Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.

Dans cet article

  • Résumé
  • Résumé
  • Introduction
  • Protocole
  • Résultats Représentatifs
  • Discussion
  • Déclarations de divulgation
  • Remerciements
  • matériels
  • Références
  • Réimpressions et Autorisations

Résumé

Ce protocole présente une méthode économique et efficace pour l’évaluation quantitative de la microarchitecture osseuse dans un modèle murin d’ostéoporose en combinant la coloration à l’hématoxyline-éosine (HE) et les techniques de micro-tomodensitométrie (Micro-CT).

Résumé

La microstructure osseuse fait référence à la disposition et à la qualité du tissu osseux au niveau microscopique. Comprendre la microstructure osseuse du squelette est crucial pour mieux comprendre la physiopathologie de l’ostéoporose et améliorer son traitement. Cependant, la manipulation d’échantillons d’os peut être complexe en raison de leurs propriétés dures et denses. Deuxièmement, les logiciels spécialisés rendent le traitement et l’analyse d’images difficiles. Dans ce protocole, nous présentons une solution rentable et facile à utiliser pour l’analyse de la microstructure osseuse trabéculaire. Des étapes et des précautions détaillées sont fournies. La micro-tomodensitométrie est une technique d’imagerie tridimensionnelle (3D) non destructive qui fournit des images à haute résolution de la structure de l’os trabéculaire. Il permet une évaluation objective et quantitative de la qualité osseuse, c’est pourquoi il est largement considéré comme la méthode de référence pour l’évaluation de la qualité osseuse. Cependant, l’histomorphométrie reste indispensable car elle offre des paramètres cruciaux au niveau cellulaire, comblant le fossé entre les évaluations bidimensionnelles (2D) et 3D des échantillons osseux. En ce qui concerne les techniques histologiques, nous avons choisi de décalcifier le tissu osseux puis d’effectuer un enrobage traditionnel à la paraffine. En résumé, la combinaison de ces deux méthodes peut fournir des informations plus complètes et plus précises sur la microstructure osseuse.

Introduction

L’ostéoporose est une maladie osseuse métabolique répandue, en particulier chez les personnes âgées, et est associée à un risque accru de fractures de fragilité. À mesure que l’ostéoporose devient de plus en plus fréquente en Chine1, il y aura une demande croissante pour l’étude des structures osseuses des petits animaux 2,3. Les méthodes précédentes de mesure de la perte osseuse reposent sur les résultats de l’absorptiométrie bidimensionnelle à rayons X à double énergie. Cependant, cela ne tient pas compte des changements dans la microstructure architecturale de l’os trabéculaire, qui ....

Protocole

Le protocole animal a été approuvé par le Comité d’éthique animale de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu (numéro d’enregistrement : 2020-34). Les souris femelles C57BL/6J (âgées de 12 semaines, n = 14) ont été divisées en deux groupes aléatoires, un groupe simulé (groupe Sham, n = 7) et un groupe modèle (groupe OVX, n = 7). Les animaux ont été achetés auprès d’un fournisseur commercial (voir le tableau des matériaux). Toutes les souris ont été gardées dans des cages individuelles à 22-26 °C avec 45%-55% d’humidité, ont été autorisées à s’adapter à leur nouvel environnement pendant 1 semaine et ont eu un accès gratuit à l’eau e....

Résultats Représentatifs

Analyse par micro-tomodensitométrie
Nous avons mesuré les paramètres microarchitecturaux trabéculaires chez les souris des deux groupes et avons rapporté leurs valeurs moyennes et leurs écarts-types dans le tableau 1. La distribution de certains paramètres (c.-à-d. le rapport entre le volume osseux et le volume total des tissus, l’épaisseur trabéculaire, la séparation trabéculaire) au sein de chaque groupe est illustrée à

Discussion

L’ostéoporose peut entraîner des fractures fréquentes, coûteuses, douloureuses, invalides ou même mortelles, et affecter gravement la qualité de vie des patients20. Au fil des ans, le modèle d’ovariectomie a été reconnu comme l’une des méthodes standard pour étudier l’ostéoporose21. Le modèle animal préclinique le plus courant pour l’ostéoporose est le rat ovariectomisé (OVX). Malgré cela, la majorité des recherches sur les mécanismes des troubl.......

Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ces travaux ont été soutenus par l’Administration provinciale de médecine traditionnelle chinoise du Sichuan (2021YJ0175) et le Projet d’innovation en recherche aux cycles supérieurs de l’École de médecine clinique (LCYJSKT2023-11) de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu.

....

matériels

NameCompanyCatalog NumberComments
4% ParaformaldehydeBiosharpBL539A
Adobe PhotoshopAdobe Inc.
Ammonia SolutionChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2021070101
Analyze 12.0AnalyzeDirect, Inc
Anatomical ForcepsJinzhong surgical instrument Co., LtdJ3C030
Anhydrous EthanolChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022070501
Automatic Dyeing MachineThermo scientificVaristain™ Gemini ES
Bone Microarchitecture Analysis Add-onAnalyzeDirect, Inc
C57BL/6J miceSPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.
Carrier SlidesNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd220518001
CoverslipsNantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.220518001
Decalcification SolutionWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdCR2203047
Delicate ScissorsJinzhong surgical instrument Co., LtdZJA010
Embedding box marking machineThermo scientific PrintMate AS
Embedding MachineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5
Fiji: ImageJNational Institutes of Health, USA
Film SealerThermo scientificAutostainer 360
Freezing TableWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5
H&E Staining KitLeageneDH0020
Hydrochloric Acid SolutionSichuan Xilong Science Co., Ltd210608
ImageJ2 PluginBoneJ 7.0.16
Medical GauzeShandong Ang Yang Medical Technology Co.
Mersilk 3-0 Silk Braided Non-Absorbable SuturesEthicon, Inc.SA84G
Needle HolderJinzhong surgical instrument Co., LtdJ32010
Neutral BalsamSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd10004160
OvenShanghai Yiheng Scientific Instruments Co., LtdDHG-9240A
PANNORAMIC Digital Slide Scanners3DHISTECH Ltd. PANNORAMIC DESK/MIDI/250/1000
PBS bufferBiosharpG4202
Povidone-iodine solution 5%Chengdu Yongan Pharmaceutical Co., Ltd
Quantum GX2 microCT Imaging SystemPerkinElmer, Inc.
Rotary MicrotomeThermo scientificHM325
ScalpelQuanzhou Excellence Medical Co., Ltd20170022
Scan & Browse Software3DHISTECH Ltd. CaseViewer2.4
Single-Use Sterile Rubber Surgical GlovesGuangdong Huitong Latex Products Group Co., Ltd22B141EO
Sodium Chloride Solution 0.9%Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd
Sterile Hypodermic Syringes for Single UseShandong Weigao Group Medical Polymer Products  Co., Ltd
Sterile Medical Suture NeedlesShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. PW8068
Tissue ProcessorThermo scientificSTP420 ES
Tissue Spreading and Baking MachineWuhan Junjie Electronics Co., LtdJK-6
TribromoethanolNanjing Aibei Biotechnology Co., LtdM2920
Wax TrimmerWuhan Junjie Electronics Co., LtdJXL-818
XyleneChengdu Kolon Chemical Co., Ltd2022051901

Références

  1. Wang, J., et al. The prevalence of osteoporosis in China, a community based cohort study of osteoporosis. Frontiers in Public Health. 11, 1084005 (2023).
  2. Stein, M., et al.

Réimpressions et Autorisations

Demande d’autorisation pour utiliser le texte ou les figures de cet article JoVE

Demande d’autorisation

Explorer plus d’articles

Microarchitecture osseuse trab culaireMod le de souris d ost oporoseMicrostructure osseuseNiveau microscopiquePhysiopathologie de l ost oporoseAm lioration du traitementManipulation d chantillons osseuxLogiciel sp cialisTraitement et analyse d imagesSolution rentableSolution facile utiliserAnalyse de la structure osseuse trab culaireTechnique d imagerie micro CTImagerie tridimensionnelle non destructiveImages haute r solutionvaluation objective de la qualit osseuseM thode de r f rence pour l valuation de la qualit osseuseHistomorphom trieparam tres au niveau cellulairevaluations bidimensionnelles et tridimensionnelles d chantillons osseuxd calcification du tissu osseuxenrobage traditionnel de paraffine

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Confidentialité

Conditions d'utilisation

Politiques

Contactez-nous

RECOMMANDER À LA BIBLIOTHÈQUE

NEWSLETTERS JoVE

Recherche

Enseignement

Auteurs

Bibliothécaires

À PROPOS DE JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. Tous droits réservés.