Agradecemos a Colby Carpenter e Spencer Mathias por sua ajuda no design de impressão 3D. Agradecemos a Ellen Klinger pela ajuda na produção das figuras fotográficas e jonathan B. Koch por prestar assistência com as revisões. O financiamento foi fornecido pela Unidade de Pesquisa de Biologia, Manejo e Sistemática de Insetos polinizador do USDA-ARS.

1. Imprimir estruturas de armadilhas de pólen
<ol><li>Baixe o arquivo STL apropriado para a caixa de ninho em que as abelhas estão aninhando (por exemplo, colmeias estilo Biobest ou Koppert, https://www.ars.usda.gov/pacific-west-area/logan-ut/pollinating-insect-biology-management-systematics-research/docs/pollen-traps/). Os arquivos estão disponíveis ao público, gratuitos para download e modificação pelo usuário final.</li>
	<li>Abra o arquivo STL no programa de impressora. Siga as instruções do fabricante da impressora para construir os quatro componentes da armadilha. NOTA: Deixe aproximadamente 3h para o corpo da armadilha imprimir, 2h para a bacia de captura imprimir e 30 min cada para a inserção de fechamento do filtro e armadilha para imprimir. O tamanho do corpo da armadilha é de 6 cm x 3,8 cm x 7 cm.</li>
</ol>2. Montagem da armadilha de pólen
<ol><li>Remova as estruturas de suporte impressas com o corpo da armadilha e bacia de captura, incluindo as da estrutura de peneira do corpo da armadilha(Figura 1).</li>
	<li>Use uma broca de 0,476 cm montada em uma broca de mão para limpar quaisquer fios de plástico que cruzem as bordas elevadas do filtro de pólen que possam impedir uma abelha de se mover pelos orifícios do filtro. Use uma lâmina de barbear e lixa de corte de caixa para equilibrar quaisquer solavancos ou bordas levantadas no lado plano do filtro de pólen.</li>
	<li>Coloque o filtro de pólen no corpo da armadilha empurrando suavemente o filtro plástico através de um lado do corpo da armadilha. O filtro só caberá de uma forma, pois o lado esquerdo da armadilha tem uma abertura maior para acomodar a passagem dos cones do filtro levantado.<ol>
<li>Se as fendas laterais forem muito pequenas para o filtro de pólen deslizar suavemente, raspe o plástico suficiente da fenda no corpo da armadilha com uma navalha ou outra ferramenta que pode remover pequenas porções de plástico de cada vez. Certifique-se de que o filtro de pólen se encaixa firmemente no lugar com não mais do que uma lacuna de 2 mm entre o filtro de pólen e o corpo da armadilha.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Conecte a bacia de captura ao corpo da armadilha deslizando as bordas levantadas na parte inferior do corpo da armadilha para a ranhura no topo da bacia de captura. A bacia de captura deve ser posicionada diretamente sob a região da peneira do corpo da armadilha (Figura 1A\u2012E).</li>
	<li>Faça as modificações apropriadas cortando ou lixando o plástico para permitir a colocação suave e a remoção da bacia de captura do corpo da armadilha. A colocação da bacia de captura irá fixar o filtro de pólen no lugar e não pode ser removido até que a bacia de captura seja removida, nem o filtro de pólen possa ser inserido enquanto a bacia de captura estiver no local. NOTA: Se várias colmeias forem colocadas próximas umas das outras, fornecer a cada colmeia uma combinação de cores única do corpo da armadilha, bacia de captura e estruturas de filtro de pólen, além de implantar colmeias com orientação variada, ajudará os trabalhadores que retornam a encontrar seus ninhos.</li>
</ol>3. Preparação da colônia de abelhas bumble
<ol><li>Pare a alimentação por pólen 24\u201248 h antes de implantar colônias. Isso fará com que os trabalhadores usem qualquer pólen armazenado e os estimulem a deixar o ninho em busca de pólen.</li>
	<li>Prepare o corpo da armadilha da colmeia para instalação inserindo uma inserção de fechamento de armadilha no slot do filtro para evitar que as abelhas escapem durante a instalação da armadilha.</li>
	<li>Trabalhando sob luz vermelha para evitar que as abelhas voem, levante a caixa do ninho de plástico para fora da caixa externa de papelão.</li>
	<li>Localize a entrada do ninho de plástico na frente do ninho. Existem dois estilos de entrada dependendo do fornecedor do ninho: caixas estilo Koppert (etapa 3.5) e caixas estilo Biobest (passo 3.6).</li>
	<li>Para as entradas de colmeias estilo Koppert, monte a armadilha de pólen na entrada do ninho, puxando para cima na guia de entrada até que ambos os buracos de entrada estejam abertos.<ol>
<li>Insira os dois tubos da armadilha de pólen nos orifícios de entrada, garantindo que a peneira da armadilha do pólen esteja no fundo. Empurre suavemente para baixo na guia de entrada de plástico para fixar a armadilha de pólen no lugar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para instalar a armadilha de pólen nas entradas da colmeia estilo Biobest, use uma chave de fenda de cabeça plana para retirar suavemente o dispositivo de entrada de plástico da caixa do ninho. Insira a armadilha de pólen nos buracos de entrada do ninho até que a armadilha do pólen esteja firmemente contra o ninho(Figura 1E).<ol>
<li>Fixar a armadilha no ninho usando fita adesiva ou cola seca rápida onde a armadilha entra em contato com a caixa do ninho, se necessário.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Devolva a caixa do ninho de plástico para a caixa de papelão. O papelão pode precisar ser cortado para acomodar a armadilha do pólen.</li>
</ol>4. Implantação de ninhos
<ol><li>Coloque caixas de ninho na área de estudo. Fornecer cobertura para proteger contra precipitação e ancoragem para vento, pois estes podem afetar negativamente a qualidade e a quantidade de pólen que é coletado. Forneça colmeias colocadas em estufas com cobertura solar adequada para reduzir o superaquecimento.</li>
	<li>Remova a inserção de fechamento da armadilha do corpo da armadilha para permitir que as abelhas forrageiam livremente para que os invasores possam se orientar com a área circundante e a localização de seu ninho. O tempo de voo de orientação deve ser completo em 24 horas em condições normais.</li>
</ol>5. Coleta de pólen
