El protocolo describe un método para generar un modelo ortotópico de ratón de cáncer de páncreas utilizando un sistema que combina la inyección de células y la evaluación del injerto y el desarrollo de tumores. Esta técnica tiene una gran reproducibilidad, es mínimamente invasiva, permite superar muchos inconvenientes causados por el procedimiento quirúrgico y cumple con los principios de las 3R. La inyección guiada por eco podría usarse para otros modelos ortotópicos, como inyecciones en el árbol biliar o modelos de cáncer de mama.
El uso de tal técnica podría combinarse con el uso de moléculas pequeñas. Comience a preparar 20 ratones hembra Athymic Nude-Foxn-1nu de 8 semanas de edad para la inyección guiada por ultrasonido administrando tramadol por vía intraperitoneal a una dosis de 5 miligramos por kilogramo usando una jeringa de tuberculina con una aguja de calibre 27. A continuación, encienda el generador de imágenes y seleccione Mouse, Small, Abdominal" en el menú de aplicaciones del panel del transductor.
Asegúrese de que aparece la ventana de imágenes Modo B o Modo de brillo y que el sistema está listo para adquirir datos en modo B. Vaya al Explorador de estudios para seleccionar Nuevo estudio" y escriba el nombre y la información del estudio, como la fecha del estudio. Luego, complete toda la información necesaria en el Nombre de la serie, como la cepa del animal, la identificación, la fecha de nacimiento.
Una vez introducida la información, pulse Listo"para preparar el programa para la creación de imágenes en modo B. Coloque el ratón anestesiado en su flanco derecho sobre la mesa de manipulación calentada a 37 grados centígrados con su hocico en un cono de nariz y aplique una gota de ungüento veterinario en los ojos del ratón. Luego, use una gasa adhesiva para pegar la mano derecha, el pie derecho y la cola del mouse en las almohadillas de electrodos en la plataforma del animal.
La frecuencia respiratoria y el electrocardiograma del ratón se registran a través de las almohadillas de los electrodos. Antes de inyectar al ratón con células PANC1, desinfecte la piel del ratón con etanol al 70% y mantenga la piel del flanco izquierdo estirada con una gasa adhesiva. Use una jeringa de 20 mililitros sin la aguja para aplicar gel de ultrasonido en el abdomen y el flanco izquierdo del ratón.
Con la ayuda de la perilla de control de altura del transductor de ultrasonido, baje el transductor para tocar el flanco izquierdo del ratón y coloque el transductor transversalmente al cuerpo del animal. Luego, mueva el transductor para visualizar el páncreas en la pantalla del transductor utilizando imágenes en modo B. Prepare una jeringa Hamilton de 50 microlitros, que contenga 10 millones de células PANC1 suspendidas en 20 microlitros de PBS con una aguja desinfectada de calibre 28 de 30 milímetros y coloque la jeringa en el soporte apropiado.
Usando el micromanipulador titular, baje la jeringa a la piel del ratón, con el bisel de la aguja hacia arriba y en el mismo plano que el transductor de ultrasonido, formando un ángulo de 45 grados con el transductor. Perfore la piel con el micromanipulador e inserte la aguja de la jeringa en el páncreas mientras observa la imagen de ultrasonido en exhibición para seguir la trayectoria. Una vez que la aguja se inserta en el páncreas, inyecte un bolo de 20 microlitros que contenga las células aplicando una presión constante sobre el émbolo de la jeringa.
El procedimiento de inyección correcto se puede verificar por la presencia de una pequeña burbuja en el páncreas y el flujo de líquido hipoecogénico. Después de 5 a 10 segundos de la inyección, retraiga la aguja. Luego, retire el transductor de ultrasonido y limpie el gel del flanco.
Cuando haya terminado, coloque al ratón solo en una nueva jaula bajo observación hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal. La imagen representativa muestra la presencia de una masa tumoral en la cola del páncreas después de la inyección celular ecoguiada, confirmando la reproducibilidad del protocolo. El volumen tumoral de los tumores pancreáticos ortotópicos derivados de las células PANC1 se evaluó mediante imágenes de ultrasonido una vez a la semana, a partir del día 8 después de la inyección celular.
En el punto final del experimento en el día 43, se adquirieron imágenes de ultrasonido de las masas tumorales. En el examen de necropsia, se observó masa tumoral, una pequeña porción de un páncreas, bazo, estómago e hígado sanos. Además, las masas tumorales fueron explantadas para análisis histológico.
Es importante colocar el ratón en su lado derecho sobre la mesa, y la piel debe estirarse adecuadamente para evitar el riesgo de que las células se derramen fuera del páncreas. Las aplicaciones futuras del modelo de cáncer de páncreas obtenido por la inyección guiada por ultrasonido incluyen los estudios dirigidos al desarrollo de tratamientos terapéuticos apropiados o combinaciones de tratamientos.
