우리는 3D 프린팅 디자인에 그들의 도움에 대한 콜비 카펜터와 스펜서 마티아스 감사합니다. 엘렌 클링거에게 사진 인물 제작에 도움을 주신 것에 대해 감사드리며, 조나단 B. 코흐가 개정에 도움을 준 것에 대해 감사드립니다. 기금은 USDA-ARS 수분 곤충 생물학, 관리 및 체계적인 연구 단위에 의해 제공되었습니다.

1. 꽃가루 트랩 구조물 인쇄
<ol><li>꿀벌이 중첩하고 있는 둥지 상자에 적합한 STL 파일을 다운로드하십시오(예: 바이오베스트 또는 코퍼트 스타일 벌집, https://www.ars.usda.gov/pacific-west-area/logan-ut/pollinating-insect-biology-management-systematics-research/docs/pollen-traps/). 파일은 일반인에게 무료로 제공되며 최종 사용자가 다운로드하고 수정할 수 있습니다.</li>
	<li>프린터 프로그램에서 STL 파일을 엽니다. 프린터 제조업체 의 지시에 따라 4개의 트랩 구성 요소를 빌드합니다. 참고: 트랩 본체가 인쇄할 수 있도록 약 3시간, 캐치 분지가 인쇄할 수 있도록 2시간, 필터및 트랩 클로저 인서트가 인쇄할 수 있는 경우 각각 30분이 인쇄됩니다. 트랩 바디 사이즈는 6cm x 3.8 cm x 7cm입니다.</li>
</ol>2. 꽃가루 트랩 조립
<ol><li>트랩 본체로 인쇄된 지지 구조를 제거하고 트랩 본체의 체 구조를 포함한 유역을 잡는다(도1).</li>
	<li>3/16in. (0.476cm) 드릴 비트를 사용하여 꽃가루 필터의 상승 된 가장자리를 가로지르는 플라스틱 가닥을 지우면 꿀벌이 필터 구멍을 통과하는 것을 방해 할 수 있습니다. 면도날과 사포를 자르는 상자를 사용하여 꽃가루 필터의 평평한 면에 있는 충돌이나 상승 된 가장자리를 고르게하십시오.</li>
	<li>트랩 바디의 한쪽을 통해 플라스틱 필터를 부드럽게 밀어 트랩 본체에 꽃가루 필터를 놓습니다. 트랩의 왼쪽에 커진 필터 콘의 통과를 수용할 수 있는 더 큰 개구부를 가지므로 필터는 한 방향으로만 맞습니다.<ol>
<li>측면 슬릿이 너무 작아서 꽃가루 필터가 매끄럽게 미끄러지기에는 너무 작으면 트랩 본체의 슬릿에서 충분한 플라스틱을 면도기 또는 한 번에 플라스틱의 작은 부분을 제거할 수 있는 다른 도구로 긁어냅니다. 꽃가루 필터와 트랩 바디 사이에 2mm 간격이 없는 곳에 꽃가루 필터가 단단히 고정되어 있는지 확인합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>트랩 본체 하단의 상승 된 가장자리를 캐치 분지 의 상단의 홈으로 밀어 트랩 본체에 캐치 분지를 부착합니다. 캐치 분지는 트랩 본체의 체 영역 바로 아래에 위치해야한다(그림 1A\u2012E).</li>
	<li>플라스틱을 절단하거나 샌드링하여 트랩 바디에서 캐치 분지를 매끄럽게 배치하고 제거할 수 있도록 적절한 수정을 하십시오. 캐치 분지의 배치는 꽃가루 필터를 제자리에 고정시키고 캐치 분지가 제거 될 때까지 제거 할 수 없으며 캐치 분지가 있는 동안 꽃가루 필터를 삽입 할 수 없습니다. 참고: 여러 개의 두드러기가 서로 가까이 배치되면 각 하이브에 트랩 바디의 고유한 색상 조합을 제공하면 다양한 방향을 가진 두드러기를 배치하는 것 외에도 유역및 꽃가루 필터 구조를 사용하여 돌아오는 작업자가 둥지를 찾는 데 도움이 됩니다.</li>
</ol>3. 범블 꿀벌 식민지 준비
<ol><li>식민지를 배포하기 전에 꽃가루 먹이 24\u201248 h를 중지합니다. 이로 인해 작업자는 저장된 꽃가루를 사용하고 꽃가루를 찾기 위해 둥지를 떠나도록 자극합니다.</li>
	<li>트랩을 설치하는 동안 꿀벌이 탈출하지 못하도록 필터 슬롯에 트랩 클로저 삽입을 삽입하여 설치를 위해 벌집 트랩 본체를 준비합니다.</li>
	<li>꿀벌이 비행하는 것을 방지하기 위해 빨간 불빛 아래에서 작업하여 골판지 외부 상자에서 플라스틱 둥지 상자를 들어 올립니다.</li>
	<li>둥지 앞면에 플라스틱 둥지 입구를 찾습니다. 둥지 공급 업체에 따라 입구의 두 가지 스타일이 있습니다 : Koppert 스타일의 상자 (단계 3.5) 및 Biobest 스타일의 상자 (단계 3.6).</li>
