O modelo de lesão cardíaca tem implicações significativas para a elucidação do mecanismo de regeneração cardíaca. Este protocolo estabeleceu um modelo de ressecção apical em X.Tropicalis adulto, que pode ser empregado para elucidar o mecanismo de regeneração cardíaca do adulto. Estudos anteriores afirmaram que o coração pode se regenerar após ressecção apical em adultos X.Tropicalis.
E protocolos de ressecção de ápice foram publicados em modelos de zebrafish e camundongo, mas não há nenhum protocolo publicado para ressecção apical em X.tropicalis. A perda da capacidade regenerativa em mamíferos adultos torna a insuficiência cardíaca uma das principais causas de morte em todo o mundo. A ilustração dos mecanismos de regeneração cardíaca por meio dessa técnica terá implicações significativas para as terapias das cardiopatias isquêmicas.
É melhor praticar bem a técnica antes de realizar a cirurgia, pois ela não deve afetar o tempo do processo operatório. E é altamente crucial manter o sapo anestesiado. Para começar, coloque o abdômen anestesiado de Xenopus tropicalis para cima e cubra o abdômen com gaze destilada embebida em água para evitar o ressecamento da pele do animal durante a operação.
Pressione suavemente o tórax com pinça e encontre o centro do tórax paralelo ao membro anterior inferior. Levante a pele com uma tesoura oftálmica e faça suavemente uma pequena incisão de aproximadamente 1 centímetro. Usando tesoura oftálmica, pegue a camada muscular sob a pele e crie uma ferida no músculo central do peito.
Como o coração está localizado na posição superior do local da ferida, pressione suavemente o peito com a pinça oftálmica para espremer o coração para fora da ferida. Delicadamente, prenda o pericárdio com pinça e quebre-o suavemente usando tesoura oftálmica usando o ápice do coração. Aguarde o pericárdio sair devido ao bombeamento de sangue sistólico.
Segure a ponta do coração com pinça na mão não dominante e levante o coração levemente de acordo com o ritmo de contração cardíaca. Quando o coração se contrai para recircular o sangue através dos vasos sanguíneos, rapidamente cortar o ápice do coração, aproximadamente 14% do ventrículo. Coloque o coração de volta no peito usando pinça e uma bola absorvente.
Sutura a pele com fio cirúrgico não absorvente 4-0, garantindo que não haja sutura na camada muscular para evitar mortalidade pós-operatória. No grupo sham, realizar a toracotomia e abrir o pericárdio, como demonstrado anteriormente, porém sutura sem realizar a ressecção do ápice. Coloque o animal no pós-operatório com o abdome voltado para cima em uma placa de Petri contendo uma pequena quantidade de água deionizada.
Aguarde cerca de 10 minutos para que o animal recupere a consciência, observe sua mobilidade e sutura da ferida durante a atividade. Transfira as rãs para um recipiente cheio de água pura para cultivo e substitua-o por água pura diariamente para evitar a infecção da ferida. Após ressecção apical do coração de Xenopus tropicalis, um coágulo sanguíneo se formou e selou a ferida no ventrículo, como observado pela coloração de hematoxilina e eosina, bem como pela coloração tricrômico de Masson.
A análise morfológica do coração aos 0, 7, 14 e 30 dias pós-ressecção revelou que o coágulo sanguíneo causado pela lesão cardíaca desapareceu aos 30 dias. Ao mesmo tempo, no dia 14, uma regeneração significativa do ápice foi observada e, no dia 30, o ápice do coração ressecado havia se regenerado quase completamente. A análise histológica mostrou uma massa de fibrina no local da ressecção no 14º dia, e o coração regenerou-se completamente sem cicatrizes até o 30º dia.
A análise da fibrose miocárdica do coração pela coloração de Masson mostrou que, no 14º dia de ressecção apical, o coágulo desapareceu e foi substituído por fibrina. Do 14º ao 30º dia, o miocárdio substituiu incrementalmente a fibrina e reparou o ápice ventricular lesado. Esta técnica permitirá aos pesquisadores explorar o mecanismo celular da regeneração cardíaca em Xenopus tropicalis e conhecer as células que estão relacionadas com a regeneração cardíaca no coração de rãs usando a análise de traçado de linhagem após a ressecção do ápice.
