Bu protokol, pestisitlerin yalnız arılar üzerindeki olumsuz etkilerini tahmin etmek ve hafifletmek için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hükümlerde artık pestisit üzerinde larva beslenmesini simüle etmektir. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritiktir, çünkü Osmia ekskavata'nın biyolojik özellikleri sosyal arılarla karşılaştırıldığında benzersizdir ve O.excavata, özellikle larva üzerinde çok az araştırma yapılmıştır.
Besleme tüpünü hazırlamak için, elektrikli bir sarma demiri kullanarak iki mililitrelik bir santrifüj tüpünün kapağına 0,3 milimetre çapında bir delik açın. Pestisiti hazırlamak için, mililitre başına 10 miligramlık stok çözeltileri elde etmek için teknik sınıf pestisiti asetonda çözün, ardından çözeltinin beşten fazla konsantrasyonda gradyan seyreltimlerini gerçekleştirin. Daha sonra, bir toplu yetiştirme programından erzak ve yeni taranmış Osmia ekskava larvası içeren plastik arı tüpleri edinin.
Yumuşak bir fırça kullanarak, larvaları hükümlerden nazikçe ayırın, yuva içindeki provizyon boyutuna ve hücre konumuna göre dişi larvaları seçin, ardından seçilen dişi larva ile tek tip boyuttaki hükümleri 60 milimetre çapında Petri kaplarına yerleştirin ve kullanım için bir kenara koyun. Pestisit tedavisine geçmeden önce, hükümleri tartın. Hükümleri pestisitlerle tedavi etmek için, önce pestisit çözeltisinin hacmini ölçün.
Ardından, seçilen eşit büyüklükteki hükümleri seyreltilmiş pestisit çözeltilerinde 10 saniye bekletin. Hükümleri pestisit ile işlemden geçirdikten sonra, pestisit çözeltilerinin hacmini tekrar ölçün. Steril bir çalışma masasındaki hükümleri hava ile kuruttuktan sonra, bunları delikli hazırlanan santrifüj tüplerine ekleyin.
Daha sonra, 60 dişi larva ağırlığında ve yumuşak bir fırça kullanarak, larvaları doğal olarak kurutulmuş hükümlerin yüzeyine aktarın ve tüp başına bir larva ekleyin. Larvaları% 65 ila% 75 bağıl nem ile 25 artı veya eksi iki santigrat derecede karanlıkta bir büyüme odasında besleyin. Akut ölümcül toksisite testi için, larvaların tedavi edildikten sonra mortalitesini ve 48 saat boyunca kontrol hükümlerini ölçün.
Daha sonra, her larva tarafından tüketilen erzak miktarını belirlemek için 48 saatlik böcek yetiştiriciliğinden sonra kalan hükümleri tartın, daha sonra bu formülü kullanarak, her larva tarafından tüketilen her konsantrasyondaki pestisit dozunu, yenen erzak yüzdesine ve her provizyondaki pestisit içeriğine göre hesaplayın. Subletal toksisite testi için, larva gelişim süresini ölçmek için siyah ışık lambaları altında koza sırasında günlük olarak O.excavata'yı gözlemleyin. Daha sonra larva kilo alımını belirlemek için 14 günlük tedavilerden sonra larvaları tartın.
Daha sonra, yutulan gıdaların tüketimini ve dönüşüm verimliliğini hesaplamak için 14 günlük beslenmeden sonra kalan hükümleri tartın. Kontrol arıları yetişkinlere girdiğinde küçük bir makas kullanarak kozaları keskin nişancı kullanarak eklozyon sayısını inceleyin. Akut ölümcül toksisite testi, O.excavata larvaları için klorpirifosun LD50 değerinin arı başına 0.001 mikrogram olduğunu göstermiştir.
Sublethal toksisite testinde, doz arttıkça, larva kilo alımı, tüketimi ve yutulan gıdaların dönüşümünün etkinliğinin indeks değerleri, arı başına 0.013 mikrogram klorpirifosta gözlenen kontrole göre en düşük değerlerle tedaviler için azalmıştır. Tersine, en uzun larva gelişim süresi, kontrol tedavisine kıyasla, arı başına 0.016 mikrogram klorpirifos olarak gözlenmiştir. Klorpirifosun eklozyon hızı üzerindeki etkisinin değerlendirilmesi, alınan klorpirifos dozajları ile O.excavata'nın eklozyon hızı arasında anlamlı bir negatif doğrusal ilişki olduğunu ortaya koymuştur.
Eklozyon oranı, yutulan dozajlar arı başına 0.02 mikrogramı aştığında, kontrol tedavisindekilerden oldukça düşüktü. Bu protokolde, test hatasını en aza indirmek için tek tip boyuttaki hükümlerin taranması kritik öneme sahiptir. Bu teknik, pestisitlerin yetişkin uçuşu ve yalnız arıların doğurganlığı üzerindeki etkilerini araştırmada yardımcı olur, böylece düşük iyileşme oranı ve nüfus düşüşü sorunlarını çözer.