	<li>Koppert 스타일의 하이브 입구의 경우, 두 입구 구멍이 열릴 때까지 입구 탭에 당겨 둥지 입구에 꽃가루 트랩을 장착합니다.<ol>
<li>꽃가루 트랩의 두 튜브를 입구 구멍에 삽입하여 꽃가루 트랩의 체가 바닥에 있는지 확인합니다. 플라스틱 입구 탭을 부드럽게 밀어 꽃가루 트랩을 제자리에 고정시하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Biobest 스타일의 하이브 입구에 꽃가루 트랩을 설치하려면 플랫 헤드 드라이버를 사용하여 둥지 상자에서 플라스틱 입구 장치를 부드럽게 캐고 있습니다. 꽃가루 트랩이 둥지에 단단히 맞을 때까지 둥지 입구 구멍에 꽃가루 트랩을 삽입합니다(도1E).<ol>
<li>필요한 경우 트랩이 둥지 상자에 닿는 테이프 또는 빠른 건조 접착제를 사용하여 트랩을 둥지에 고정합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>플라스틱 둥지 상자를 골판지 상자에 반환합니다. 골판지는 꽃가루 트랩을 수용하기 위해 잘라야 할 수도 있습니다.</li>
</ol>4. 둥지 배치
<ol><li>둥지 상자를 스터디 영역에 배치합니다. 이 수집 꽃가루의 품질과 수량에 부정적인 영향을 미칠 수 있기 때문에 바람에 대한 강수량과 앵커리지로부터 보호하기 위해 커버를 제공합니다. 과열을 줄이기 위해 적절한 태양 덮개를 온실에 배치 된 두드러기를 제공합니다.</li>
	<li>트랩 바디에서 트랩 클로저 인서트를 제거하여 꿀벌이 자유롭게 사료를 사료할 수 있도록 하여 사료가 주변 지역과 둥지의 위치를 지향할 수 있도록 합니다. 방향 비행 시간은 정상적인 조건에서 24시간 이내에 완료되어야 합니다.</li>
</ol>5. 꽃가루 컬렉션
<ol><li>트랩을 참여시키기 위해 꽃가루 필터를 필터 슬롯에 밀어 고정되도록 합니다.</li>
	<li>캐치 분지를 전면에서 트랩 본체에 슬라이딩하여 완전히 닫을 때까지 설치합니다. 캐치 분지가 지나치게 느슨하거나 트랩 본체에서 떨어지면 고무 밴드를 사용하여 트랩 본체에 고정하십시오.</li>
	<li>꽃가루 필터 구멍이 꿀벌을 수용 할 수있을만큼 큰 지 확인하기 위해 첫 번째 배포에서 꽃가루 트랩에 들어가 고 나가는 꿀벌을 관찰하십시오.<ol>
<li>작업자가 꽃가루 필터를 통과할 수 없는 경우 필터를 제거한 다음 3/16(0.476cm)보다 큰 드릴 비트를 사용하여 구멍 크기를 늘립니다. 너무 큰 구멍이 꽃가루를 수집하지 않기 때문에, 매번 구멍 직경 1/32 (0.079cm)를 증가순차적으로 수행한다.</li>
		<li>꿀벌이 필터를 통과 할 수 있게되면, 다시 들어갈 때 꽃가루가 제거되는지 확인하기 위해 입구를 계속 관찰하십시오. 참고 : 꿀벌은 꽃가루 필터 구멍, 특히 처음 몇 번 통과하지만 이동하는 데 어려움이 있어야합니다. 너무 쉽게 통과하면 꽃가루가 코르비쿨라에서 빠지지 않을 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>지정된 꽃가루 수집 기간 이후에 트랩 본체에서 캐치 분지를 밀어 제거합니다.</li>
	<li>실험 설계에 따라 꽃가루 하중을 처리합니다.</li>
	<li>꽃가루 필터를 제거하여 작업자가 다음 꽃가루 수집 기간까지 자유롭게 사료를 사료할 수 있도록 합니다. 트랩 본체는 실험 기간 동안 벌집에 부착된 상태로 남아 있을 수 있다. 참고: 꽃가루 트랩은 연구원이 식민지에서 꽃가루를 수집하고자하는 한 종사 할 수 있습니다. 그러나, 일주일에 24 시간 이상 꽃가루 트랩의 배포는 하이브및 지체 식민지 개발에 무리의 굶주림을 초래할 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol>
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꿀벌 식민지 입구에서 꽃가루의 컬렉션은 생태 및 농업 연구의 다양한 수 있습니다. 꿀벌이 꽃가루를 수집하는 꽃원천을 식별하는 것은 식민지의 전반적인 식단19에기여하는 식물의 다양성에 대한 귀중한 정보와 통찰력을 제공합니다. 꽃가루 소스를 식별하는 것은 농업 생산과 야생 땅에서 생태계 서비스의 연구 모두에 영향을 미칩니다12,<sup class="xref"...

