Este protocolo se puede utilizar para predecir y mitigar los efectos adversos de los pesticidas en las abejas solitarias. La principal ventaja de esta técnica es la simulación de la alimentación larvaria con plaguicidas residuales en provisiones. La demostración visual de este método es crítica porque las características biológicas de Osmia excavata son únicas en comparación con las abejas sociales, y se ha realizado poca investigación sobre O.excavata, especialmente la larva.
Para preparar el tubo de alimentación, perfore un orificio de 0,3 milímetros de diámetro en la tapa de un tubo centrífugo de dos mililitros con una plancha de bobinado eléctrica. Para preparar el pesticida, disuelva el pesticida de grado técnico en acetona para adquirir soluciones madre de 10 miligramos por mililitro, luego realice diluciones de gradiente de la solución a más de cinco concentraciones. A continuación, adquiera tubos de abeja de plástico que contengan provisiones y larvas de Osmia excavata recién eclosionadas de un programa de cría masiva.
Usando un cepillo suave, separe suavemente la larva de las provisiones, seleccione las larvas hembras según el tamaño de la provisión y la posición de la celda dentro del nido, luego coloque las provisiones de tamaño uniforme con la larva hembra seleccionada en placas de Petri de 60 milímetros de diámetro y déjelas a un lado para su uso. Antes de proceder al tratamiento con plaguicidas, sopese las disposiciones. Para tratar las disposiciones con pesticidas, primero, mida el volumen de solución de pesticidas.
Luego remoje las provisiones seleccionadas de tamaño uniforme en las soluciones plaguicidas diluidas durante 10 segundos. Después de tratar las provisiones con el pesticida, mida el volumen de las soluciones plaguicidas nuevamente. Después de secar al aire las provisiones en una mesa de trabajo estéril, agréguelas a los tubos de centrífuga preparados con agujeros.
A continuación, pese 60 larvas femeninas y, con un cepillo suave, transfiera las larvas a la superficie de las provisiones secas naturalmente, agregando una larva por tubo. Críe las larvas en una cámara de crecimiento en la oscuridad a 25 más o menos dos grados Celsius con 65 a 75% de humedad relativa. Para la prueba de toxicidad letal aguda, mida la mortalidad de la larva después de ser colocada en el tratado y las disposiciones de control durante 48 horas.
A continuación, sopese las provisiones restantes después de 48 horas de cría de insectos para determinar la cantidad de provisión consumida por cada larva, luego, utilizando esta fórmula, calcule la dosis de pesticida en cada concentración consumida por cada larva de acuerdo con el porcentaje de provisión consumida y el contenido de pesticidas en cada disposición. Para la prueba de toxicidad subletal, observe la O.excavata diariamente durante el capullo bajo lámparas de luz negra para medir la duración del desarrollo larvario. Luego pese las larvas después de 14 días de tratamientos para determinar el aumento de peso larvario.
A continuación, sopese las provisiones restantes después de 14 días de alimentación para calcular el consumo y la eficiencia de conversión de los alimentos ingeridos. Y examine el número de eclosión disparando los capullos con una tijera pequeña cuando las abejas de control emergen en adultos. La prueba de toxicidad letal aguda mostró que el valor LD50 del clorpirifos para las larvas de O.excavata fue de 0,001 microgramos por abeja.
En la prueba de toxicidad subletal, a medida que aumentaba la dosis, los valores índice de aumento de peso larvario, consumo y eficiencia de conversión de alimentos ingeridos disminuyeron para los tratamientos, con los valores más bajos en relación con el control observado en los 0,013 microgramos de clorpirifos por abeja. Por el contrario, la duración más prolongada del desarrollo larvario se observó en 0,016 microgramos de clorpirifós por abeja, en comparación con el tratamiento de control. La evaluación del impacto del clorpirifós en la tasa de eclosión reveló una relación lineal negativa significativa entre las dosis ingeridas de clorpirifos y la tasa de eclosión de O.excavata.
La tasa de eclosión fue considerablemente menor cuando las dosis ingeridas superaron los 0,02 microgramos por abeja que las del tratamiento de control. En este protocolo, la detección de disposiciones de tamaño uniforme es fundamental para minimizar el error de prueba. Esta técnica es útil para explorar los efectos de los pesticidas en el vuelo adulto y la fecundidad de las abejas solitarias, resolviendo así problemas de baja tasa de recuperación y disminución de la población.
