이 연구는 중국 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, 82172107), 중국 광둥성 자연과학재단(Natural Science Foundation of Guangdongprovince, China (2021A1515011927, 2021A1515010918, 2020A1515110347), 선전의학연구기금(Shenzhen Medical Research Fund, SMRF. D2301015), 선전시 과학기술혁신위원회(JCYJ20210324135014040, JCYJ20220530172807016, JCYJ20230807150908018, JCYJ20230807150915031), 룽강구 경제기술발전특별기금(LGKCYLWS2022007).

샘플은 중국 광둥성에 있는 Shenzhen Longgang District Maternity and Child Healthcare Hospital의 동의한 건강한 기증자로부터 얻었습니다. 연구를 위한 인체 샘플 사용은 베이징 중의약 대학 선전 병원 윤리 위원회(SZLDH2020LSYM-095) 및 선전 룽강구 산부인과 및 아동 건강 관리 병원 의료 윤리 위원회(LGFYYXLLS-2020-005)의 승인을 받았습니다. 모든 실험은 승인된 지침에 따라 수행되었습니다. 시약 및 사용된 장비에 대한 자세한 내용은 재료 표에 나열되어 있습니다.
1. 인간의 탯줄 채취
<ol><li>무균 상태에서 협력 병원에서 인간 탯줄 샘플을 얻습니다. 참고: 35세 미만의 기증자, 가급적이면 간염, 성병 또는 유전 질환의 병력이 없는 프리미파라를 선택하십시오. B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 거대세포바이러스에 대한 입학 시험 결과는 음성이어야 합니다. 분만 방법으로 제왕절개를 선택하십시오.</li>
	<li>약 10-15cm 길이의 직선적이고 손상되지 않은 UC 조각을 선택하십시오.</li>
	<li>지혈 겸자로 양쪽 끝을 봉합하고 제왕 절개로 만삭 신생아를 출산한 직후 겸자 사이의 안쪽 끝에 수술용 매듭으로 결찰합니다. ( 그림 1, 단계 1과 같이 수집된 UC). 참고: 제왕절개 수술은 채취물이 무균 상태임을 보장합니다. 더 나은 인장 강도를 위해 0 또는 2-0 크기의 봉합사의 수술 매듭을 사용하십시오.</li>
	<li>수술용 가위를 사용하여 집게와 매듭 사이에 묶인 탯줄을 자릅니다(그림 1, 1단계).</li>
	<li>식염수로 헹구어 표면의 오염된 혈전을 제거하고 20mL의 멸균 인산염 완충 식염수(PBS)가 들어 있는 멸균 50mL 플라스틱 튜브로 즉시 옮깁니다. 참고: 이송 중에는 어떠한 항생제도 사용되지 않았습니다.</li>
	<li>튜브를 밀봉합니다. 폴리스티렌 상자에 넣어 얼음 위에 놓고 실험실로 운반하기 전에 4°C에서 보관합니다. 알림: 수집 후 4시간 이내에 코드를 절개하십시오.</li>
</ol>2. 탯줄에서 Wharton's jelly의 격리
<ol><li>아래 단계에 따라 탯줄을 처리하십시오.<ol><li>수술 기구, 무균 포장된 90mm 접시, 1000μL 피펫, 멸균 PBS, 75% 에탄올 용액 및 무이종 인간 MSC 배양 배지가 들어 있는 멸균 트레이를 준비합니다. 알림: 톱니가 있는 집게와 모기 clamps를 사용하면 미끄러운 코드를 효율적으로 처리할 수 있습니다.</li>
		<li>생물 안전 캐비닛 내부에 항목을 배치하기 전에 필요한 항목과 작업 영역을 표면으로 오염 제거합니다. 알림: 작업을 시작하기 전에 몇 분 동안 작업 영역 공기가 제거되도록 하십시오.</li>
		<li>튜브 표면을 소독하고 샘플을 생물 안전 캐비닛의 페트리 접시에 제거합니다. 매듭이 있는 샘플을 75% 에탄올에 30초 동안 담근 다음 새 페트리 접시에서 멸균 PBS로 여러 번 헹굽니다. 알림: 75% 에탄올에 담그기 전에 코드를 결찰해야 하며, 코드를 손상 없이 완전히 소독하려면 담그는 시간을 30초에서 1분으로 제한해야 합니다.</li>