범블 꿀벌(봄버스 스PP.) 세계의 온대, 고산, 북극 지역에서 발견되는 큰 강력한곤충이다 1. 그들은 지역 사회를 심고 그들이 방문하는 농업 작물에 대한 중요한 수분 서비스를 제공하는 것이 중요합니다2. 최근 여러 종의 풍요로움과 분포가 감소하면서 수분공급자가 대중의 인식3의최전선에 서게 되면서 그 중요성이 제기되고 있다. 연구원은 꿀벌 사료4에다양하고 풍부한 꽃 자원의 부족을 포함하여 인구 감소에 기여할 가능성이 있는 몇몇 스트레스를 확인했습니다. 어떤 식물 종 범블 꿀벌 사료에서 식별하면 연구원과 토지 관리자는 꿀벌이 자원 가용성, 경쟁 및 인위적장애의변화에 어떻게 반응할 수 있는지 이해할 수 있습니다5,6.
꿀벌의 꽃가루 를 먹는 선호도를 조사하는 연구는 종종 꽃에서 먹는 개별 꿀벌을 잡은 다음 추가 처리 및식별을위해 표본에서 관상 꽃가루 하중을 제거한 연구원에 의해 수행됩니다7,8,9,10. 이 방법은 꿀벌 종의 종 또는 조립이 영역7의자원을 활용하는 방법에 대한 통찰력을 제공하지만, 벌집 사이의 선호도에 대한 집중적이고 잠재적 인 차이는 사료 꿀벌(11)의기원의 식민지를 식별하기 위해 추가 분자 분석없이 분별 할 수 없다.
역학을 포기하는 일부 연구에 대 한, 개별 식민지에서 연구를 수행 하는 것이 좋습니다.; 그러나 야생 범블 꿀벌 둥지는 일반적으로 지하 또는 지상층에 위치하여12를찾기가 어렵습니다. 상업적으로 생산된 범블 벌두집은 연구원에게 더 큰 접근성과 더 나은 실험 적 제어를 제공하고 작업자로부터 꽃가루제거는 여전히 주로 포집포로 돌아가서 혈관 꽃가루 하중13,14를수동으로 제거하여 수행된다. 꿀벌의 코르비쿨라로부터 수작업으로 꽃가루를 제거하는 것은 꽃가루 사료를 반환하는 비율이 낮을 수 있는 벌집 입구에서 특히 시간당 낮은 꽃가루 수율로 시간이 집중적입니다. 또한 꿀벌에서 꽃가루를 수동으로 제거하면 방해받은 작업자의 찌르기가 발생할 수 있습니다.
꽃가루 트랩은 수십 년 동안 꿀벌에서 꽃가루를 실험제거하는 데 사용되어 왔다15; 그러나 꿀벌에서 꽃가루를 제거하는 수동 적인 방법은 개발되지 않았습니다. 꽃가루를 반납하지 못하도록 하는 메커니즘을 개발하는 데 주요 장애물은 꿀벌서식지(16)에존재하는 작업자 크기의 큰 변화이다. 꿀벌 꽃가루 트랩은 꿀벌 노동자 크기가 별로 변하지 않기 때문에 크게 효과적입니다. 또한,이 함정은 설치 후 사소한 조작을 필요로하고 꿀벌을 희생 할 필요가 없습니다17. 이것은 그들이 하이브로 돌아갈 때 노동자의 뒷다리에서 꽃가루를 제거하는 스크린 이나 플라스틱 표면을 사용하여 달성된다. 이 트랩은 꽃가루 하중의 일부만 제거하여 사료를 반환하고 꽃가루 컬렉션에서 다양한 효율성을 초래하는 다양한 디자인의 설계를 제거합니다. 꽃가루가 꿀벌 다리에서 제거되면 화면을 통해 꿀벌이 접근 할 수없는 수집 분지로 떨어지므로 연구원은 벌집에 약간의 방해만으로 제거 할 수 있습니다.
본 연구의 목적은 꿀벌 벌집에서 꽃가루를 수집하는 데 사용되는 기술을 조정하고 3D 인쇄 구조를 사용하여 꿀벌 둥지에 적용하고 봄부스 헌티의식민지에 트랩 디자인을 테스트하는 것입니다. 설계 과정은 트랩이 생산 저렴해야한다는 가정을 따라, 꿀벌 종의 다양한 적응, 꿀벌에 최소한의 해또는 방해를 야기, 꽃가루 제거의 속도는 꽃가루의 손 수집을 초과해야한다는 가정. 3차원 인쇄 기술은 다재다능하고 쉽게 접근할 수 있으며, 연구자가 특정 목적을 위해 객체를 복제하고 수정할 수 있는 비용 효율적인도구입니다(18). 여기에 제시된 기술은 사용자에게 꽃가루 트랩을 구축하고 시판되는 범블 꿀벌 식민지에 부착하도록 지시합니다. 트랩은 야생 식민지와 함께 사용하도록 설계되지 않았습니다. 이 함정은 둥지 상자로 돌아갈 때 꿀벌을 운반하는 꽃가루의 뒷다리에서 관두 꽃가루 하중을 수동적으로 제거합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:461px;" width="462">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:71px;">MakerBot Replicator+</td>
			<td style="width:87px;">MakerBot</td>
			<td style="width:87px;">Model PABH65</td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:71px;">MakerBot Tough Material</td>
			<td style="width:87px;">PLA Filament</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td>various colors</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:71px;">Nest Box</td>
			<td style="width:87px;">Biobest</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td>Not sold publicly without bee purchase</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a 3d printed pollen trap for bumble bee (bombus) hive entrances

