Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die nachteiligen Auswirkungen von Pestiziden auf Solitärbienen vorherzusagen und zu mildern. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Simulation der Larvenfütterung mit Pestizidresten in Proviant. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da die biologischen Eigenschaften von Osmia excavata im Vergleich zu sozialen Bienen einzigartig sind und wenig Forschung über O.excavata, insbesondere die Larve, durchgeführt wurde.
Um das Zuführrohr vorzubereiten, stanzen Sie mit einem elektrischen Wickeleisen ein Loch mit einem Durchmesser von 0,3 Millimetern in den Deckel eines Zwei-Milliliter-Zentrifugenrohrs. Um das Pestizid herzustellen, lösen Sie das technische Pestizid in Aceton auf, um Stammlösungen von 10 Milligramm pro Milliliter zu erhalten, und führen Sie dann Gradientenverdünnungen der Lösung auf mehr als fünf Konzentrationen durch. Als nächstes erwerben Sie Plastikbienenröhren mit Proviant und frisch geschlüpfter Osmia excavata-Larve aus einem Massenaufzuchtprogramm.
Trennen Sie mit einer weichen Bürste vorsichtig die Larve von den Proviant, wählen Sie weibliche Larven basierend auf der Proviantgröße und der Zellposition innerhalb des Nestes aus, legen Sie dann die Vorräte mit einheitlicher Größe mit der ausgewählten weiblichen Larve in Petrischalen mit einem Durchmesser von 60 Millimetern und legen Sie sie zur Seite für den Gebrauch. Bevor Sie mit der Pestizidbehandlung fortfahren, wägen Sie die Bestimmungen ab. Um die Bestimmungen mit Pestiziden zu behandeln, messen Sie zunächst das Volumen der Pestizidlösung.
Dann tränken Sie die ausgewählten, gleichmäßig großen Vorräte 10 Sekunden lang in den verdünnten Pestizidlösungen. Nachdem Sie die Vorräte mit dem Pestizid behandelt haben, messen Sie das Volumen der Pestizidlösungen erneut. Nachdem Sie die Vorräte auf einem sterilen Arbeitstisch an der Luft getrocknet haben, fügen Sie sie den vorbereiteten Zentrifugenröhrchen mit Löchern hinzu.
Als nächstes wiegen Sie 60 weibliche Larven und übertragen Sie die Larven mit einer weichen Bürste auf die Oberfläche der natürlich getrockneten Proviant und fügen Sie eine Larve pro Röhrchen hinzu. Ziehen Sie die Larven in einer Wachstumskammer im Dunkeln bei 25 plus oder minus zwei Grad Celsius mit 65 bis 75% relativer Luftfeuchtigkeit auf. Für den akuten letalen Toxizitätstest messen Sie die Mortalität der Larve, nachdem sie 48 Stunden lang auf die behandelten und die Kontrollbestimmungen aufgebracht wurde.
Als nächstes wiegen Sie die verbleibenden Vorräte nach 48 Stunden Insektenaufzucht, um die Menge an Vorrat zu bestimmen, die von jeder Larve verbraucht wird, und berechnen Sie dann anhand dieser Formel die Pestiziddosis in jeder von jeder Larve verbrauchten Konzentration entsprechend dem Prozentsatz der gegessenen Vorräte und dem Pestizidgehalt in jeder Proviant. Für den subletalen Toxizitätstest beobachten Sie den O.excavata täglich während des Cocoonings unter Schwarzlichtlampen, um die Dauer der Larvenentwicklung zu messen. Dann wiegen Sie die Larven nach 14 Tagen der Behandlung, um die Larvengewichtszunahme zu bestimmen.
Als nächstes wiegen Sie die nach 14 Tagen Fütterung verbleibenden Vorräte ab, um den Verbrauch und die Effizienz der Umwandlung der aufgenommenen Nahrung zu berechnen. Und untersuchen Sie die Anzahl der Eklosionen, indem Sie die Kokons mit einer kleinen Schere scharf machen, wenn die Kontrollbienen erwachsen werden. Der akute letale Toxizitätstest zeigte, dass der LD50-Wert des Chlorpyrifos für die O.excavata-Larven 0,001 Mikrogramm pro Biene betrug.
Im Test der subletalen Toxizität nahmen mit zunehmender Dosis die Indexwerte der Larvengewichtszunahme, des Verbrauchs und der Effizienz der Umwandlung der aufgenommenen Nahrung für die Behandlungen ab, wobei die niedrigsten Werte relativ zur Kontrolle bei den 0,013 Mikrogramm Chlorpyrifos pro Biene beobachtet wurden. Umgekehrt wurde die längste Larvenentwicklungsdauer in 0,016 Mikrogramm Chlorpyrifos pro Biene im Vergleich zur Kontrollbehandlung beobachtet. Die Bewertung des Einflusses von Chlorpyrifos auf die Eklosionsrate ergab eine signifikante negative lineare Beziehung zwischen den aufgenommenen Dosierungen von Chlorpyrifos und der Eklosionsrate von O.excavata.
Die Eklosionsrate war erheblich niedriger, wenn die eingenommenen Dosierungen 0,02 Mikrogramm pro Biene überstiegen als bei der Kontrollbehandlung. In diesem Protokoll ist das Screening auf Bestimmungen einheitlicher Größe entscheidend, um den Testfehler zu minimieren. Diese Technik ist hilfreich, um die Auswirkungen von Pestiziden auf den erwachsenen Flug und die Fruchtbarkeit von Einzelbienen zu erforschen und so Probleme der niedrigen Erholungsrate und des Populationsrückgangs zu lösen.