<ol><li>Para engatar a armadilha, deslize o filtro de pólen para dentro da ranhura do filtro, garantindo que ela esteja bem no lugar.</li>
	<li>Instale a bacia de captura deslizando-a para o corpo da armadilha da frente até que esteja totalmente fechada. Se a bacia de captura estiver excessivamente solta ou cair do corpo da armadilha, use um elástico para fixá-la no corpo da armadilha.</li>
	<li>Observe as abelhas entrando e saindo da armadilha de pólen na primeira implantação para garantir que os orifícios do filtro de pólen sejam grandes o suficiente para acomodar as abelhas.<ol>
<li>Se os trabalhadores não conseguirem passar pelo filtro de pólen, remova o filtro e use brocas maiores que 0,476 cm para aumentar o tamanho dos furos. Faça isso de forma sequencial, aumentando o diâmetro do orifício 1/32 in. (0,079 cm) cada vez, pois os orifícios muito grandes não coletarão pólen.</li>
		<li>Uma vez que as abelhas são capazes de passar pelo filtro, continue a observar a entrada para garantir que o pólen esteja sendo removido após a reentrada. NOTA: As abelhas devem ter alguma dificuldade em se mover pelos orifícios do filtro de pólen, especialmente nas primeiras vezes que passam. Se eles passarem muito facilmente, o pólen pode não ser desalojado do corbiculado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Após o período designado de coleta de pólen, deslize e remova a bacia de captura do corpo da armadilha.</li>
	<li>Processe as cargas de pólen de acordo com seu projeto experimental.</li>
	<li>Remova o filtro de pólen para permitir que os trabalhadores forragem livremente até o próximo período de coleta de pólen. O corpo da armadilha pode permanecer preso à colmeia durante a duração do experimento. NOTA: Armadilhas de pólen podem ser engajadas enquanto o pesquisador desejar coletar pólen de uma colônia. No entanto, a implantação de armadilhas de pólen por mais de 24 h em uma semana pode resultar em fome de ninhada em um desenvolvimento de uma colmeia e colônia retardada.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Michener, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The bees of the world. , (2000).</li><li>Corbet, S. A., Williams, I. H., Osborne, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bees+and+the+pollination+of+crops+and+wild+flowers+in+the+European+Community.">Bees and the pollination of crops and wild flowers in the European Community.</a> Bee world. 72 (2), 47-59 (1991).</li><li>Cameron, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+widespread+decline+in+North+American+bumble+bees.">Patterns of widespread decline in North American bumble bees.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (2), 662-667 (2011).</li><li>Goulson, D., Nicholls, E., Bot&#237;as, C., Rotheray, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bee+declines+driven+by+combined+stress+from+parasites,+pesticides,+and+lack+of+flowers.">Bee declines driven by combined stress from parasites, pesticides, and lack of flowers.</a> Science. 347 (6229), 1255957 (2015).</li><li>Jha, S., Stefanovich, L. E. V., Kremen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bumble+bee+pollen+use+and+preference+across+spatial+scales+in+human-altered+landscapes.">Bumble bee pollen use and preference across spatial scales in human-altered landscapes.</a> Ecological Entomology. 38 (6), 570-579 (2013).</li><li>Thomson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competitive+interactions+between+the+invasive+European+honey+bee+and+native+bumble+bees.">Competitive interactions between the invasive European honey bee and native bumble bees.</a> Ecology. 85 (2), 458-470 (2004).</li><li>Kleijn, D., Raemakers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+analysis+of+pollen+host+plant+use+by+stable+and+declining+bumble+bee+species.">A retrospective analysis of pollen host plant use by stable and declining bumble bee species.</a> Ecology. 89 (7), 1811-1823 (2008).</li><li>Harmon-Threatt, N. H., Kremen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bumble+bees+selectively+use+native+and+exotic+species+to+maintain+nutritional+intake+across+highly+variable+and+invaded+floral+resource+pools.">Bumble bees selectively use native and exotic species to maintain nutritional intake across highly variable and invaded floral resource pools.</a> Ecological Entomology. 40, 471-478 (2015).</li><li>Harmon-Threatt, N. H., Valpine, P., Kremen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+resource+preferences+of+a+native+bumblebee:+the+effects+of+availability+and+use-availability+models+on+preference+estimates.">Estimating resource preferences of a native bumblebee: the effects of availability and use-availability models on preference estimates.</a> Oikos. , (2016).</li><li>Martin, A. P., Carreck, N. M. L., Swain, J. L., Goulson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+system+for+trapping+and+mass-marking+bumblebees:+applications+for+studying+food+choice+and+foraging+range.">A modular system for trapping and mass-marking bumblebees: applications for studying food choice and foraging range.</a> Apidologie. 37, (2006).</li><li>Saifuddin, M., Jha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colony-level+variation+in+pollen+collection+and+foraging+preferences+among+wild-caught+bumble+bees.+(Hymenoptera:+Apidae).">Colony-level variation in pollen collection and foraging preferences among wild-caught bumble bees. (Hymenoptera: Apidae).</a> Environmental Entomology. 42 (2), 393-401 (2014).</li><li>Heinrich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bumblebee Economics. , (2004).</li><li>Leonhart, S. D., Bluthgen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+same,+but+different:+pollen+foraging+in+honeybee+and+bumblebee+colonies.">The same, but different: pollen foraging in honeybee and bumblebee colonies.</a> Apidologie. 43, (2012).</li><li>Kriesell, L., Hilpert, A., Leonhardt, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+but+the+same:+bumblebee+species+collect+pollen+of+different+plant+sources+but+similar+amino+acid+profiles.">Different but the same: bumblebee species collect pollen of different plant sources but similar amino acid profiles.