꽃가루에 꿀벌 사료가 있는 식물 원을 확인하려면 분석을 위해 관상 꽃가루 하중을 제거하기 위해 개인을 수집해야합니다. 이것은 전통적으로 둥지 입구 또는 꽃에 사료를 그물, 얼음에 꿀벌을 냉각, 다음 집게 또는 브러시로 코르비쿨라에서 꽃가루 부하를 제거에 의해 수행되었습니다. 이 방법은 시간과 노동 집약적이며 정상적인 위조 동작을 변경할 수 있으며 작업을 수행하는 작업자의 쏘는 사고가 발생할 수 있습니다. 꿀벌 벌집에 사용되는 꽃가루 트랩은 둥지 입구의 화면을 통과할 때 작업자의 다리에서 코비알 꽃가루하를 분리하여 꽃가루를 수집합니다. 트랩은 최소한의 노동력으로 포어 꿀벌을 반환에서 꽃가루의 대량을 제거 할 수 있습니다, 아직 현재까지 범블 꿀벌 식민지와 함께 사용할 수있는 이러한 함정을 사용할 수 없습니다. 꿀벌 식민지 내의 작업자는 크기가 다를 수 있으므로 이 메커니즘을 상업적으로 키서 꿀벌 벌집에 적응하기 어려운 입구의 크기 선택이 될 수 있습니다. 3D 프린팅 설계 프로그램을 사용하여, 우리는 성공적으로 반품 꿀벌 사료의 다리에서 관상 꽃가루 부하를 제거하는 꽃가루 트랩을 만들었습니다. 이 방법은 연구원이 식민지로 돌아오는 범블 꿀벌 사료에서 꽃가루를 수집하는 데 필요한 시간을 크게 줄입니다. 우리는 설계, 꽃가루 제거 효율 테스트의 결과를 제시하고, 다양한 범블 꿀벌 종 또는 둥지 상자 디자인에 트랩을 적응하기 위해 조사관을위한 수정 영역을 제안한다.

