mecanismo no letal y automatizado para recolectar polen de los trabajadores de abejorros(Bombus)que regresan a una colmena. Se incluyen instrucciones para producir, preparar, instalar y usar los dispositivos. Mediante el uso de objetos impresos en 3D, la modificación del diseño fue oportuna, eficiente y permitió una respuesta rápida para las pruebas.

Video: A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

A 3D System for Culturing Human Articular Chondrocytes in Synovial Fluid

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not regenerate very efficiently in vivo; and as a result, osteoarthritis leads to irreversible cartilage loss and is accompanied by chronic pain and immobility 1,2. Cartilage tissue engineering offers promising potential to regenerate and restore tissue function. This technology typically involves seeding chondrocytes into natural or synthetic scaffolds and culturing the resulting 3D construct in a balanced medium over a period of time with a goal of engineering a biochemically and biomechanically mature tissue that can be transplanted into a defect site in vivo 3-6. Achieving an optimal condition for chondrocyte growth and matrix deposition is essential for the success of cartilage tissue engineering. 
 In the native joint cavity, cartilage at the articular surface of the bone is bathed in synovial fluid. This clear and viscous fluid provides nutrients to the avascular articular cartilage and contains growth factors, cytokines and enzymes that are important for chondrocyte metabolism 7,8. Furthermore, synovial fluid facilitates low-friction movement between cartilaginous surfaces mainly through secreting two key components, hyaluronan and lubricin 9 10. In contrast, tissue engineered cartilage is most often cultured in artificial media. While these media are likely able to provide more defined conditions for studying chondrocyte metabolism, synovial fluid most accurately reflects the natural environment of which articular chondrocytes reside in.
 Indeed, synovial fluid has the advantage of being easy to obtain and store, and can often be regularly replenished by the body. Several groups have supplemented the culture medium with synovial fluid in growing human, bovine, rabbit and dog chondrocytes, but mostly used only low levels of synovial fluid (below 20&#37;) 11-25. While chicken, horse and human chondrocytes have been cultured in the medium with higher percentage of synovial fluid, these culture systems were two-dimensional 26-28. Here we present our method of culturing human articular chondrocytes in a 3D system with a high percentage of synovial fluid (up to 100&#37;) over a period of 21 days. In doing so, we overcame a major hurdle presented by the high viscosity of the synovial fluid. This system provides the possibility of studying human chondrocytes in synovial fluid in a 3D setting, which can be further combined with two other important factors (oxygen tension and mechanical loading) 29,30 that constitute the natural environment for cartilage to mimic the natural milieu for cartilage growth. Furthermore, This system may also be used for assaying synovial fluid activity on chondrocytes and provide a platform for developing cartilage regeneration technologies and therapeutic options for arthritis.

A 3D system of culturing human articular chondrocytes in high levels of synovial fluid is described. Synovial fluid reflects the most natural microenvironment for articular cartilage, and can be easily obtained and stored. This system thus can be used for studying cartilage regeneration and for screening therapeutics for treating arthritis.

Un sistema 3D para los condrocitos articulares humanos cultivo de líquido sinovial

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not ...

Investigación

Biología

Combined Immunofluorescence and DNA FISH on 3D-preserved Interphase Nuclei to Study Changes in 3D Nuclear Organization

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA FISH) represents the most direct way to visualize the location of gene loci, chromosomal sub-regions or entire territories in individual cells. This type of analysis provides insight into the global architecture of the nucleus as well as the behavior of specific genomic loci and regions within the nuclear space. Immunofluorescence, on the other hand, permits the detection of nuclear proteins (modified histones, histone variants and modifiers, transcription machinery and factors, nuclear sub-compartments, etc). The major challenge in combining immunofluorescence and 3D DNA FISH is, on the one hand to preserve the epitope detected by the antibody as well as the 3D architecture of the nucleus, and on the other hand, to allow the penetration of the DNA probe to detect gene loci or chromosome territories 1-5. Here we provide a protocol that combines visualization of chromatin modifications with genomic loci in 3D preserved nuclei.