		<li>매듭을 자르고 두 매듭 사이의 코드를 외과 용 가위와 집게로 가로 가로로 약 2cm 길이의 짧은 조각으로 자릅니다. 알림: 매듭이 있는 코드의 끝은 폐기해야 합니다. UC의 길이는 너무 길거나 짧아서는 안 됩니다. 두 조건 모두 작업의 난이도를 높일 수 있습니다.</li>
		<li>탯줄의 다른 쪽 끝에서 나오는 액체가 완전히 투명해질 때까지 1000μL 피펫을 사용하여 PBS로 정맥(더 큰 혈관)을 관류합니다19.</li>
	</ol></li>
	<li>탯줄을 절개합니다.<ol><li>이미 자른 조각 중 하나를 새 페트리 접시에 옮깁니다. 알림: 두 개의 동맥과 하나의 정맥은 단면8 에 눈에 띄게 노출되어야 합니다(그림 2B).</li>
		<li>작업 내내 코드가 젖은 상태로 유지하기 위해 적절한 양의 PBS를 추가하십시오.</li>
		<li>집게로 탯줄을 잡고 모기 클램프를 사용하여 주요 축을 따라 동맥을 빼냅니다. 알림: 동맥벽은 탄성이 높으므로 동맥이 찢어진 경우 탯줄의 다른 쪽 끝에서 잡아당기십시오.</li>
		<li>집게의 한쪽 날을 배꼽 정맥에 삽입한 다음 단단히 조여서 집게가 두꺼운 쪽에 고정되도록 두꺼운 면이 위를 향하도록 코드를 수평으로 고정합니다.</li>
		<li>메스를 사용하여 겸자의 다른 쪽 날 가장자리를 따라 한쪽 끝에서 다른 쪽 끝까지 양수 상피 층을 선형 절개합니다(그림 3). 알림: 가능한 한 적은 WJ를 절단하여 Wharton's 젤리의 무결성을 보존하십시오.</li>
		<li>절단 간격의 한쪽 모서리에서 시작합니다. 톱니형 클램프로 양수 상피의 모서리를 들어 올리고 상피의 내부 표면을 따라 각막 가위로 수평으로 조금 더 자릅니다.<ol><li>Wharton's jelly와 양수 상피를 클램프로 분리하고 UC의 한쪽 끝 전체 원으로 점차 확장합니다. 상피층을 세로로 벗겨냅니다(그림 3). 참고: Wharton's jelly는 조밀한 양수 상피8로 둘러싸인 점액 결합 조직입니다. 전체 작업은 원활해야 하지만 박리 중에 어려움이 있는 경우 모기 클램프를 사용하여 둔한 해부에 사용할 수 있습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>겸자의 양쪽 블레이드를 정맥 내부에 삽입하고 WJ의 일부를 클램프 한 다음 뒤집어 배꼽 정맥의 상피를 노출시킵니다(그림 3).</li>
		<li>내부 장력으로 인해 정맥의 상피와 혈관 주위 WJ 사이에 분리가 생성되므로 정맥의 상피를 쉽게 벗겨냅니다(그림 3).</li>
	</ol></li>
	<li>기존의 비교 방법을 사용하여 UC를 절개합니다20.<ol><li>이미 절단된 다른 s를 선택하십시오.amp이전 코드와 거의 같은 무게의 le를 새 Petri 접시로 옮깁니다.</li>
		<li>탯줄을 따라 세로로 자르고 UC를 펴서 혈관과 WJ를 노출시킵니다.</li>
		<li>탯줄 정맥과 두 개의 동맥을 제거하고 가위와 메스로 내피층에서 WJ를 제거합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. UC-MSC의 격리 및 배양
<ol><li>수집된 WJ를 미리 라벨이 붙은 90mm 페트리 접시에 넣고 가위와 집게로 1-3mm 조각으로 자릅니다.</li>
	<li>바닥에 캡이 있는 접시를 뒤집고 5% CO2 인큐베이터에 37분 동안 30분 동안 넣어 조각과 플라스틱 표면 사이의 부착을 강화합니다.</li>
	<li>접시를 뒤집고 추가 배양을 위해 적절한 양의 인간 MSC 배양 배지를 부드럽게 추가합니다. 알림: 가장 낮은 속도를 사용하여 조각이 여전히 부착되어 있는지 확인하십시오.</li>