8가지 꽃가루 필터 설계는 꿀벌 작업자를 반환하는 코비큘러 꽃가루 하중을 제거하는 데 효능과 효율성을 결정하기 위해 테스트되었습니다. 모든 설계는 돌아오는 포어에서 적어도 하나의 코비큘러 꽃가루 부하를 제거하는 데 성공했습니다. 그러나, 일부는 부드러름을 떠나거나 입력에서 노동자를 느리게하거나 꽃가루 부하를 제거하지 못하는 것으로 나타났다(표 1). 다양한 필터가 ...

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A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

우리는 벌집으로 돌아오는 범블 꿀벌(봄푸스)근로자로부터 꽃가루를 수집하는 비 치명적이고 자동화 된 메커니즘을 제시합니다. 장치 생산, 준비, 설치 및 사용에 대한 지침이 포함되어 있습니다. 3D 프인쇄 객체를 사용하여 설계를 수정하는 것은 시기적이고 효율적이며 테스트를 위한 빠른 처리를 허용했습니다.

범블 비(봄푸스)하이브 입구를위한 3D 인쇄 꽃가루 트랩

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis.  ...

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Research

JoVE Journal

Biology

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee (Bombus) Hive Entrances

5.0K 조회수.  Utah State University. 우리는 벌집으로 돌아오는 범블 꿀벌(봄푸스)근로자로부터 꽃가루를 수집하는 비 치명적이고 자동화 된 메커니즘을 제시합니다. 장치 생산, 준비, 설치 및 사용에 대한 지침이 포함되어 있습니다. 3D 프인쇄 객체를 사용하여 설계를 수정하는 것은 시기적이고 효율적이며 테스트를 위한 빠른 처리를 허용했습니다.