Here we describe a protocol for simultaneous detection of histone modifications by immunofluorescence and DNA sequences by DNA FISH followed by 3D microscopy and analyses (3D immuno-DNA FISH).

Inmunofluorescencia y FISH Combinado de ADN en 3D conservados núcleos en interfase para estudiar los cambios en la organización nuclear 3D

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes  on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA  FISH) represents the ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees collect and convert to beebread by placing colonies in a specially constructed enclosed flight area. Methods were developed to analyze the protein and amino acid composition of the pollen and beebread. We also describe how consumption of the beebread was measured and methods used to determine adult worker bee hemolymph protein titers after feeding on beebread for 4, 7 and 11 days after emergence. Methods were applied to determine if genotype affects the conversion of pollen to beebread and the rate that bees consume and acquire protein from it. Two subspecies (European and Africanized honey bees; EHB and AHB respectively) were provided with the same pollen source. Based on the developed methods, beebread made by both subspecies had lower protein concentrations and pH values than the pollen. In general, amino acid concentrations in beebread made by either EHB or AHB were similar and occurred at higher levels in beebread than in pollen. Both AHB and EHB consumed significantly more of the beebread made by AHB than by EHB. Though EHB and AHB consumed similar amounts of each type of beebread, hemolymph protein concentrations in AHB were higher than in EHB. Differences in protein acquisition between AHB and EHB might reflect environmental adaptations related to the geographic region where each subspecies evolved. These differences could contribute to the successful establishment of AHB populations in the New World because of the effects on brood rearing and colony growth.

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

Los métodos para la comparación de Nutrientes en jalea real Realizado por africanizadas y europeas Honey Bees y los efectos sobre títulos hemolinfa de proteínas

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination services, as well as an important model social insect used to study memory and learning, aging, and more. Here we describe a detailed protocol for the dissection of the dorsal abdominal wall of a bee in order to visualize its dorsal vessel, which serves the role of the heart in the insect. A successful dissection will expose a functional heart that, under the proper conditions, can maintain a steady heartbeat for an extended period of time. This allows the investigator to manipulate heart rate through the application of cardiomodulatory compounds to the dorsal vessel. By using either a digital microscope or a microscope equipped with a digital camera, the investigator can make video recordings of the dorsal vessel before and after treatment with test compounds. The videos can then be scored at a time convenient to the user in order to determine changes in heart rate, as well as changes in the pattern of heartbeats, following treatment. The advantages of this protocol are that it is relatively inexpensive to set up, easy to learn, requires little space or equipment, and takes very little time to conduct.

The abdominal dorsal vessel of the honey bee and other insects serves as the functional equivalent of the mammalian heart and plays an important role in nutrient transport, waste removal, immune function, and more. Here we describe a protocol for the visualization and pharmacological manipulation of bee heart rate.

La disección y la observación de la abeja de la miel dorsal del recipiente de Estudios de la función cardiaca

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

Controles Colonia efectos de exposición a los pesticidas subletales en las abejas de miel

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Collection and Identification of Pollen from Honey Bee Colonies

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate pesticide exposure of bees via pollen. Described herein is an effective pollen-trapping method for collecting corbicular pollen from honey bees returning to their hives. This collection method results in large quantities of corbicular pollen that can be used for research purposes. Honey bees collect pollen from many plant species, but typically visit one species during each collection trip. Therefore, each corbicular pollen pellet predominantly represents one plant species, and each pollen pellet can be described by color. This allows the sorting of samples of corbicular pollen by color to segregate plant sources. Researchers can further classify corbicular pollen by analyzing the morphology of acetolyzed pollen grains for taxonomic identification. These methods are commonly used in studies related to pollinators such as pollination efficiency, pollinator foraging dynamics, diet quality, and diversity. Detailed methodologies are presented for collecting corbicular pollen using pollen traps, sorting pollen by color, and acetolyzing pollen grains. Also presented are results pertaining to the frequency of pellet colors and taxa of corbicular pollen collected from honey bees in five different cropping systems.

We describe methods for collecting corbicular pollen from honey bees as well as protocols for color sorting, acetolysis, and microscope slide preparation of pollen for taxonomic identification. In addition, we present pellet color and taxonomic diversity of corbicular pollen collected from five cropping systems using pollen traps.