</a> Apidologie. 48, 102-116 (2017).</li><li>Al-Tikrity, W. S., Benton, A. W., Hillman, R. C., Clarke, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+the+amount+of+unsealed+brood+in+honeybee+colonies+and+their+pollen+collection.">The relationship between the amount of unsealed brood in honeybee colonies and their pollen collection.</a> Journal of Apicultural Research. 11 (1), 9-12 (1972).</li><li>Spaethe, J., Weidenm&#252;ller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+variation+and+foraging+rate+in+bumblebees+(Bombus+terrestris).">Size variation and foraging rate in bumblebees (Bombus terrestris).</a> Insectes Sociaux. 49 (2), 142-146 (2002).</li><li>Goodwin, R. M., Perry, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+pollen+traps+to+investigate+the+foraging+behaviour+of+honey+bee+colonies+in+kiwifruit.">Use of pollen traps to investigate the foraging behaviour of honey bee colonies in kiwifruit.</a> New Zealand Journal of Crop and Horticulture Science. 20 (1), 23-26 (1992).</li><li>Chua, C. K., Leong, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 3D PRINTING AND ADDITIVE MANUFACTURING: Principles and Applications (with Companion Media Pack) of Rapid Prototyping. , (2014).</li><li>Kearns, C. A., Inouye, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Techniques for Pollination Biologists. , (1993).</li><li>Velthuis, H. H., van Doorn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+century+of+advances+in+bumblebee+domestication+and+the+economic+and+environmental+aspects+of+its+commercialization+for+pollination.">A century of advances in bumblebee domestication and the economic and environmental aspects of its commercialization for pollination.</a> Apidologie. 37 (4), 421-451 (2006).</li><li>Moisan-Deserres, J., Girard, M., Chagnon, M., Fournier, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pollen+loads+and+specificity+of+native+pollinators+of+lowbush+blueberry.">Pollen loads and specificity of native pollinators of lowbush blueberry.</a> Journal of Economic Entomology. 107 (3), 1156-1162 (2014).</li><li>Medler, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nest+of+Bombus+huntii+Greene+(Hymenoptera:+Apidae).">A nest of Bombus huntii Greene (Hymenoptera: Apidae).</a> Entomological News. 70, 179-182 (1959).</li><li>Husband, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+on+colony+of+bumblebee+species+(Bombus+spp).">Observation on colony of bumblebee species (Bombus spp).</a> Great Lakes Entomologist. 10, 83-85 (1977).</li><li>Buttermore, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+of+successful+Bombus+terrestris++(L),+(Hymenoptera:+Apidae)+colonies+in+Southern+Tasmania.">Observations of successful Bombus terrestris (L), (Hymenoptera: Apidae) colonies in Southern Tasmania.</a> Australian Journal of Entomology. 36, 251-254 (1997).</li><li>Goulson, D., Peat, J., Stout, J. C., Tucker, J., Darvill, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+alloethism+in+workers+of+the+bumblebee,+Bombus+terrestris,+be+explained+in+terms+of+foraging+efficiency.">Can alloethism in workers of the bumblebee, Bombus terrestris, be explained in terms of foraging efficiency.</a> Animal Behaviour. 64 (1), 123-130 (2002).</li><li>Couvillon, M. J., Jandt, J. M., Duong, N. H. I., Dornhaus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+worker+body+size+distribution+in+bumble+bee+(Bombus+impatiens)+colonies.">Ontogeny of worker body size distribution in bumble bee (Bombus impatiens) colonies.</a> Ecological Entomology. 35 (4), 424-435 (2010).</li><li>Russell, A. L., Morrison, S. J., Moschonas, E. H., Papaj, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+pollen+and+nectar+foraging+specialization+by+bumblebees+over+multiple+timescales+using+RFID.">Patterns of pollen and nectar foraging specialization by bumblebees over multiple timescales using RFID.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-13 (2017).</li><li>Hagbery, J., Nieh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individual+lifetime+pollen+and+nectar+foraging+preferences+in+bumble+bees.">Individual lifetime pollen and nectar foraging preferences in bumble bees.</a> Naturwissenschaften. 99 (10), 821-832 (2012).</li><li>Baur, A., Strange, J. P., Koch, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foraging+economics+of+the+Hunt+bumble+bee,+a+viable+pollinator+for+commercial+agriculture.">Foraging economics of the Hunt bumble bee, a viable pollinator for commercial agriculture.</a> Environmental Entomology. 48 (4), 799-806 (2019).</li><li>Winter, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importation+of+non-native+bumble+bees+into+North+America:+potential+consequences+of+using+Bombus+terrestris+and+other+non-native+bumble+bees+for+greenhouse+crop+pollination+in+Canada,+Mexico,+and+the+United+States.">Importation of non-native bumble bees into North America: potential consequences of using Bombus terrestris and other non-native bumble bees for greenhouse crop pollination in Canada, Mexico, and the United States.</a> San Francisco. 33, (2006).</li><li>Ruz, L., Herrera, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+observations+on+foraging+activities+of+Bombus+dahlbomii+and+Bombus+terrestris+(Hym:+Apidae)+on+native+and+non-native+vegetation+in+Chile.">Preliminary observations on foraging activities of Bombus dahlbomii and Bombus terrestris (Hym: Apidae) on native and non-native vegetation in Chile.</a> Acta Horticulturae. 561, 165-169 (2001).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A coleta de pólen das entradas de colônias de abelhas podem permitir uma variedade de estudos ecológicos e agrícolas. Identificar as fontes florais das quais as abelhas bumble coletam pólen fornece informações valiosas e insights sobre a diversidade de plantas que contribuem para a dieta geral de uma colônia19. Identificar a fonte de pólen tem implicações tanto para a produção agrícola quanto para estudos de serviços ecossistêmicos em terras silvestres12<sup...

