פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לחזות ולמתן את ההשפעות השליליות של חומרי הדברה על דבורים בודדות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הדמיית הזחלים הניזונים משאריות חומרי הדברה באספקה. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שהמאפיינים הביולוגיים של אוסמיה חפירות הם ייחודיים בהשוואה לדבורים חברתיות, ומחקר מועט נערך על O.excavata, במיוחד על הזחל.
כדי להכין את צינור ההזנה, נקב חור בקוטר 0.3 מילימטר לתוך המכסה של צינור צנטריפוגה של שני מיליליטר באמצעות ברזל מתפתל חשמלי. כדי להכין את חומר ההדברה, ממיסים את חומר ההדברה בדרגה הטכנית באצטון כדי לרכוש תמיסות מלאי של 10 מיליגרם למיליליטר, ולאחר מכן מבצעים דילולים הדרגתיים של התמיסה ליותר מחמישה ריכוזים. לאחר מכן, רכשו צינורות דבורים מפלסטיק המכילים אספקה וזחל אוסמיה חופר שזה עתה בקע מתוכנית גידול המונית.
באמצעות מברשת רכה, מפרידים בעדינות את הזחל מההפרשות, בוחרים זחלים נקביים על סמך גודל ההפרשה ומיקום התא בתוך הקן, ואז מניחים את הוראות הגודל האחידות עם הזחל הנקבי שנבחר בצלחות פטרי בקוטר 60 מילימטר ומניחים אותם בצד לשימוש. לפני שתמשיכו לטיפול בחומרי ההדברה, שקלו את ההוראות. כדי לטפל בהוראות באמצעות חומרי הדברה, ראשית, יש למדוד את נפח תמיסת ההדברה.
לאחר מכן משרים את האספקה שנבחרה בגודל שווה בתמיסות ההדברה המדוללות למשך 10 שניות. לאחר הטיפול בהוראות עם חומר ההדברה, יש למדוד שוב את נפח תמיסות ההדברה. לאחר ייבוש האוויר את ההוראות על שולחן עבודה סטרילי, להוסיף אותם לצינורות הצנטריפוגה מוכנים עם חורים.
לאחר מכן, שוקלים 60 נקבות זחלים ובעזרת מברשת רכה, מעבירים את הזחלים אל פני השטח של הכלים המיובשים באופן טבעי, ומוסיפים זחל אחד לכל צינור. אחורי הזחלים בתא גדילה בחושך ב-25 פלוס או מינוס שתי מעלות צלזיוס עם לחות יחסית של 65%-75%. עבור בדיקת הרעילות הקטלנית החריפה, מדוד את תמותת הזחל לאחר שהונח על המטופל ואת הוראות הבקרה במשך 48 שעות.
לאחר מכן, שקלו את ההוראות שנותרו לאחר 48 שעות של גידול חרקים כדי לקבוע את כמות ההפרשה הנצרכת על ידי כל זחל, ולאחר מכן באמצעות נוסחה זו, חישבו את מינון חומרי ההדברה בכל ריכוז הנצרך על ידי כל זחל לפי אחוז ההפרשה הנאכל ותכולת חומרי ההדברה בכל אספקה. לבדיקת הרעילות הסובלתלית, שימו לב ל-O.dicavata מדי יום במהלך פקעת תחת מנורות אור שחור כדי למדוד את משך התפתחות הזחל. לאחר מכן שקלו את הזחלים לאחר 14 יום של טיפולים כדי לקבוע את העלייה במשקל הזחל.
לאחר מכן, שקול את ההוראות שנותרו לאחר 14 ימי האכלה כדי לחשב את הצריכה ואת היעילות של המרת מזון שנבלע. ובחנו את מספר ההסתגרות על ידי הצלפת הפקעות באמצעות מספריים קטנים כאשר דבורי הבקרה מגיחות לבוגרים. בדיקת הרעילות הקטלנית החריפה הראתה כי ערך ה-LD50 של הכלורפיריפוס עבור זחלי O.excavata היה 0.001 מיקרוגרם לדבורה.
בבדיקת הרעילות הסובלתלית, ככל שהמינון עלה, ערכי האינדקס של עלייה במשקל הזחל, הצריכה והיעילות של המרת מזון שנבלע ירדו לטיפולים, כאשר הערכים הנמוכים ביותר ביחס לבקרה נצפו ב-0.013 מיקרוגרם כלורפיריפוס לדבורה. לעומת זאת, משך התפתחות הזחל הממושך ביותר נצפה ב-0.016 מיקרוגרם כלורפיריפוס לכל דבורה, בהשוואה לטיפול הבקרה. הערכת ההשפעה של כלורפיריפוס על קצב ההסתרה גילתה קשר ליניארי שלילי מובהק בין המינונים שנבלעו של כלורפיריפוס לבין קצב ההסתרה של O.excavata.
שיעור האשירה היה נמוך משמעותית כאשר המינונים שנבלעו עלו על 0.02 מיקרוגרם לדבורה מאשר אלה שבטיפול הבקרה. בפרוטוקול זה, סינון הוראות בגודל אחיד הוא קריטי כדי למזער את שגיאת הבדיקה. טכניקה זו מסייעת בחקירת ההשפעות של חומרי הדברה על מעופם של הדבורים הבוגרים ועל הפוריות של דבורים בודדות, ובכך פותרת בעיות של שיעור התאוששות נמוך וירידה באוכלוסייה.
