El protocolo aquí es para construir un modelo animal compuesto de isquemia miocárdica. Combinación con aterosclerosis y exposición aguda a PM. Este es un modelo animal más confiable para la investigación de enfermedades relacionadas.
Este modelo animal puede simular mejor tales enfermedades en una situación real. Además, este método tiene una alta tasa de éxito y es fácil de realizar. El modelo se puede utilizar para la investigación patológica y el desarrollo de fármacos de enfermedades con factores complejos.
Este modelo puede proporcionar una plataforma para la investigación cardiovascular y toxicológica ambiental, y aporta ideas y referencias para la investigación de la enfermedad multifactorial. La intubación orotraqueal, la apertura agrietada del tórax y la posición correcta de la ligadura son las claves del éxito de este modelo. Es esencial mantener la información del ratón y prevenir hemorragias.
Comience seleccionando dos o tres ratones al azar y verifique si hay una placa en el arco aórtico mediante imágenes de ultrasonido o por observación anatómica directa. Anestesiar el ratón seleccionado y colocarlo en posición supina sobre la placa del ratón. Engancha los incisivos superiores a la banda elástica.
Enfoque un pequeño foco LED con un tubo flexible en la tráquea, que está alrededor del punto medio de la línea axilar. Ponga un pequeño hisopo de algodón estéril en la boca del ratón y luego enrolle el hisopo para sacar la lengua. Sostenga la lengua y tire suavemente hacia arriba para formar la cavidad oral, la faringe y la tráquea en la misma dirección longitudinal.
La glotis, que es la entrada de la tráquea, se puede ver como un punto brillante que se abre y se cierra con cada respiración. Inserte una canola de calibre 22 en la tráquea del ratón apuntando a la glotis, y luego saque el núcleo de la aguja. Use una pistola de pipeta con una pequeña cantidad de solución salina normal para probar si el tubo está correctamente en la sibilancia.
Si el tubo está en la posición correcta, la columna de líquido en la pistola de pipeta rebotará con cada respiración. Deje caer 50 microlitros de suspensión DPM en el tubo con una pistola de pipetas. Retire la aguja permanente de la mascota después de la exposición a PM.
Mantenga el mouse en la almohadilla térmica hasta que recupere la conciencia y luego vuelva a colocar el mouse en la jaula de la casa. Coloque el ratón en posición supina sobre la plataforma de intubación y fije el ratón. Eliminar el vello del pecho izquierdo y parte del pecho derecho adyacente con crema depilatoria.
Luego conecte la aguja de permanencia de la mascota con un ventilador animal. Limpie la piel con yodoformo y alcohol para desinfectar. Haga un corte de piel de aproximadamente un centímetro con tijeras oftálmicas y sujete los músculos para exponer las costillas.
Sujete la costilla con una pinza oftálmica con diente y haga un pequeño corte en el tercer espacio intercostal. Haga una ventana de operación con herramientas caseras de apertura de pecho y luego rasgue las membranas pericárdicas. Sostenga la sutura estéril de seda de seis cero con una aguja usando pinzas hemostáticas microvasculares.
Pase la seda a través de un miocardio de dos milímetros de ancho en el área donde se encuentra la arteria coronaria. Coloque un trozo corto de seda estéril de cinco ceros entre la ligadura y los tejidos del miocardio para evitar la rotura del tejido. Ate firmemente la arteria coronaria descendente anterior izquierda y el pequeño haz del miocardio que la rodea.
La legación se considera exitosa cuando la pared anterior del ventrículo izquierdo se vuelve pálida. Exprima suavemente el aire del pecho. Luego suturar los músculos intercostales y la piel secuencialmente con seda estéril de cinco ceros.
Limpie toda la mancha de sangre después de la cirugía y luego coloque el ratón en una almohadilla térmica en una posición lateral reclinada. Controle continuamente los signos del ratón durante aproximadamente cinco a 20 minutos hasta que se recuperen de la anestesia. Una vez recuperado el reflejo de enderezamiento, transfiera el ratón a una jaula de recuperación limpia en una almohadilla térmica con la botella de comida y agua.
Continúe monitoreando durante 15 a 30 minutos para asegurar la supervivencia del ratón. Finalmente, inyecte penicilina sódica por vía intramuscular de acuerdo con la dosis deseada para prevenir la infección de la herida. El grado de isquemia se examinó mediante tinción TTC.
Los tejidos normales se vuelven rojos cuando el TTC reacciona con la succinato deshidrogenasa. Mientras que los tejidos isquémicos permanecen pálidos debido a la disminución de la actividad de la deshidrogenasa. Las imágenes representativas muestran los tejidos cardíacos que no sufrieron cirugía de IM o exposición a PM, sufrieron cirugía de IM pero no exposición a PM, y sufrieron cirugía de IM y exposición a PM.
La exposición a PM agravó la isquemia miocárdica. Oil Red O puede colorear con precisión las grasas neutras, como los triglicéridos en los tejidos. Las manchas rojas en la imagen indican placas.
Las placas en la aorta de ratones de tipo salvaje con dieta regular, ratones knockout APO E con dieta alta en grasas y ratones knockout APO E con una dieta alta en grasas y que sufrieron exposición a PM se muestran aquí por tinción de O rojo aceite. La alimentación alta en grasas condujo a la aterosclerosis en ratones knockout APO E y la exposición a PM agravó la aterosclerosis. Es importante asegurarse de que el tubo endotraqueal se inserte correctamente durante la seromiotomía.
El operador debe completar la operación de intubación de forma rápida, precisa y siempre prestar atención a la condición respiratoria del animal durante la operación. Nuestro método ayuda a los investigadores que se preocupan por la intersección de la contaminación del aire y las enfermedades cardiovasculares. Aquí te damos una idea.
Por supuesto, los investigadores también pueden llevar a cabo directamente investigaciones basadas en el modelo animal que describimos.