As abelhas bumble(Bombus spp.) são grandes insetos robustos que são encontrados nas regiões temperadas, alpinas e árticas do mundo1. São importantes para plantar comunidades e fornecer importantes serviços de polinização para as culturas agrícolas que visitam2. Declínios recentes na abundância e distribuição de várias espécies trouxeram sua importância como polinizadores à vanguarda da conscientização pública3. Pesquisadores identificaram vários estressores que provavelmente estão contribuindo para o declínio populacional, incluindo a falta de recursos florais diversos e abundantes nos quais as abelhas se forragem4. Identificar de quais espécies de plantas as abelhas desossa permitem que pesquisadores e gestores de terras entendam como as abelhas podem estar respondendo a mudanças na disponibilidade de recursos, competição e distúrbios antropogênicos5,6.
Estudos que investigam as preferências de forrageamento de pólen de abelhas bumble são frequentemente conduzidos por pesquisadores capturando abelhas individuais forrageando flores e, em seguida, removendo as cargas de pólen corbicular de espécimes para posterior processamento e identificação7,8,9,10. Embora este método forneça uma visão de como uma espécie ou um conjunto de espécies de abelhas bumble utiliza os recursos em uma área7, é tempo de que as diferenças intensivas e potenciais nas preferências entre as colmeias não podem ser discernidas sem análises moleculares adicionais para identificar colônia de origem da abelha forrageiras11.
Para alguns estudos de dinâmica de forrageamento, deseja-se realizar os estudos em colônias individuais; no entanto, os ninhos de abelhas selvagens estão geralmente localizados no subsolo ou no nível do solo, tornando-os difíceis de localizar12. As colmeias de abelhas bumble produzidas comercialmente fornecem aos pesquisadores maior acesso e melhor controle experimental e a remoção do pólen dos trabalhadores ainda é conduzida principalmente pela captura de forasteiros à medida que retornam à colmeia e removem manualmente suas cargas de pólen corbicular13,14. A remoção de pólen à mão do corbicula de uma abelha é intensiva em tempo com baixo rendimento por hora de pólen especialmente nas entradas da colmeia onde a taxa de indagas de pólen que retornam pode ser baixa. Além disso, a remoção manual do pólen das abelhas pode resultar em picadas de trabalhadores perturbados.
Armadilhas de pólen têm sido usadas para remoção experimental de pólen de abelhas de mel por décadas15; ainda assim, um método passivo para remover pólen de abelhas bumble não foi desenvolvido. O principal obstáculo no desenvolvimento de um mecanismo para remover o pólen das abelhas inquecíveis que retornam é a grande variação do tamanho do trabalhador que existe em uma colônia de abelhasbumble 16. As armadilhas de pólen de abelhas são eficazes em grande parte porque o tamanho do trabalhador das abelhas não varia muito. Além disso, essas armadilhas requerem apenas pequenas manipulações após a instalação e não exigem que as abelhas sejam sacrificadas17. Isso é conseguido usando telas ou superfícies plásticas que desalojam o pólen das patas traseiras dos trabalhadores à medida que retornam à colmeia. Essas armadilhas removem apenas uma parte das cargas de pólen dos forasteiros que retornam e os vários desenhos desses resultam em eficiências variadas na coleta de pólen. À medida que o pólen é removido das pernas das abelhas, ele cai através de uma tela e em uma bacia de coleta à qual as abelhas não têm acesso, para que o pesquisador possa removê-lo com apenas pequenos distúrbios para a colmeia.
O objetivo do presente estudo é adaptar as técnicas utilizadas para a coleta de pólen das colmeias de abelhas de mel e aplicá-los em ninhos de abelhas bumble usando estruturas impressas em 3D e testar os desenhos de armadilhas em colônias de Bombus huntii. O processo de projeto seguiu as premissas de que as armadilhas deveriam ser baratas de produzir, adaptáveis a uma variedade de espécies de abelhas bumble, causar danos mínimos ou perturbação às abelhas, e que a taxa de remoção de pólen deve exceder a coleta manual de pólen. A tecnologia de impressão tridimensional é versátil, facilmente acessível e uma ferramenta econômica que permite aos pesquisadores replicar e modificar objetos para fins específicos18. A técnica aqui apresentada instrui o usuário a construir armadilhas de pólen e anexá-las a colônias de abelhas disponíveis comercialmente. As armadilhas não foram projetadas para serem usada com colônias selvagens. Essas armadilhas removem passivamente as cargas de pólen corbicular das patas traseiras do pólen carregando abelhas enquanto retornam às suas caixas de ninho.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:461px;" width="462">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:71px;">MakerBot Replicator+</td>
			<td style="width:87px;">MakerBot</td>
			<td style="width:87px;">Model PABH65</td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:71px;">MakerBot Tough Material</td>
			<td style="width:87px;">PLA Filament</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td>various colors</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:71px;">Nest Box</td>
			<td style="width:87px;">Biobest</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td>Not sold publicly without bee purchase</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a 3d printed pollen trap for bumble bee (bombus) hive entrances

