このプロトコルは、孤独なミツバチに対する農薬の悪影響を予測し、軽減するために使用することができる。この技術の主な利点は、規定内の残留農薬を食べる幼虫をシミュレートすることです。Osmia excavataの生物学的特性は社会的なミツバチと比較してユニークであり、O.excavata、特に幼虫に関する研究はほとんど行われていないため、この方法の視覚的実証は重要です。
給餌管を準備するには、電気巻アイロンを用いて2ミリリットルの遠沈管の蓋に直径0.3ミリメートルの穴を開ける。農薬を調製するには、技術グレードの農薬をアセトンに溶解して1ミリリットルあたり10ミリグラムのストック溶液を取得し、次いで溶液の5つ以上の濃度への勾配希釈を行う。次に、大量飼育プログラムから、規定と新しく孵化したオスミアの掘削機の幼虫を含むプラスチック製の蜂管を入手します。
柔らかいブラシを使用して、幼虫を規定から静かに分離し、巣内の規定サイズおよび細胞位置に基づいて雌幼虫を選択し、次に、選択された雌幼虫と均一なサイズの規定を直径60ミリメートルのペトリ皿に入れ、使用のためにそれらを脇に置いておく。農薬処理に進む前に、規定を比較検討してください。規定を農薬で処理するには、まず、農薬溶液の量を測定する。
次に、選択した均等なサイズの規定を希釈農薬溶液に10秒間浸します。規定を農薬で処理した後、農薬溶液の体積を再度測定する。滅菌作業テーブル上の規定を風乾した後、それらを穴の開いた調製された遠沈管に加える。
次に、60匹の雌幼虫の体重を量り、柔らかいブラシを使用して、幼虫を自然乾燥した規定の表面に移し、チューブごとに1匹の幼虫を加える。暗所で成長室で幼虫を摂氏25度プラスマイナス2度、相対湿度65〜75%で飼育する。急性致死毒性試験では、治療済みおよび対照規定に48時間置かれた後の幼虫の死亡率を測定する。
次に、昆虫飼育の48時間後に残っている規定を秤量して各幼虫が消費する規定の量を決定し、次いでこの式を用いて、各幼虫が消費する各濃度における農薬の投与量を、食べられた供給物の割合および各規定の農薬含有量に従って計算する。致死性以下の毒性試験のために、ブラックライトランプの下で繭付け中に毎日O.excavataを観察し、幼虫の発生期間を測定する。その後、14日間の治療後に幼虫を計量し、幼虫の体重増加を決定した。
次に、摂食の14日後に残っている規定を秤量して、摂取した食物の消費量および変換の効率を計算する。そして、対照ミツバチが成虫に出現したときに小さなハサミを使って繭を狙撃して侵入回数を調べます。急性致死毒性試験では、O.excavata幼虫のクロルピリホスのLD50値はミツバチあたり0.001マイクログラムであることが示されました。
致死的毒性試験では、用量が増加するにつれて、幼虫の体重増加、消費、および摂取された食物の変換効率の指標値は、治療のために減少し、ミツバチ当たり0.013マイクログラムのクロルピリホスで観察された対照と比較して最も低い値であった。逆に、最も延長された幼虫の発生持続時間は、対照処置と比較して、ミツバチ当たり0.016マイクログラムのクロルピリホスで観察された。クロルピリホスのエクロジオン速度に対するクロルピリホスの影響の評価は、クロルピリホスの摂取用量とO.excavataのエクロジオン速度との間に有意な負の線形関係を明らかにした。
摂取された用量がミツバチ当たり0.02マイクログラムを超えた場合、エクロジオン率は対照治療の用量よりもかなり低かった。このプロトコルでは、テストエラーを最小限に抑えるために、均一なサイズの規定のスクリーニングが重要です。この技術は、孤独なミツバチの成虫の飛行と繁殖力に対する農薬の影響を探るのに役立ち、したがって、低い回復率と人口減少の問題を解決するのに役立ちます。
