El modelo de lesión cardíaca tiene implicaciones significativas para dilucidar el mecanismo de regeneración cardíaca. Este protocolo estableció un modelo de resección apical en adultos X.Tropicalis, que puede emplearse para dilucidar el mecanismo de regeneración cardíaca adulta. Estudios previos han declarado que el corazón puede regenerarse después de la resección apical en adultos X.Tropicalis.
Y se han publicado protocolos de resección del ápice en modelos de pez cebra y ratón, pero no hay un protocolo publicado para la resección apical en X.tropicalis. La pérdida de la capacidad regenerativa en mamíferos adultos hace que la insuficiencia cardíaca sea una de las principales causas de muerte en todo el mundo. Ilustrar los mecanismos de regeneración cardíaca utilizando esta técnica tendrá implicaciones significativas para las terapias para las cardiopatías isquémicas.
Es mejor practicar bien la técnica antes de realizar la cirugía, ya que no debe afectar el tiempo del proceso operativo. Y es muy importante mantener a la rana anestesiada. Para comenzar, coloque el abdomen anestesiado de Xenopus tropicalis hacia arriba y cubra el abdomen con una gasa destilada empapada en agua para evitar que se seque la piel del animal durante la operación.
Presione suavemente el pecho con fórceps y encuentre el centro del pecho paralelo a la extremidad anterior inferior. Levante la piel con tijeras oftálmicas y haga suavemente una pequeña incisión de aproximadamente 1 centímetro. Usando tijeras oftálmicas, levante la capa muscular debajo de la piel y cree una herida en el músculo central del pecho.
Como el corazón está ubicado en la posición superior del sitio de la herida, presione suavemente el tórax con los fórceps oftálmicos para exprimir el corazón de la herida. Suavemente, sujete el pericardio con fórceps y rompa suavemente con tijeras oftálmicas usando el ápice del corazón. Espere a que el pericardio se desprenda debido al bombeo de sangre sistólica.
Sostenga la punta del corazón con fórceps en la mano no dominante y levante el corazón ligeramente de acuerdo con el ritmo de contracción cardíaca. Cuando el corazón se contrae para recircular la sangre a través de los vasos sanguíneos, corte rápidamente el ápice del corazón, aproximadamente el 14% del ventrículo. Coloque el corazón de nuevo en el pecho con fórceps y una bola absorbente.
Suturar la piel con un hilo quirúrgico no absorbente 4-0, asegurando que no se suture en la capa muscular para evitar la mortalidad postoperatoria. En el grupo simulado, realizar la toracotomía y abrir el pericardio, como se demostró anteriormente, pero suturar sin realizar la resección del ápice. Coloque al animal postoperatorio con su abdomen hacia arriba en una placa de Petri que contenga una pequeña cantidad de agua desionizada.
Espere unos 10 minutos para que el animal recupere la conciencia y observe su movilidad y sutura de la herida durante la actividad. Transfiera las ranas a un recipiente lleno de agua pura para el cultivo y reemplácelo con agua pura diariamente para evitar la infección de la herida. Después de la resección apical del corazón de Xenopus tropicalis, se formó un coágulo de sangre y selló la herida en el ventrículo, como se observó mediante la tinción de hematoxilina y eosina, así como a través de la tinción tricrómica de Masson.
El análisis morfológico del corazón a los 0, 7, 14 y 30 días de post-resección reveló que el coágulo de sangre causado por la lesión cardíaca desapareció en el día 30. Al mismo tiempo, en el día 14, se observó una regeneración significativa del ápice, y para el día 30, el ápice cardíaco resecado se había regenerado casi por completo. El análisis histológico mostró una masa de fibrina en el sitio de resección el día 14, y el corazón se regeneró completamente sin cicatrices para el día 30.
El análisis de fibrosis miocárdica del corazón por tinción de Masson mostró que dentro del día 14 de la resección apical, el coágulo desapareció y fue reemplazado por fibrina. Del día 14 al 30, el miocardio reemplazó gradualmente la fibrina y reparó el ápice del ventrículo dañado. Esta técnica permitirá a los investigadores explorar el mecanismo celular de la regeneración cardíaca en Xenopus tropicalis y conocer las células que están relacionadas con la regeneración cardíaca en el corazón de las ranas utilizando el análisis de rastreo de linaje después de la resección del ápice.
