Этот протокол может быть использован для прогнозирования и смягчения неблагоприятного воздействия пестицидов на одиночных пчел. Основным преимуществом данной методики является имитация личиночного питания остаточным пестицидом в провизии. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку биологические характеристики Osmia excavata уникальны по сравнению с социальными пчелами, и было проведено мало исследований на O.excavata, особенно на личинке.
Чтобы подготовить питательную трубку, продуйте отверстие диаметром 0,3 миллиметра в крышке двухмиллилитровой центрифужной трубки с помощью электрического обмоточного утюга. Для приготовления пестицида растворяют пестицид технического класса в ацетоне, чтобы получить исходные растворы по 10 миллиграмм на миллилитр, затем выполняют градиентные разведения раствора более чем на пять концентраций. Затем приобретите пластиковые пчелиные трубки, содержащие провизию и недавно вылупившуюся личинку Osmia excavata из программы массового выращивания.
Используя мягкую щетку, аккуратно отделите личинку от провизии, выберите личинок самок в зависимости от размера запаса и положения клеток в гнезде, затем поместите равномерное положение о размере с выбранной личинкой самки в чашки Петри диаметром 60 миллиметров и отложите их для использования. Прежде чем приступить к обработке пестицидами, взвесьте положения. Чтобы обработать провизию пестицидами, сначала измерьте объем пестицидного раствора.
Затем замочите выбранные равномерного размера провизии в разбавленных растворах пестицидов в течение 10 секунд. После обработки провизии пестицидом еще раз измерьте объем растворов пестицидов. После воздушной сушки провизии на стерильном рабочем столе добавьте их в подготовленные центрифужные трубки с отверстиями.
Далее взвесьте 60 личинок самок и с помощью мягкой щетки перенесите личинки на поверхность естественно высушенной провизии, добавив по одной личинке на трубку. Выращивайте личинок в камере роста в темноте при 25 плюс-минус двух градусах Цельсия с относительной влажностью от 65 до 75%. Для теста на острую смертельную токсичность измерьте смертность личинки после того, как она была помещена на обработанные и контрольные положения в течение 48 часов.
Затем взвесьте запасы, оставшиеся после 48 часов выращивания насекомых, чтобы определить количество провизии, потребляемой каждой личинкой, затем, используя эту формулу, рассчитайте дозу пестицида в каждой концентрации, потребляемой каждой личинкой, в соответствии с процентом съеденного провизии и содержанием пестицидов в каждом продукте. Для испытания на сублетальную токсичность ежедневно наблюдайте за O.excavata во время кокона под лампами черного света, чтобы измерить продолжительность развития личинок. Затем взвесьте личинок после 14 дней лечения, чтобы определить увеличение веса личинок.
Далее взвесьте запасы, оставшиеся после 14 дней кормления, чтобы рассчитать потребление и эффективность конверсии проглоченной пищи. И изучите количество эклозий, снайперскивая коконы с помощью небольших ножниц, когда контрольные пчелы выходят во взрослых особей. Тест на острую летальную токсичность показал, что значение LD50 хлорпирифоса для личинок O.excavata составляло 0,001 микрограмма на пчелу.
В сублетальном тесте на токсичность, по мере увеличения дозы, значения индекса увеличения веса личинок, потребления и эффективности конверсии проглоченной пищи снижались для лечения, причем самые низкие значения относительно контроля наблюдались в 0,013 мкг хлорпирифоса на пчелу. И наоборот, наиболее длительная продолжительность развития личинок наблюдалась в 0,016 мкг хлорпирифоса на пчелу по сравнению с контрольной обработкой. Оценка влияния хлорпирифоса на скорость эклозии выявила значительную отрицательную линейную зависимость между проглоченными дозами хлорпирифоса и скоростью эклозии O.excavata.
Частота эклозии была значительно ниже, когда принимаемые внутрь дозы превышали 0,02 микрограмма на пчелу, чем при контрольном лечении. В этом протоколе скрининг на наличие положений одинакового размера имеет решающее значение для сведения к минимуму погрешности испытания. Этот метод полезен при изучении воздействия пестицидов на взрослый полет и плодовитость одиночных пчел, тем самым решая проблемы низкой скорости восстановления и сокращения популяции.