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A 3D System for Culturing Human Articular Chondrocytes in Synovial Fluid

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not regenerate very efficiently in vivo; and as a result, osteoarthritis leads to irreversible cartilage loss and is accompanied by chronic pain and immobility 1,2. Cartilage tissue engineering offers promising potential to regenerate and restore tissue function. This technology typically involves seeding chondrocytes into natural or synthetic scaffolds and culturing the resulting 3D construct in a balanced medium over a period of time with a goal of engineering a biochemically and biomechanically mature tissue that can be transplanted into a defect site in vivo 3-6. Achieving an optimal condition for chondrocyte growth and matrix deposition is essential for the success of cartilage tissue engineering. 
 In the native joint cavity, cartilage at the articular surface of the bone is bathed in synovial fluid. This clear and viscous fluid provides nutrients to the avascular articular cartilage and contains growth factors, cytokines and enzymes that are important for chondrocyte metabolism 7,8. Furthermore, synovial fluid facilitates low-friction movement between cartilaginous surfaces mainly through secreting two key components, hyaluronan and lubricin 9 10. In contrast, tissue engineered cartilage is most often cultured in artificial media. While these media are likely able to provide more defined conditions for studying chondrocyte metabolism, synovial fluid most accurately reflects the natural environment of which articular chondrocytes reside in.
 Indeed, synovial fluid has the advantage of being easy to obtain and store, and can often be regularly replenished by the body. Several groups have supplemented the culture medium with synovial fluid in growing human, bovine, rabbit and dog chondrocytes, but mostly used only low levels of synovial fluid (below 20&#37;) 11-25. While chicken, horse and human chondrocytes have been cultured in the medium with higher percentage of synovial fluid, these culture systems were two-dimensional 26-28. Here we present our method of culturing human articular chondrocytes in a 3D system with a high percentage of synovial fluid (up to 100&#37;) over a period of 21 days. In doing so, we overcame a major hurdle presented by the high viscosity of the synovial fluid. This system provides the possibility of studying human chondrocytes in synovial fluid in a 3D setting, which can be further combined with two other important factors (oxygen tension and mechanical loading) 29,30 that constitute the natural environment for cartilage to mimic the natural milieu for cartilage growth. Furthermore, This system may also be used for assaying synovial fluid activity on chondrocytes and provide a platform for developing cartilage regeneration technologies and therapeutic options for arthritis.

A 3D system of culturing human articular chondrocytes in high levels of synovial fluid is described. Synovial fluid reflects the most natural microenvironment for articular cartilage, and can be easily obtained and stored. This system thus can be used for studying cartilage regeneration and for screening therapeutics for treating arthritis.

활액 유체에 Culturing 인간 관절 Chondrocytes을위한 3D 시스템

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not ...

연구

생물학

Combined Immunofluorescence and DNA FISH on 3D-preserved Interphase Nuclei to Study Changes in 3D Nuclear Organization

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA FISH) represents the most direct way to visualize the location of gene loci, chromosomal sub-regions or entire territories in individual cells. This type of analysis provides insight into the global architecture of the nucleus as well as the behavior of specific genomic loci and regions within the nuclear space. Immunofluorescence, on the other hand, permits the detection of nuclear proteins (modified histones, histone variants and modifiers, transcription machinery and factors, nuclear sub-compartments, etc). The major challenge in combining immunofluorescence and 3D DNA FISH is, on the one hand to preserve the epitope detected by the antibody as well as the 3D architecture of the nucleus, and on the other hand, to allow the penetration of the DNA probe to detect gene loci or chromosome territories 1-5. Here we provide a protocol that combines visualization of chromatin modifications with genomic loci in 3D preserved nuclei.

Here we describe a protocol for simultaneous detection of histone modifications by immunofluorescence and DNA sequences by DNA FISH followed by 3D microscopy and analyses (3D immuno-DNA FISH).