Para verificar as fontes vegetais das quais as abelhas se forragem para pólen, os indivíduos devem ser coletados para remover suas cargas de pólen corbicular para análise. Isso tem sido tradicionalmente feito por invasores de rede nas entradas do ninho ou nas flores, resfriando as abelhas no gelo, e depois removendo as cargas de pólen do corbiculado com fórceps ou um pincel. Este método é demorado e trabalhoso, pode alterar o comportamento normal de forragem, e pode resultar em incidentes de picada para o trabalhador que realiza a tarefa. Armadilhas de pólen, como as usadas em colmeias de abelhas, coletam pólen desalojando cargas de pólen corbicular das pernas dos trabalhadores enquanto passam pelas telas na entrada do ninho. As armadilhas podem remover uma grande quantidade de pólen de abelhas invasoras que retornam com mão-de-obra mínima, mas até o momento nenhuma armadilha está disponível para uso com colônias de abelhas. Os trabalhadores dentro de uma colônia de abelhas podem variar em tamanho tornando difícil adaptar esse mecanismo a colmeias de abelhas desarmadas comercialmente. Usando programas de design de impressão 3D, criamos uma armadilha de pólen que remove com sucesso as cargas de pólen corbicular das pernas de intrusos de abelhas bumble retornando. Este método reduz significativamente o tempo exigido pelos pesquisadores para coletar pólen de intrusos de abelhas que retornam à colônia. Apresentamos o projeto, resultados de testes de eficiência de remoção de pólen, e sugerimos áreas de modificações para os pesquisadores adaptarem armadilhas a uma variedade de espécies de abelhas ou desenhos de caixas de ninhos.