	<li>인간 MSC 배양 배지를 3일마다 교체하십시오. 배지의 2/3를 교환하고 처음 7일 동안은 2일마다 섬유질 세포의 증식 모습을 관찰하고, 전체 배지를 교체하고, 그 이후에는 매일 관찰합니다. 알림: 처음 7일 동안은 페트리 접시를 움직이지 마십시오. 섬유아세포 유사 세포의 뚜렷한 성장은 약 4일 만에 관찰되었습니다.</li>
	<li>합류가 80%에 도달할 때까지의 서브컬처. 참고: 이 단계는 7-10일이 걸립니다.<ol><li>PBS, 0.25% 트립신 및 이종이 없는 인간 MSC 배양 배지를 수조에서 37°C로 사전 예열합니다.</li>
		<li>피펫으로 상층액을 흡입한 후 PBS로 헹구고 페트리 접시를 두드려 세포가 제거될 때까지 예열된 0.25% 트립신으로 세포를 분리합니다.</li>
		<li>예열된 MSC 배양액을 4:1의 비율로 혼합하여 트립신을 비활성화하고, 세포 현탁액을 수집한 후 300 x g 에서 4°C에서 5분 동안 원심분리합니다. 참고: 이러한 셀은 통로 0(P0)으로 간주됩니다.</li>
		<li>피펫으로 상층액을 버리고, 인간 MSC 배양 배지에서 세포를 재현탁하고, 증식을 위해 1x104 cells/cm2 의 파종 밀도로 새로운 페트리 접시에 접종합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>혈구계를 사용하여 첫 번째, 두 번째 및 세 번째 통로에서 증폭 후 두 가지 방법의 총 세포 수를 계산합니다. 첫 번째, 세 번째 및 다섯 번째 단락에서 현미경으로 세포 형태를 결정합니다. 참고: 이러한 셀의 형태는 P0 셀과 유사해야 합니다.</li>
	<li>유세포 분석 및 기타 실험을 위해 다섯 번째 통로에 있는 세포를 사용합니다.</li>
</ol>4. 유세포분석에 의한 세포 표면 마커의 발현
<ol><li>0.25% 트립신으로 통로 5(P5) 세포를 분리하고 세포 염색 완충액으로 세포를 세척한 다음 4°C에서 5분 동안 300 x g 으로 원심분리합니다. 세포 염색 완충액으로 펠릿을 각각 100μL까지 재현탁시킵니다.</li>
	<li>각 튜브에 라벨을 붙이고 알로피코시아닌(APC), 플루오레세인 이소티오시안산염(FITC) 또는 피코에리트린(PE)과 접합된 적절한 양의 항체를 추가합니다: CD44-APC, CD73-APC, CD90-FIFC, CD105-FIFC, CD11B-PE, CD19-PE, CD43-PE, HLA-DR-PE는 제조업체의 지침21에 따라 사용됩니다. 실온의 어두운 곳에서 15-20분 동안 배양합니다.</li>
	<li>염색된 세포를 300 x g 에서 4°C에서 5분 동안 원심분리하고 피펫으로 상층액을 흡인하고 세포 염색 완충액으로 한 번 세척합니다.</li>
	<li>300 μL의 세포 염색 완충액으로 세포의 원심분리 및 재현탁을 반복합니다.</li>
	<li>유세포 분석기를 통해 세포를 실행하고 제조업체의 지침에 따라 항체 염색 세포를 분석합니다.</li>
</ol>5. 세포 계수 방법에 의한 세포 성장 곡선 결정
<ol><li>두 가지 방법을 사용하여 P5 세포의 단일 세포 현탁액을 인간 MSC 배양 배지에 희석하여 준비합니다.</li>
	<li>24웰 플레이트에 웰당 8,000개의 세포를 파종하고 각 분석법의 총 21개 웰을 파종합니다. 알림: 파종하기 전에 피펫으로 불어서 흡입하여 세포를 부드럽게 혼합합니다.</li>
	<li>파종 후 24시간 후에 3개의 웰에서 세포를 수확합니다. 혈구계를 사용하여 세포 계수를 수행하여 평균값을 계산합니다. 알림: 셀 카운팅 전에 플레이트를 흔듭니다. 세포 응집체의 형성을 방지하기 위해 진탕 기간을 연장할 수 있습니다.</li>
	<li>총 24일 동안 7시간마다 셀 카운팅을 반복합니다. X축에 시간(d)을 사용하고 Y축에 세포 수(x104/mL)를 사용하여 성장 곡선을 플로팅합니다.</li>
</ol>

인간 탯줄에서 WJ-MSC의 해부 및 격리

<ol>
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저자는 이해 상충이 없다고 보고합니다.

