Évaluation de l’effet aphidicide des champignons entomopathogènes contre l’insecte parthénogénétique, le puceron de la moutarde, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Résumé

Ce protocole présente un système optimisé d’essais biologiques sur feuilles détachées pour évaluer l’efficacité des champignons entomopathogènes (FPE) contre le puceron de la moutarde (Lipaphis erysimi (Kalt.)), un insecte parthénogénétique. La méthode décrit le processus de collecte de données au cours des expériences sur les boîtes de Pétri, ce qui permet aux chercheurs de mesurer de manière cohérente la virulence de l’EPF contre les pucerons de la moutarde et d’autres insectes parthénogénétiques.

Résumé

Le puceron de la moutarde (L. erysimi) est un ravageur qui infeste diverses cultures crucifères et transmet des virus végétaux. Pour parvenir à une lutte antiparasitaire respectueuse de l’environnement, les champignons entomopathogènes (FPE) sont des agents de lutte microbienne potentiels pour lutter contre ce ravageur. Par conséquent, il est nécessaire de procéder à un dépistage de la virulence des isolats d’EPF dans des conditions de boîte de Pétri avant l’application au champ. Cependant, le puceron de la moutarde est un insecte parthénogénétique, ce qui rend difficile l’enregistrement des données lors des expériences sur les boîtes de Pétri. Un système modifié d’essais biologiques sur feuilles détachées a été mis au point pour résoudre ce problème, en utilisant un micro-pulvérisateur pour inoculer les conidies aux pucerons et prévenir la noyade en facilitant le séchage à l’air après la suspension des spores. Le système a maintenu une humidité relative élevée tout au long de la période d’observation, et le disque foliaire est resté frais pendant plus de dix jours, ce qui a permis la reproduction parthénogénétique des pucerons. Pour éviter l’accumulation de progéniture, un processus d’élimination quotidienne à l’aide d’un pinceau a été mis en place. Ce protocole démontre un système stable d’évaluation de la virulence des isolats d’EPF contre les pucerons de la moutarde ou d’autres pucerons, permettant la sélection d’isolats potentiels pour la lutte contre les pucerons.

Introduction

Le puceron de la moutarde (L. erysimi) est un ravageur notoire qui infeste une variété de cultures crucifères, causant des pertes économiques importantes¹. Bien que plusieurs insecticides systématiques aient été recommandés pour lutter contre les infestations de pucerons, l’utilisation fréquente de ces insecticides soulève des inquiétudes quant à la résistance aux pesticides ^2,3. Par conséquent, en termes de lutte antiparasitaire respectueuse de l’environnement, les champignons entomopathogènes (FPE) pourraient constituer une stratégie de lutte alternative appropriée. L’EPF est....

Protocole

REMARQUE : L’organigramme complet est illustré à la figure 1.

1. Collecte et entretien du puceron de la moutarde

1. Collecte de pucerons de la moutarde
   1. Retournez les feuilles et vérifiez visuellement s’il y a une infestation de pucerons de la moutarde sur les crucifères au champ.
   2. Consigner l’information sur le site d’échantillonnage (c.-à-d. GPS) et la ou les plantes hôtes, et confirmer l’historique des applications d’insecticides auprès des agriculteurs.
   3. À l’aide d’un aspirateur à insectes ou d’un pinceau fin (voir le tableau des ma....

Discussion

Les crucifères, un groupe de légumes, sont fréquemment infestés par de multiples espèces de pucerons, dont le puceron de la moutarde (L. erysimi) et le puceron du chou (Brevicoryne brassicae)²⁶. Les deux espèces ont été signalées à Taïwan²⁷, et il est possible qu’elles coexistent sur le site de collecte. Pour distinguer les espèces de pucerons étroitement apparentées, cette étude a utilisé une technique d’identification moléculaire à .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL Inoculating Loop	NEST Scientific	718201
100 bp DNA Ladder III	Geneaid	DL007
2x SuperRed PCR Master Mix	Biotools	TE-SR01
50 mL centrifuge tube	Bioman Scientific	ET5050-12
6 cm Petri dish	Alpha Plus Scientific	16021
6 mm insect aspirator	MegaView Science	BA6001
70 mm filter paper NO.1	Toyo Roshi Kaisha
70% ethanol
9 cm Petri dish	Alpha Plus Scientific	16001
Agar	Bioman Scientific	AGR001.1	Microbiology grade
Agarose	Bioman Scientific	PB1200
BioGreen Safe DNA Gel Buffer	Bioman Scientific	SDB001T
Chromas	Technelysium
GeneDoc
GenepHlow Gel/PCR Kit	Geneaid	DFH300	https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf
Gene-Spin Genomic DNA Isolation Kit	Protech Technology	PT-GD112-V3	http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf
Hemocytometer	Paul Marienfeld	640030
Komatsuna leaves (Brassica rapa var. perviridis)	Tai Cheng Farm	1-010-300410
Microsprayer
MiniAmp Thermal Cycler	Thermo Fisher Scientific	A37834
Mustard aphid (Lipaphis erysimi)
Painting brush	Tian Cheng brush company	4716608400352
Parafilm M	Bemis	PM-996
Pellet pestle	Bioman Scientific	GT100R
Sabouraud Dextrose Broth	HiMedia	MH033-500G
SPSS Statistics	IBM
TAE buffer 50x	Bioman Scientific	TAE501000
Tween 80	PanReac AppliChem	142050.1661