Oito diferentes desenhos de filtros de pólen foram testados para determinar sua eficácia e eficiência na remoção de cargas de pólen corbicular dos trabalhadores de abelhas bumble retornando. Todos os projetos foram bem sucedidos em remover pelo menos uma carga de pólen corbicular de um forasteiro retornando. No entanto, alguns foram encontrados para retardar os trabalhadores de sair ou entrar na colmeia ou não remover cargas de pólen(Tabela 1). Armadilhas de pólen com vários filtros foram tes...

Watch this Scientific Journal Video about A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances at JoVE.com

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

Apresentamos um mecanismo não letal e automatizado para coletar pólen de trabalhadores de abelhas bumble(Bombus)que retornam a uma colmeia. Instruções para produzir, preparar, instalar e usar os dispositivos estão incluídas. Ao usar objetos impressos em 3D, a modificação no design foi oportuna, eficiente e permitiu uma rápida reviravolta para testes.

Uma armadilha de pólen impresso em 3D para entradas de colmeias de abelhas bumble(Bombus)

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis.  ...

a-3d-printed-pollen-trap-for-bumble-bee-bombus-hive-entrances

Research

JoVE Journal

Biology

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee (Bombus) Hive Entrances

5.0K visualizações.  Utah State University. Apresentamos um mecanismo não letal e automatizado para coletar pólen de trabalhadores de abelhas bumble(Bombus)que retornam a uma colmeia. Instruções para produzir, preparar, instalar e usar os dispositivos estão incluídas. Ao usar objetos impressos em 3D, a modificação no design foi oportuna, eficiente e permitiu uma rápida reviravolta para testes.