Recolección e identificación de polen de colonias de abejas melíferas

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

Evaluación del riesgo agroquímico para las reinas de abejas melíferas apareadas

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of conditioned media remains time-consuming and far from physiological and pathological conditions. Although a few models of co-culture are commercially available, they remain restricted to specific assays and are mostly for two types of cells. 
Here, 3D-printed inserts are used that are compatible with numerous functional assays. The insert allows the separation of one well of a 6-well plate into four compartments. A wide range of combinations can be set. Moreover, windows are designed in each wall of the compartments so that potential intercellular communication between every compartment is possible in the culture medium in a volume-dependent manner. For example, paracrine intercellular communication can be studied between four cell types in monolayer, in 3D (spheroids), or by combining both. In addition, a mix of different cell types can be seeded in the same compartment in 2D or 3D (organoids) format. The absence of a bottom in the 3D-printed inserts allows the usual culture conditions on the plate, possible coating on the plate containing the insert, and direct visualization by optical microscopy. The multiple compartments provide the possibility to collect different cell types independently or to use, in each compartment, different reagents for RNA or protein extraction. In this study, a detailed methodology is provided to use the new 3D-printed insert as a co-culture system. To demonstrate several capacities of this flexible and simple model, previously published functional assays of cell communication were performed in the new 3D-printed inserts and were demonstrated to be reproducible. The 3D-printed inserts and the conventional cell culture using conditioned media led to similar results. In conclusion, the 3D-printed insert is a simple device that can be adapted to numerous models of co-cultures with adherent cell types.

In this paper, a newly designed 3D-printed insert is presented as a model of co-culture and validated through the study of the paracrine intercellular communication between endothelial cells and keratinocytes.

Un innovador inserto impreso en 3D diseñado para permitir cultivos celulares sencillos en 2D y 3D

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

Liberación de moléculas en plantas mediante un dispositivo de infusión directa

Direct Infusion Device for Molecule Delivery in Plants

Testing the function of therapeutic compounds in plants is an important component of agricultural research. Foliar and soil-drench methods are routine but have drawbacks, including variable uptake and the environmental breakdown of tested molecules. Trunk injection of trees is well-established, but most methods for this require expensive, proprietary equipment. To screen various treatments for Huanglongbing, a simple, low-cost method to deliver these compounds to the vascular tissue of small greenhouse-grown citrus trees infected with the phloem-limited bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) or infested with the phloem-feeding CLas insect vector Diaphorina citri Kuwayama (D. citri) is needed.
To meet these screening requirements, a direct plant infusion (DPI) device was designed that connects to the plant&#39;s trunk. The device is made using a nylon-based 3D-printing system and easily obtainable auxiliary components. The compound uptake efficacy of this device was tested in citrus plants using the fluorescent marker 5,6-carboxyfluorescein-diacetate. Uniform compound distribution of the marker throughout the plants was routinely observed.
Furthermore, this device was used to deliver antimicrobial and insecticidal molecules to determine their effects on CLas and D. citri respectively. The aminoglycoside antibiotic streptomycin was delivered into CLas-infected citrus plants using the device, which resulted in a reduction in the CLas titer from 2 weeks to 4 weeks post treatment. Delivering the neonicotinoid insecticide imidacloprid into D. citri-infested citrus plants resulted in a significant increase in psyllid mortality after 7 days. These results suggest that this DPI device represents a useful system for delivering molecules into plants for&#160;testing and facilitate research and screening purposes.

Autor destacado: Dispositivo de infusión directa para la administración de moléculas en plantas  

This manuscript describes a novel direct plant infusion device for screening the effectiveness of molecules against the bacteria (Candidatus Liberibacter asiaticus) or its insect vector (Diaphorina citri, Kuwayama) that, in combination, are associated with Huanglongbing citrus disease.

Dispositivo de infusión directa para la administración de moléculas en plantas

Testing the function of therapeutic compounds in plants is an important component of agricultural research. Foliar and soil-drench methods are routine but ...