심장 손상 모델은 심장 재생의 메커니즘을 설명하는 데 중요한 의미가 있습니다. 이 프로토콜은 성인 심장 재생의 메커니즘을 설명하는 데 사용할 수 있는 성인 X.Tropicalis의 정점 절제 모델을 확립했습니다. 이전 연구에서는 성인 X.Tropicalis에서 정점 절제술 후 심장이 재생될 수 있다고 밝혔습니다.
그리고 정점 절제술 프로토콜은 제브라피쉬와 마우스 모델에서 발표되었지만 X.tropicalis에서는 정점 절제에 대한 발표된 프로토콜이 없습니다. 성인 포유류의 재생 능력을 잃으면 심부전이 전 세계적으로 주요 사망 원인 중 하나가 됩니다. 이 기술을 사용하여 심장 재생의 메커니즘을 설명하는 것은 허혈성 심장 질환 치료에 중요한 영향을 미칠 것입니다.
수술 과정 시간에 영향을 미치지 않아야 하므로 수술을 수행하기 전에 기술을 잘 연습하는 것이 좋습니다. 그리고 개구리를 마취시키는 것이 매우 중요합니다. 시작하려면 마취 된 Xenopus tropicalis 복부를 위로 올려 놓고 수술 중 동물의 피부가 건조하지 않도록 증류수에 적신 거즈로 복부를 덮으십시오.
집게로 가슴을 부드럽게 누르고 가슴의 중심을 아래쪽 앞다리와 평행하게 찾으십시오. 안과 용 가위로 피부를 들어 올리고 약 1cm의 작은 절개를하십시오. 안과 용 가위를 사용하여 피부 아래의 근육층을 집어 들고 중앙 가슴 근육에 상처를 만듭니다.
심장이 상처 부위의 위쪽에 위치하므로 안과용 집게로 가슴을 부드럽게 눌러 상처에서 심장을 짜냅니다. 부드럽게 집게로 심낭을 조이고 심장의 정점을 사용하여 안과 용 가위를 사용하여 부드럽게 부러 뜨립니다. 수축기 혈액 펌핑으로 인해 심낭이 빠질 때까지 기다리십시오.
주로 사용하지 않는 손에 집게로 심장의 끝을 잡고 심장 수축 리듬에 따라 심장을 약간 들어 올립니다. 심장이 수축하여 혈관을 통해 혈액을 재순환시키면 심실의 약 14%인 심장의 정점을 빠르게 차단합니다. 집게와 흡수성 볼을 사용하여 심장을 가슴에 다시 넣습니다.
4-0 비흡수성 수술용 실로 피부를 봉합하여 수술 후 사망을 방지하기 위해 근육층에 봉합되지 않도록 합니다. 가짜 그룹에서는 개흉술을 시행하고 앞에서 설명한 것처럼 심낭을 열지 만 정점 절제술을 수행하지 않고 봉합합니다. 수술 후 복부가 위를 향하도록 하여 소량의 탈이온수가 들어 있는 페트리 접시에 놓습니다.
동물이 의식을 회복 할 때까지 약 10 분 정도 기다렸다가 활동 중 이동성과 상처 봉합을 관찰하십시오. 개구리를 재배를 위해 순수한 물로 채워진 용기에 옮기고 상처 감염을 피하기 위해 매일 순수한 물로 교체하십시오. Xenopus tropicalis 심장의 정점 절제 후, 혈전이 형성되어 심실의 상처를 봉합했으며, 이는 헤마톡실린 및 에오신 염색과 Masson의 삼색 염색을 통해 관찰되었습니다.
절제 후 0, 7, 14 및 30 일에 심장의 형태 학적 분석 결과 심장 손상으로 인한 혈전이 30 일에 사라진 것으로 나타났습니다. 동시에 14일째에는 정점의 상당한 재생이 나타났고, 30일째에는 절제된 심장 정점이 거의 완전히 재생되었습니다. 조직학적 분석 결과 14일째 절제 부위에 피브린 덩어리가 나타났고, 심장은 30일째에 흉터 없이 완전히 재생되었습니다.
Masson의 염색에 의한 심장의 심근 섬유증 분석은 정점 절제술 14 일 이내에 혈전이 사라지고 피브린으로 대체되었음을 보여주었습니다. 14 일에서 30 일 사이에 심근은 점진적으로 피브린을 대체하고 손상된 심실 정점을 복구했습니다. 이 기술을 통해 연구자들은 Xenopus tropicalis에서 심장 재생의 세포 메커니즘을 탐색하고 정점 절제 후 혈통 추적 분석을 사용하여 개구리 심장의 심장 재생과 관련된 세포를 알 수 있습니다.