Vídeo: A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

Measuring the Bending Stiffness of Bacterial Cells Using an Optical Trap

We developed a protocol to measure the bending rigidity of filamentous rod-shaped bacteria. Forces are applied with an optical trap, a microscopic three-dimensional spring made of light that is formed when a high-intensity laser beam is focused to a very small spot by a microscope's objective lens. To bend a cell, we first bind live bacteria to a chemically-treated coverslip. As these cells grow, the middle of the cells remains bound to the coverslip but the growing ends are free of this restraint. By inducing filamentous growth with the drug cephalexin, we are able to identify cells in which one end of the cell was stuck to the surface while the other end remained unattached and susceptible to bending forces. A bending force is then applied with an optical trap by binding a polylysine-coated bead to the tip of a growing cell. Both the force and the displacement of the bead are recorded and the bending stiffness of the cell is the slope of this relationship.

We present a protocol for bending filamentous bacterial cells attached to a cover-slip surface with an optical trap to measure the cellular bending stiffness.

Medir a rigidez à flexão de células bacterianas Usando uma armadilha óptica

We developed a protocol to measure the bending rigidity of filamentous rod-shaped bacteria. Forces are applied with an optical trap, a microscopic ...

Biologia

Associated Chromosome Trap for Identifying Long-range DNA Interactions

Genetic information encoded by DNA is organized in a complex and highly regulated chromatin structure. Each chromosome occupies a specific territory, that may change according to stage of development or cell cycle. Gene expression can occur in specialized transcriptional factories where chromatin segments may loop out from various chromosome territories, leading to co-localization of DNA segments which may exist on different chromosomes or far apart on the same chromosome. The Associated Chromosome Trap (ACT) assay provides an effective methodology to identify these long-range DNA associations in an unbiased fashion by extending and modifying the chromosome conformation capture technique. The ACT assay makes it possible for us to investigate mechanisms of transcriptional regulation in trans, and can help explain the relationship of nuclear architecture to gene expression in normal physiology and during disease states.

The associated chromosome trap (ACT) assay is a novel unbiased method for identifying long-range DNA interactions. The characterization of long range DNA interactions will allow us to determine the relationship of nuclear architecture to gene expression in both normal physiology and in diseased states.

Armadilha cromossomo associados para Identificar Interações de longo alcance DNA

Genetic information encoded by DNA is organized in a complex and highly regulated chromatin structure.  Each chromosome occupies a specific territory, ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees collect and convert to beebread by placing colonies in a specially constructed enclosed flight area. Methods were developed to analyze the protein and amino acid composition of the pollen and beebread. We also describe how consumption of the beebread was measured and methods used to determine adult worker bee hemolymph protein titers after feeding on beebread for 4, 7 and 11 days after emergence. Methods were applied to determine if genotype affects the conversion of pollen to beebread and the rate that bees consume and acquire protein from it. Two subspecies (European and Africanized honey bees; EHB and AHB respectively) were provided with the same pollen source. Based on the developed methods, beebread made by both subspecies had lower protein concentrations and pH values than the pollen. In general, amino acid concentrations in beebread made by either EHB or AHB were similar and occurred at higher levels in beebread than in pollen. Both AHB and EHB consumed significantly more of the beebread made by AHB than by EHB. Though EHB and AHB consumed similar amounts of each type of beebread, hemolymph protein concentrations in AHB were higher than in EHB. Differences in protein acquisition between AHB and EHB might reflect environmental adaptations related to the geographic region where each subspecies evolved. These differences could contribute to the successful establishment of AHB populations in the New World because of the effects on brood rearing and colony growth.

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

Métodos para comparar Nutrientes na beebread Feito por africanizadas e mel europeu abelhas e os efeitos sobre Títulos Hemolinfa Proteína

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

Monitoramento de nível de colônia os efeitos da exposição de pesticidas subletais em mel de abelhas

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Collection and Identification of Pollen from Honey Bee Colonies

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate pesticide exposure of bees via pollen. Described herein is an effective pollen-trapping method for collecting corbicular pollen from honey bees returning to their hives. This collection method results in large quantities of corbicular pollen that can be used for research purposes. Honey bees collect pollen from many plant species, but typically visit one species during each collection trip. Therefore, each corbicular pollen pellet predominantly represents one plant species, and each pollen pellet can be described by color. This allows the sorting of samples of corbicular pollen by color to segregate plant sources. Researchers can further classify corbicular pollen by analyzing the morphology of acetolyzed pollen grains for taxonomic identification. These methods are commonly used in studies related to pollinators such as pollination efficiency, pollinator foraging dynamics, diet quality, and diversity. Detailed methodologies are presented for collecting corbicular pollen using pollen traps, sorting pollen by color, and acetolyzing pollen grains. Also presented are results pertaining to the frequency of pellet colors and taxa of corbicular pollen collected from honey bees in five different cropping systems.

