Commencez par analyser les cellules HEK293T transfectées à l’aide d’un microscope à fluorescence inversée. Une fois que les cellules sont focalisées à l’aide d’une lumière de fond clair, passez à une longueur d’onde d’excitation mCherry fluorescente de 587 nanomètres et à des longueurs d’onde d’émission de 610 nanomètres. Après avoir éteint la lumière en fond clair, vérifiez la fluorescence des cellules pour confirmer l’expression de ZnT1 mCherry.
Pour préparer la solution de chargement du colorant, prenez quatre microlitres de solution de colorant fluorescent spécifique au zinc. Ajoutez ensuite quatre microlitres d’acide pluronique à 10%. Mélangez la solution en pipetant de haut en bas et transférez-la dans un tube de 1,5 millilitre.
Ajoutez 750 microlitres de solution de lavage dans la solution préparée et faites tourbillonner vigoureusement le tube. Encore une fois, ajoutez 750 microlitres de solution de lavage. Une fois le vortex, ajoutez 750 microlitres de cette solution dans deux puits d’une nouvelle plaque de culture à six puits et recouvrez-la de papier d’aluminium.
À l’aide d’une pince à épiler, transférez une lamelle de couverture de 13 millimètres de la plaque de cellules HEK293T préalablement cultivée dans une plaque à six puits. Après avoir recouvert l’assiette de papier d’aluminium, secouez-la doucement pendant 15 à 20 minutes et remplacez la solution de chargement du colorant par la solution de lavage préparée. Une fois l’assiette recouverte, secouez-la à nouveau pendant 20 minutes.