3D 원자력기구의 변화를 공부하기 위해 3D 보존 된 계면 핵에 결합 Immunofluorescence와 DNA의 물고기

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes  on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA  FISH) represents the ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees collect and convert to beebread by placing colonies in a specially constructed enclosed flight area. Methods were developed to analyze the protein and amino acid composition of the pollen and beebread. We also describe how consumption of the beebread was measured and methods used to determine adult worker bee hemolymph protein titers after feeding on beebread for 4, 7 and 11 days after emergence. Methods were applied to determine if genotype affects the conversion of pollen to beebread and the rate that bees consume and acquire protein from it. Two subspecies (European and Africanized honey bees; EHB and AHB respectively) were provided with the same pollen source. Based on the developed methods, beebread made by both subspecies had lower protein concentrations and pH values than the pollen. In general, amino acid concentrations in beebread made by either EHB or AHB were similar and occurred at higher levels in beebread than in pollen. Both AHB and EHB consumed significantly more of the beebread made by AHB than by EHB. Though EHB and AHB consumed similar amounts of each type of beebread, hemolymph protein concentrations in AHB were higher than in EHB. Differences in protein acquisition between AHB and EHB might reflect environmental adaptations related to the geographic region where each subspecies evolved. These differences could contribute to the successful establishment of AHB populations in the New World because of the effects on brood rearing and colony growth.

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

아프리칸 유럽 꿀 꿀벌에 의해 만들어 Beebread의 영양소를 비교하는 방법과하는 Hemolymph 단백질 역가에 미치는 영향

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination services, as well as an important model social insect used to study memory and learning, aging, and more. Here we describe a detailed protocol for the dissection of the dorsal abdominal wall of a bee in order to visualize its dorsal vessel, which serves the role of the heart in the insect. A successful dissection will expose a functional heart that, under the proper conditions, can maintain a steady heartbeat for an extended period of time. This allows the investigator to manipulate heart rate through the application of cardiomodulatory compounds to the dorsal vessel. By using either a digital microscope or a microscope equipped with a digital camera, the investigator can make video recordings of the dorsal vessel before and after treatment with test compounds. The videos can then be scored at a time convenient to the user in order to determine changes in heart rate, as well as changes in the pattern of heartbeats, following treatment. The advantages of this protocol are that it is relatively inexpensive to set up, easy to learn, requires little space or equipment, and takes very little time to conduct.

The abdominal dorsal vessel of the honey bee and other insects serves as the functional equivalent of the mammalian heart and plays an important role in nutrient transport, waste removal, immune function, and more. Here we describe a protocol for the visualization and pharmacological manipulation of bee heart rate.

심장 기능의 연구에 대한 해부와 벌 꿀 지느러미 선박의 관측

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

꿀 꿀벌에 Sublethal 농약 노출의 식민지 수준 효과 모니터링

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Collection and Identification of Pollen from Honey Bee Colonies

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate pesticide exposure of bees via pollen. Described herein is an effective pollen-trapping method for collecting corbicular pollen from honey bees returning to their hives. This collection method results in large quantities of corbicular pollen that can be used for research purposes. Honey bees collect pollen from many plant species, but typically visit one species during each collection trip. Therefore, each corbicular pollen pellet predominantly represents one plant species, and each pollen pellet can be described by color. This allows the sorting of samples of corbicular pollen by color to segregate plant sources. Researchers can further classify corbicular pollen by analyzing the morphology of acetolyzed pollen grains for taxonomic identification. These methods are commonly used in studies related to pollinators such as pollination efficiency, pollinator foraging dynamics, diet quality, and diversity. Detailed methodologies are presented for collecting corbicular pollen using pollen traps, sorting pollen by color, and acetolyzing pollen grains. Also presented are results pertaining to the frequency of pellet colors and taxa of corbicular pollen collected from honey bees in five different cropping systems.

We describe methods for collecting corbicular pollen from honey bees as well as protocols for color sorting, acetolysis, and microscope slide preparation of pollen for taxonomic identification. In addition, we present pellet color and taxonomic diversity of corbicular pollen collected from five cropping systems using pollen traps.

