Pour commencer, placez tous les instruments chirurgicaux stériles sur la plate-forme de travail. Dans l’enceinte de biosécurité, désinfectez la surface du tube contenant le cordon ombilical humain précédemment prélevé avec de l’éthanol à 75 %. Retirer l’échantillon dans une boîte de Pétri.
Immergez l’échantillon avec les nœuds dans de l’éthanol à 75 % pendant 30 secondes. Ensuite, dans une nouvelle boîte de Pétri, rincez l’échantillon plusieurs fois avec du PBS stérile. À l’aide de ciseaux chirurgicaux et de pinces, coupez les nœuds, puis coupez le cordon entre deux nœuds transversalement en petits morceaux.
Perfuser la veine avec du PBS à l’aide d’une pipette d’un millilitre jusqu’à ce que le liquide sortant de l’autre extrémité du cordon devienne complètement transparent. Transférez l’un des morceaux de cordon ombilical déjà coupés dans une nouvelle boîte de Pétri. Ajoutez la quantité appropriée de PBS pour garder le cordon mouillé tout au long de l’opération.
Saisissez le cordon à l’aide d’une pince et tirez les artères le long de son grand axe à l’aide de pinces anti-moustiques. Pour fixer le cordon horizontalement avec le côté le plus épais vers le haut, insérez une lame de la pince dans la veine ombilicale et serrez-la fermement, en vous assurant que la pince clampe du côté le plus épais. À l’aide d’un scalpel, faites une incision linéaire sur la couche de l’épithélium amniotique d’un bout à l’autre, le long du bord de l’autre lame de la pince.
À partir du coin de l’espace de coupe, soulevez le coin de l’épithélium amniotique avec des pinces à dents et continuez à couper horizontalement un peu plus loin avec des ciseaux cornéens le long de la surface interne de l’épithélium. Séparez la gelée de Wharton et l’épithélium amniotique à l’aide de pinces, et étendez-vous progressivement à tout le cercle d’une extrémité du cordon ombilical. Retirez la couche épithéliale dans le sens de la longueur.
Insérez les deux lames de la pince à l’intérieur de la veine. Clampez une portion de gelée de Wharton, puis retournez-la pour exposer l’épithélium de la veine ombilicale. Décollez facilement l’épithélium de la veine.
Placez la gelée de Wharton recueillie dans une boîte de Pétri de 90 millimètres pré-étiquetée et coupez-la en morceaux d’un à trois millimètres avec des ciseaux et des pinces. Retournez le plat avec le capuchon sur le fond et placez-le dans un incubateur à 5% de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Changez le milieu de culture de cellules souches mésenchymateuses humaines tous les trois jours.
Par rapport à l’approche conventionnelle, la procédure unique de dissection contondante a montré une augmentation significative du rendement en gelée de Wharton. Une analyse plus poussée en comptant la quantité totale de cellules souches mésenchymateuses de Wharton par les deux méthodes a montré un écart prononcé dans la quantité de cellules avec l’augmentation du nombre de passages. Le taux de prolifération des cellules souches mésenchymateuses dans la nouvelle méthode était significativement plus élevé après deux jours.
