Pour commencer, transférez 70 millilitres de Dulbecco’s Modified Eagle Medium préchauffé dans une boîte de Pétri dans une enceinte de sécurité biologique stérile et ajoutez de la dexaméthasone à une concentration de 100 nanomolaires. Assemblez les outils chirurgicaux nécessaires à la dissection, qui comprennent des pinces lisses, droites et à pointe fine. Pince droite à pointe fine avec dents dentelées et ciseaux fins droits et tranchants.
Disséquer les explants des membres postérieurs. Repérez l’articulation de la hanche d’une souris euthanasiée positionnée en décubitus dorsal sur le plan de travail de la paillasse tapissé de sous-coussinets absorbants. Utilisez des ciseaux fins pour créer une petite incision sur la peau recouvrant les faces proximale et antérieure de la partie supérieure de la jambe.
Ensuite, utilisez les doigts pour écarter l’incision afin d’élargir et de pincer le haut de la jambe exposé. Tirez délicatement la peau distalement pour détacher le membre postérieur au niveau de la cheville. Insérez doucement une lame de ciseaux sous la peau le long de la face dorsale du pied.
Ensuite, faites une incision qui s’étend vers les orteils et continuez à tirer la peau distalement jusqu’à ce qu’elle soit complètement retirée. Positionnez la souris de manière à avoir une vue dégagée de l’insertion du tendon d’Achille sur la face postérieure du calcanéum près de la cheville. Pour retirer le tendon de la terrasse végétale, insérez un embout de la pince à pointe fine lisse entre les deux tendons.
Passez l’embout médialement sous le tendon plantaire. Ensuite, tirez-le proximal pour déchirer le muscle plantaire. Ensuite, à l’aide d’une pince dentelée à pointe fine, saisissez l’extrémité proximale détachée du tendon plantaire et tirez-la distalement pour l’enlever complètement.
Au niveau de l’articulation de la hanche, utilisez des ciseaux fins pour sectionner avec précision le bassin, isolant ainsi le membre postérieur. Utilisez les ciseaux pour retirer délicatement le bassin restant, révélant la tête fémorale. Dans l’enceinte de sécurité biologique, transférer l’explant du membre postérieur dans la boîte contenant le milieu de culture cellulaire et la dexaméthasone.
Déplacez la boîte dans l’incubateur et soumettez-la à un prétraitement pendant 48 heures.
