Este método tiene el potencial de ser utilizado como una nueva estrategia clínica para la osteoartritis de rodilla. Esta técnica es segura, sencilla para las inyecciones locales y el tratamiento es eficaz en la experimentación animal. Las nanopartículas de plata podrían ser aplicables en otras enfermedades inflamatorias y necesitan más investigación.
Por lo tanto, es importante tener cuidado al inyectar el tamaño de la rodilla de los ratones, asegurando el procedimiento correcto. Evaluar el llenado manual de la articulación de la rodilla en las rodillas y evitar cualquier fuga de fármacos. Comience colocando un ratón anestesiado en una mesa quirúrgica.
Pega con cinta adhesiva las extremidades del ratón y luego afeita el pelaje con una navaja. A continuación, desinfecte la región afeitada tres veces con exfoliantes alternos de yodoformo al 0,1% y alcohol. Con unas tijeras, haga una incisión en la piel, exponiendo secuencialmente el tejido subcutáneo y el ligamento infrarrotuliano.
Con una jeringa de insulina de un mililitro, inyecte 10 unidades de colagenasa tipo dos en la cavidad articular. Suturar el tejido subcutáneo, luego suturar la piel. Ahora esterilice el área suturada con yodoformo al 0,1%.
Coloque al ratón en jaulas ventiladas individualmente una vez que se despierte de la anestesia. Comience agregando 400 microlitros de colágeno tipo uno a un tubo de microcentrífuga de 1.5 mililitros colocado en hielo. Ahora, agregue 200 microlitros de PBX, mezcle bien y coloque los tubos sobre hielo.
Agregue 400 microlitros de nanopartículas de plata a esta suspensión, lo que hace que la concentración final de nanopartículas sea de un milimol. Mezcla bien la suspensión. Una semana después de la inyección de colagenasa, saque a los ratones KOA de sus jaulas.
Antes de inyectar nanopartículas de plata, anestesiar y preparar quirúrgicamente al ratón como se demostró anteriormente. Use tijeras para exponer secuencialmente la piel, el tejido subcutáneo y los ligamentos de la rodilla. Luego, usando la aguja de una jeringa de insulina de un mililitro, ingrese a la cavidad articular en un ángulo de 15 grados e inyecte lentamente 20 microlitros de la mezcla de colágeno de nanopartículas de plata.
Durante la inyección, la articulación de la rodilla se hinchará, lo que garantiza el éxito de la inyección de fármacos. Después de suturar y esterilizar el sitio quirúrgico como antes, coloque a los ratones en jaulas ventiladas individualmente una vez que desaparezca el efecto de la anestesia. Esterilizar quirúrgicamente y diseccionar las extremidades del ratón sacrificado.
Extraiga las articulaciones de la rodilla, incluidos el fémur y la tibia, y extraiga el tejido muscular. Recoja los tejidos de la articulación de la rodilla, incluidos el fémur y la tibia y el ligamento blando circundante. Encapsular en formalina al 10% para su conservación y fijación.
Después de la fijación nocturna de los tejidos, incruste las secciones en parafina. Con un micrótomo, corte los tejidos incrustados en secciones de 0,4 micro de grosor. Someter los tejidos a diferentes técnicas de tinción.
El peso corporal promedio de los ratones KOA fue significativamente menor que el de los ratones en el grupo de control. El peso corporal promedio de los ratones en el grupo de colagenasa tipo dos y nanopartículas de plata fue mayor en comparación con los ratones KOA. La tinción HE mostró que el grosor sinovial de los ratones en el grupo KOA fue significativamente mayor en comparación con el grupo control.
El grosor sinovial del grupo tratado con nanopartículas se redujo en relación con el grupo KOA. La hiperplasia vascular de la membrana sinovial se observó en el grupo KOA y se encontró que se redujo significativamente en el grupo tratado con nanopartículas. La tinción con safranina-O reveló una matriz de cartílago destruida en ratones KOA, mientras que los ratones tratados con la mezcla de colágeno de nanopartículas mostraron una matriz de cartílago significativamente mejor.
Las puntuaciones de las características morfológicas fueron más altas en el grupo tratado con colágeno II en relación con el grupo control. La tinción inmunohistoquímica demostró una reducción de la infiltración de neutrófilos en las regiones sinoviales de los ratones tratados con nanopartículas en comparación con el grupo KOA. Es importante evitar el bloqueo del fármaco durante la inyección de colagenasa tipo II y varias nanopartículas.
El efecto terapéutico de varias nanopartículas podría intentarse en modelos animales de lesión del ligamento cruzado anterior.