MSC는 재생 의학에 심오한 영향을 미치는 역동적인 연구 분야입니다22. 그들의 독특한 특성은 과학적 탐구의 초점이 되며 광범위한 질병 및 부상 치료에 혁명을 일으킬 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다7. WJ-MSC는 MSC의 별개의 부분집합이며, 이는 혈관간 상피와 양막 상피(23) 사이에 위치한 UC 내의 젤라틴 결합 조직에서 얻을 수 있습니다. MSC의 ...

1991년 Wharton's jelly(WJ)에서 중간엽 줄기세포(MSC)를 처음 분리한 이래로 이러한 다능성 줄기세포는 재생 특성과 다중 계통 분화 능력1으로 인해 연구자들로부터 상당한 주목을 받았습니다. MSC는 골수, 말초 혈액, 치수, 지방 조직, 태아(인간 유산) 및 출산 관련 조직을 포함한 다양한 출처에서 분리할 수 있습니다2. 탯줄(UC)은 비침습적 특성, 풍부한 세포 수율 및 분화 능력으로 인해 유망한 저장소로 부상했으며 높은 증식률, 분화 가능성 및 면역 조절 특성을 나타냅니다3. 태아 MSC는 강력한 줄기 및 면역 특성을 나타내어 지난 20년 동안 수행된 임상 시험 및 기초 연구의 주요 초점이 되었습니다 2,4,5. UC 유래 MSC는 골수 또는 지방 조직과 같은 다른 MSC 공급원에 비해 치료 잠재력이 우수합니다 6,7.
UC는 양수 상피, 3 개의 혈관 (2 개의 동맥과 1 개의 정맥) 및 WJ3로 알려진 젤라틴 물질로 구성됩니다. 흥미롭게도, UC는 내피와 중피로만 구성되는 단순한 혈관 구조를 구성하지만 tunica adventitia는 구성하지 않습니다. WJ에는 림프나 신경이 포함되어 있지 않다8. UC는 분절 분리에 이상적인 고유한 구조를 제공합니다. UC-MSC는 주로 WJ에 있습니다. MSC는 양막, 양막하(양막과 양막은 탯줄 내벽 영역으로도 지정됨) 및 WJ8의 혈관 주위 영역을 포함하여 WJ의 다른 구획에서 분리될 수 있습니다. WJ의 각 영역은 고유한 구조, 면역조직화학적 특성 및 기능 3,6을 가지고 있습니다.
UC의 WJ에서 분리된 MSC는 다른 지역의 MSC에 비해 우수한 임상적 유용성을 가진 것으로 널리 알려져 있다3. WJ-MSC는 다계통 분화 잠재력, 면역 조절 특성, 파라크린 효과, 항염증 효과 및 면역 특권 특성으로 인해 다양한 질병의 치료를 위한 전임상 및 임상 환경에서 광범위하게 연구되었습니다 2,3. WJ-MSC는 이식편대숙주병(GvHD), 이식편거부척척증, 크론병, 자가면역질환 및 심혈관질환 9,10,11,12,13,14를 포함한 다양한 질병 치료에 대한 유망성이 입증되었습니다. WJ-MSC에 대한 임상 수요가 계속 증가함에 따라 탯줄의 공급 부족은 현재 탯줄의 광범위한 응용 분야에 장애물이 되고 있습니다.
WJ-MSC의 수율은 세포 추출에 사용되는 방법에 따라 달라진다15. WJ-MSC는 외식물 배양 또는 효소 분해를 통해 분리할 수 있지만, 후자의 방법은 증식 시간이 길어 세포 손상의 위험을 증가시키고 세포 생존율을 감소시킬 수 있습니다16. 그러나 수많은 연구에 따르면 외식물 배양법은 세포 수율과 생존율을 증가시키고, 외식물 조직에서 방출되는 파라크린 인자도 세포 증식을 촉진하는 데 도움이 되는 것으로 나타났습니다17,18.
