Préparation de sphères de cellules cutanées pour la multiculture 3D

Pour commencer la méthode de la goutte suspendue, pipetez 20 microlitres d’une suspension de cellules cutanées pré-préparée sur le couvercle d’une boîte de Pétri. Maintenant, couvrez le couvercle avec la moitié inférieure de la boîte de Pétri et retournez-la doucement pour créer les gouttes suspendues. Ajoutez de l’eau stérile dans la boîte de Pétri pour éviter l’évaporation du milieu adulte à partir des gouttelettes.

Incuber les gouttelettes pendant 48 à 72 heures à 37 degrés Celsius. Ensuite, remplissez les puits d’une nouvelle assiette avec le milieu de croissance complet. À l’aide d’embouts de pipette stériles, transférez les sphères cellulaires dans les puits de la plaque multi-puits.

Incuber les sphères transférées pendant une journée dans la plaque multi-puits à 37 degrés Celsius avant l’expérimentation. Pour la méthode d’adhésion des cellules limites, ajoutez d’abord 100 microlitres de solution de surfactant à 1 % dans du PBS dans chaque puits d’une plaque à fond en U. Ensuite, incubez la plaque avec la solution à 37 degrés Celsius pendant 24 heures.

Maintenant, préparez la suspension cellulaire dans la densité cellulaire souhaitée. Pipetez la solution tensioactive des puits, puis ensemencez 50 microlitres de suspension cellulaire dans chaque puits. Enfin, incubez la plaque à 37 degrés Celsius pendant 24 heures pour atteindre les agrégats cellulaires.

Les sphères composées de 10 000 cellules étaient plus faciles à manipuler, car elles étaient visibles dans les puits. Les plus grandes sphères ont montré une stabilité réduite. Différents types de cellules formaient des sphères de différentes couleurs.

Les sphères parfaitement arrondies avaient tendance à perdre leur forme lors du transfert selon la méthode de la goutte suspendue. Une manipulation précise était nécessaire pour réduire la déformation, ce qui a permis d’obtenir des agrégats cellulaires intacts. L’imprécision et le manque d’expérience ont entraîné des dommages à la sphère.