نموذج إصابة القلب له تأثير كبير لتوضيح آلية تجديد القلب. أنشأ هذا البروتوكول نموذج استئصال قمي في X.Tropicalis للبالغين ، والذي يمكن استخدامه لتوضيح آلية تجديد قلب البالغين. ذكرت الدراسات السابقة أن القلب يمكن أن يتجدد بعد الاستئصال القمي في البالغين X.Tropicalis.
وقد تم نشر بروتوكولات استئصال القمة في نماذج الزرد والفأر ، ولكن لا يوجد بروتوكول منشور للاستئصال القمي في X.tropicalis. إن فقدان القدرة على التجدد في الثدييات البالغة يجعل قصور القلب أحد الأسباب الرئيسية للوفاة في جميع أنحاء العالم. إن توضيح آليات تجديد القلب باستخدام هذه التقنية سيكون له آثار كبيرة على علاجات أمراض القلب الإقفارية.
من الأفضل ممارسة هذه التقنية جيدا قبل إجراء الجراحة ، حيث لا ينبغي أن تؤثر على وقت عملية التشغيل. ومن الأهمية بمكان الحفاظ على تخدير الضفدع. للبدء ، ضع بطن Xenopus tropicalis المخدر لأعلى ، وقم بتغطية البطن بشاش مقطر منقوع بالماء لتجنب جفاف جلد الحيوان أثناء العملية.
اضغط برفق على الصدر بالملقط وابحث عن مركز الصدر الموازي للطرف الأمامي السفلي. ارفع الجلد بمقص العيون ، وقم بعمل شق صغير برفق يبلغ حوالي 1 سم. باستخدام مقص العيون ، التقط طبقة العضلات تحت الجلد ، وخلق جرح في عضلة الصدر المركزية.
نظرا لأن القلب يقع في الموضع العلوي من موقع الجرح ، اضغط برفق على الصدر باستخدام ملقط العيون للضغط على القلب من الجرح. برفق ، قم بتثبيت التامور بالملقط وكسره برفق باستخدام مقص العيون باستخدام قمة القلب. انتظر حتى ينفجر التامور بسبب ضخ الدم الانقباضي.
امسك طرف القلب بالملقط في اليد غير المهيمنة ، وارفع القلب قليلا وفقا لإيقاع انقباض القلب. عندما ينقبض القلب لإعادة تدوير الدم عبر الأوعية الدموية ، يقطع بسرعة قمة القلب ، حوالي 14٪ من البطين. ضع القلب مرة أخرى في الصدر باستخدام ملقط وكرة ماصة.
خياطة الجلد بخيط جراحي غير ماص 4-0 ، مما يضمن عدم وجود خياطة في طبقة العضلات لمنع الوفيات بعد العملية الجراحية. في المجموعة الوهمية ، قم بإجراء بضع الصدر وافتح التامور ، كما هو موضح سابقا ، ولكن خياطة دون إجراء استئصال القمة. ضع الحيوان بعد العملية الجراحية مع توجيه بطنه لأعلى في طبق بتري يحتوي على كمية صغيرة من الماء منزوع الأيونات.
انتظر حوالي 10 دقائق حتى يستعيد الحيوان وعيه ، ولاحظ حركته وخياطة الجرح أثناء النشاط. نقل الضفادع إلى وعاء مملوء بالماء النقي للزراعة واستبداله بالماء النقي يوميا لتجنب الإصابة بالجرح. بعد الاستئصال القمي لقلب Xenopus tropicalis ، تشكلت جلطة دموية وأغلقت الجرح في البطين ، كما لوحظ من خلال تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين ، وكذلك من خلال تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان.
كشف التحليل المورفولوجي للقلب في 0 و 7 و 14 و 30 يوما من الاستئصال أن الجلطة الدموية الناجمة عن إصابة القلب اختفت في اليوم 30. في الوقت نفسه ، في اليوم 14 ، شوهد تجديد كبير للقمة ، وبحلول اليوم 30 ، كانت قمة القلب المقطوعة قد تجددت بالكامل تقريبا. أظهر التحليل النسيجي وجود كتلة فيبرين في موقع الاستئصال في اليوم 14 ، وتجدد القلب تماما دون ندوب بحلول اليوم 30.
أظهر تحليل تليف عضلة القلب للقلب عن طريق تلطيخ ماسون أنه في غضون اليوم 14 من الاستئصال القمي ، اختفت الجلطة واستبدلت بالفيبرين. من اليوم 14 إلى 30 ، حلت عضلة القلب محل الفيبرين بشكل تدريجي وأصلحت قمة البطين التالفة. ستسمح هذه التقنية للباحثين باستكشاف الآلية الخلوية لتجديد القلب في Xenopus tropicalis ومعرفة الخلايا المرتبطة بتجديد القلب في قلب الضفادع باستخدام تحليل تتبع النسب بعد استئصال القمة.