꿀벌 식민지에서 꽃가루의 수집 및 식별

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

꿀벌 여왕을 짝짓기하는 농약적 위험 평가

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of conditioned media remains time-consuming and far from physiological and pathological conditions. Although a few models of co-culture are commercially available, they remain restricted to specific assays and are mostly for two types of cells. 
Here, 3D-printed inserts are used that are compatible with numerous functional assays. The insert allows the separation of one well of a 6-well plate into four compartments. A wide range of combinations can be set. Moreover, windows are designed in each wall of the compartments so that potential intercellular communication between every compartment is possible in the culture medium in a volume-dependent manner. For example, paracrine intercellular communication can be studied between four cell types in monolayer, in 3D (spheroids), or by combining both. In addition, a mix of different cell types can be seeded in the same compartment in 2D or 3D (organoids) format. The absence of a bottom in the 3D-printed inserts allows the usual culture conditions on the plate, possible coating on the plate containing the insert, and direct visualization by optical microscopy. The multiple compartments provide the possibility to collect different cell types independently or to use, in each compartment, different reagents for RNA or protein extraction. In this study, a detailed methodology is provided to use the new 3D-printed insert as a co-culture system. To demonstrate several capacities of this flexible and simple model, previously published functional assays of cell communication were performed in the new 3D-printed inserts and were demonstrated to be reproducible. The 3D-printed inserts and the conventional cell culture using conditioned media led to similar results. In conclusion, the 3D-printed insert is a simple device that can be adapted to numerous models of co-cultures with adherent cell types.

In this paper, a newly designed 3D-printed insert is presented as a model of co-culture and validated through the study of the paracrine intercellular communication between endothelial cells and keratinocytes.

간단한 2D 및 3D 세포 배양이 가능하도록 설계된 혁신적인 3D 프린팅 인서트

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

Direct Infusion Device를 사용한 식물의 분자 전달

Direct Infusion Device for Molecule Delivery in Plants

Testing the function of therapeutic compounds in plants is an important component of agricultural research. Foliar and soil-drench methods are routine but have drawbacks, including variable uptake and the environmental breakdown of tested molecules. Trunk injection of trees is well-established, but most methods for this require expensive, proprietary equipment. To screen various treatments for Huanglongbing, a simple, low-cost method to deliver these compounds to the vascular tissue of small greenhouse-grown citrus trees infected with the phloem-limited bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) or infested with the phloem-feeding CLas insect vector Diaphorina citri Kuwayama (D. citri) is needed.
To meet these screening requirements, a direct plant infusion (DPI) device was designed that connects to the plant&#39;s trunk. The device is made using a nylon-based 3D-printing system and easily obtainable auxiliary components. The compound uptake efficacy of this device was tested in citrus plants using the fluorescent marker 5,6-carboxyfluorescein-diacetate. Uniform compound distribution of the marker throughout the plants was routinely observed.
Furthermore, this device was used to deliver antimicrobial and insecticidal molecules to determine their effects on CLas and D. citri respectively. The aminoglycoside antibiotic streptomycin was delivered into CLas-infected citrus plants using the device, which resulted in a reduction in the CLas titer from 2 weeks to 4 weeks post treatment. Delivering the neonicotinoid insecticide imidacloprid into D. citri-infested citrus plants resulted in a significant increase in psyllid mortality after 7 days. These results suggest that this DPI device represents a useful system for delivering molecules into plants for&#160;testing and facilitate research and screening purposes.

저자 스포트라이트: 식물의 분자 전달을 위한 직접 주입 장치  

This manuscript describes a novel direct plant infusion device for screening the effectiveness of molecules against the bacteria (Candidatus Liberibacter asiaticus) or its insect vector (Diaphorina citri, Kuwayama) that, in combination, are associated with Huanglongbing citrus disease.

식물의 분자 전달을 위한 직접 주입 장치

Testing the function of therapeutic compounds in plants is an important component of agricultural research. Foliar and soil-drench methods are routine but ...