We describe methods for collecting corbicular pollen from honey bees as well as protocols for color sorting, acetolysis, and microscope slide preparation of pollen for taxonomic identification. In addition, we present pellet color and taxonomic diversity of corbicular pollen collected from five cropping systems using pollen traps.

Coleta e Identificação de Pólen das Colônias de Abelhas

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

Avaliando o risco agroquímico para rainhas de abelhas de mel acasaladas

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of conditioned media remains time-consuming and far from physiological and pathological conditions. Although a few models of co-culture are commercially available, they remain restricted to specific assays and are mostly for two types of cells. 
Here, 3D-printed inserts are used that are compatible with numerous functional assays. The insert allows the separation of one well of a 6-well plate into four compartments. A wide range of combinations can be set. Moreover, windows are designed in each wall of the compartments so that potential intercellular communication between every compartment is possible in the culture medium in a volume-dependent manner. For example, paracrine intercellular communication can be studied between four cell types in monolayer, in 3D (spheroids), or by combining both. In addition, a mix of different cell types can be seeded in the same compartment in 2D or 3D (organoids) format. The absence of a bottom in the 3D-printed inserts allows the usual culture conditions on the plate, possible coating on the plate containing the insert, and direct visualization by optical microscopy. The multiple compartments provide the possibility to collect different cell types independently or to use, in each compartment, different reagents for RNA or protein extraction. In this study, a detailed methodology is provided to use the new 3D-printed insert as a co-culture system. To demonstrate several capacities of this flexible and simple model, previously published functional assays of cell communication were performed in the new 3D-printed inserts and were demonstrated to be reproducible. The 3D-printed inserts and the conventional cell culture using conditioned media led to similar results. In conclusion, the 3D-printed insert is a simple device that can be adapted to numerous models of co-cultures with adherent cell types.

In this paper, a newly designed 3D-printed insert is presented as a model of co-culture and validated through the study of the paracrine intercellular communication between endothelial cells and keratinocytes.

Um inserto inovador impresso em 3D projetado para permitir culturas de células 2D e 3D diretas

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

Um método aprimorado para medir os perfis de hidratação do pólen em Arabidopsis thaliana

A High-Resolution, Single-Grain, In Vivo Pollen Hydration Bioassay for Arabidopsis thaliana

Sexual reproduction in flowering plants requires initial interaction between the pollen grain and the stigmatic surface, where a molecular dialog is established between the interacting partners. Studies across a range of species have revealed that a series of molecular checkpoints regulate the pollen-stigma interaction to ensure that only compatible, generally intraspecific pollen is successful in effecting fertilization. In species that possess a 'dry stigma', such as the model plant Arabidopsis thaliana, the first post-pollination, prezygotic compatibility checkpoint is the establishment of pollen hydration. 
This phase of pollination is tightly regulated, whereby signals from the pollen grain elicit the release of water from the stigma, thus permitting pollen hydration. The ability to accurately measure and track pollen hydration over time is key to the design of experiments directed at understanding the regulation of this critical step in reproduction. Published protocols frequently utilize flowers that have been excised from the parent plant, maintained on liquid or solid media, and bulk pollinated. 
This paper describes a noninvasive, in vivo pollination bioassay that permits minute-by-minute hydration tracking of individual A. thaliana pollen grains at high resolution. The assay is highly reproducible, able to detect very subtle variations of pollen hydration profiles, and thus is suitable for the analysis of mutants that affect pathways regulating pollination. Although the protocol is lengthier than those described for bulk pollinations, the precision and reproducibility it provides, along with its in vivo nature, make it ideal for the detailed dissection of pollination phenotypes.

Autor em destaque: Um bioensaio de hidratação de pólen in vivo de alta resolução, grão único para Arabidopsis thaliana  

An improved method to measure pollen hydration profiles in Arabidopsis thaliana is described here. The new method offers higher resolution, is noninvasive, and is highly reproducible. The protocol represents a new tool for a finer dissection of the processes that regulate the early stages of pollination.

Bioensaio de Hidratação Polínica In Vivo de Grão Único de Alta Resolução para Arabidopsis thaliana

Sexual reproduction in flowering plants requires initial interaction between the pollen grain and the stigmatic surface, where a molecular dialog is ...