Kardiyak hasar modeli, kardiyak rejenerasyon mekanizmasının aydınlatılmasında önemli bir etkiye sahiptir. Bu protokol, yetişkin X.Tropicalis'te yetişkin kalp rejenerasyonunun mekanizmasını aydınlatmak için kullanılabilecek apikal bir rezeksiyon modeli oluşturmuştur. Önceki çalışmalar, erişkin X.Tropicalis'te apikal rezeksiyon sonrası kalbin yenilenebileceğini belirtmiştir.
Zebra balığı ve fare modellerinde apeks rezeksiyon protokolleri yayınlanmıştır, ancak X.tropicalis'te apikal rezeksiyon için yayınlanmış bir protokol yoktur. Yetişkin memelilerde rejeneratif kapasitenin kaybedilmesi, kalp yetmezliğini dünya çapında önde gelen ölüm nedenlerinden biri haline getirmektedir. Bu tekniği kullanarak kardiyak rejenerasyon mekanizmalarının gösterilmesi, iskemik kalp hastalıklarının tedavileri için önemli etkilere sahip olacaktır.
Ameliyatı gerçekleştirmeden önce tekniği iyi uygulamak daha iyidir, çünkü ameliyat sürecini etkilememelidir. Kurbağayı uyuşturmak çok önemlidir. Başlamak için, anestezi uygulanmış Xenopus tropicalis karnını yukarı yerleştirin ve operasyon sırasında hayvanın derisinin kurumasını önlemek için karnı damıtılmış suya batırılmış gazlı bezle örtün.
Göğsüne forseps ile hafifçe bastırın ve göğsün merkezini alt ön ayağa paralel olarak bulun. Cildi oftalmik makasla kaldırın ve yavaşça yaklaşık 1 santimetrelik küçük bir kesi yapın. Oftalmik makas kullanarak, cildin altındaki kas tabakasını toplayın ve merkezi göğüs kasında bir yara oluşturun.
Kalp, yara bölgesinin üst pozisyonunda bulunduğundan, kalbi yaradan sıkmak için göğsüne oftalmik forseps ile hafifçe bastırın. Nazikçe perikardı forseps ile sıkıştırın ve kalbin tepesini kullanarak oftalmik makas kullanarak yumuşak bir şekilde kırın. Sistolik kan pompalaması nedeniyle perikardın çıkmasını bekleyin.
Baskın olmayan elde forseps ile kalbin ucunu tutun ve kalp kasılma ritmine göre kalbi hafifçe kaldırın. Kalp, kan damarları boyunca kan dolaşımını sağlamak için büzüldüğünde, kalbin tepesini, ventrikülün yaklaşık% 14'ünü hızla kesin. Forseps ve emici bir top kullanarak kalbi tekrar göğsünüze yerleştirin.
Cildi 4-0 emici olmayan bir cerrahi iplikle dikin ve postoperatif mortaliteyi önlemek için kas tabakasına dikiş atılmamasını sağlayın. Sahte grupta, torakotomi yapın ve daha önce gösterildiği gibi perikardın açılması, ancak apeks rezeksiyonu yapılmadan dikiş atılması sağlanmalıdır. Ameliyat sonrası hayvanı, karnı yukarı bakacak şekilde, az miktarda deiyonize su içeren bir Petri kabına yerleştirin.
Hayvanın bilincini yeniden kazanması için yaklaşık 10 dakika bekleyin ve aktivite sırasında hareketliliğini ve yara dikişini gözlemleyin. Kurbağaları yetiştirme için saf suyla dolu bir kaba aktarın ve yara enfeksiyonunu önlemek için günlük olarak saf suyla değiştirin. Xenopus tropicalis kalbinin apikal rezeksiyonundan sonra, hematoksilin ve eozin boyamasının yanı sıra Masson'un trikrom boyaması ile gözlendiği gibi, ventriküldeki yarayı bir kan pıhtısı oluşturdu ve kapattı.
Rezeksiyon sonrası 0, 7, 14 ve 30 günlük kalp morfolojik analizi, kalp hasarının neden olduğu kan pıhtısının 30. günde kaybolduğunu ortaya koydu. Aynı zamanda, 14. günde, tepenin önemli ölçüde yenilenmesi görüldü ve 30. günde, rezeke edilen kalp tepesi neredeyse tamamen yenilendi. Histolojik analiz, 14. günde rezeksiyon bölgesinde bir fibrin kütlesi gösterdi ve kalp 30. günde yara izi bırakmadan tamamen yenilendi.
Masson'un boyanmasıyla kalbin miyokard fibrozis analizi, apikal rezeksiyonun 14. gününde pıhtının kaybolduğunu ve fibrin ile değiştirildiğini gösterdi. 14. günden 30. güne kadar, miyokard kademeli olarak fibrinin yerini aldı ve hasarlı ventrikül tepesini onardı. Bu teknik, araştırmacıların Xenopus tropicalis'teki kalp rejenerasyonunun hücresel mekanizmasını keşfetmelerini ve apeks rezeksiyonundan sonra soy izleme analizini kullanarak kurbağaların kalbinde kardiyak rejenerasyonla ilgili hücreleri bilmelerini sağlayacaktır.