이 연구는 고유한 해부 접근 방식을 적용하여 전체 WJ를 얻어 WJ에 대한 손상을 최소화하면서 증식 능력, 생존력 및 양이 향상된 MSC를 수득했습니다. 이 혁신적인 방법은 WJ-MSC를 격리하기 위한 간소화된 전략을 제공하여 MSC 응용 분야의 중요한 요구 사항을 해결합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD44 Antibody&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>338806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well cell culture plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD73 (Ecto-5&#39;-nucleotidase) Antibody&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>344006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC Mouse IgG1, &#954; Isotype Ctrl (FC) Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>400122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td>HIRAYAMA</td>
			<td>HVE-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Cell Counter</td>
			<td>Countstar</td>
			<td>FL-CD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAMBANKER Cryopreservation Solution</td>
			<td>Wako</td>
			<td>302-14681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Staining Buffer</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>420201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal Machine</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean Bench</td>
			<td>Shanghai ZhiCheng</td>
			<td>C1112B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>HERAcell 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>D1040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro- thermostatic Blast Oven</td>
			<td>Shanghai JingHong</td>
			<td>DHG-9423A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD105 Antibody&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>323204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD90 (Thy1) Antibody&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>328108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Mouse IgG1, &#954; Isotype Ctrl (FC) Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>400110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometry</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>CytoFLEX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemocytometer</td>
			<td>Superior Marienfeld</td>
			<td>640410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intracellular Staining Permeabilization Wash Buffer (10&#215;)&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>421002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Biological Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Axio Vert. A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Nitrogen Storage Tank</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>CY50935-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline (NS)</td>
			<td>Meilunbio</td>
			<td>MA0083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD11b Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>393112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD19 Antibody&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>392506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD34 Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>343606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD45 Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>368510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human HLA-DR Antibody&#160;</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>307606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG1, &#954; Isotype Ctrl (FC) Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>400114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG2a, &#954; Isotype Ctrl (FC) Antibody</td>
			<td>Biolegend&#160;</td>
			<td>400214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Electronic Balance</td>
			<td>Satorius</td>
			<td>PRACTUM313-1CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snowflake Ice Machine</td>
			<td>ZIEGRA</td>
			<td>ZBE 30-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>steriled 50 mL plastic tube</td>
			<td>Greniner</td>
			<td>227270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic Water Bath</td>
			<td>Shanghai YiHeng</td>
			<td>HWS12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 1:250</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraGRO-Advanced</td>
			<td>Helios&#160;</td>
			<td>HPCFDCGL50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure and Pure Water Purification System</td>
			<td>Milli-Q</td>
			<td>Milli-Q Reference</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xeno-Free Human MSC Culture Medium</td>
			<td>FUKOKU&#160;</td>
			<td>T2011301</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells with high yields and low damage

중간엽 줄기 세포(MSC)는 놀라운 재생 및 면역 조절 특성을 가진 다능 세포의 집단입니다. 탯줄(UC)에서 추출한 Wharton's jelly(WJ)는 MSC의 뛰어난 공급원으로 생물의학 분야에서 점점 더 많은 관심을 받고 있습니다. 그러나 제한된 공급과 기존 방법의 표준화 부족과 같은 문제가 발생했습니다. 이 기사에서는 탯줄에서 온전한 WJ를 절개하여 MSC 수율을 향상시키는 새로운 방법을 제시합니다. 이 방법은 둔기 절개를 사용하여 상피층을 제거하여 전체 WJ의 무결성을 유지하고 수확된 MSC의 양과 생존력을 증가시킵니다. 이 접근 방식은 기존의 날카로운 해부 방법에 비해 WJ 폐기물을 크게 줄입니다. WJ-MSC의 순도를 보장하고 외부 세포 영향을 최소화하기 위해 UC를 뒤집은 후 내부 장력을 사용하여 내피를 박리하는 절차를 수행했습니다. 또한, 페트리 접시는 부착 및 세포 성장을 개선하기 위해 외식물 배양 중에 짧은 시간 동안 뒤집혔습니다. 비교 분석을 통해 제안된 방법의 우수성을 입증했으며, 기존 방법보다 더 나은 생존력을 가진 WJ 및 WJ-MSC의 더 높은 수율을 보여주었습니다. 두 방법 모두에서 세포 표면 마커의 유사한 형태 및 발현 패턴은 다양한 응용 분야에서 이들의 특성화와 순도를 확인합니다. 이 방법은 WJ-MSC 분리를 위한 고수율 및 고생존력 접근법을 제공하여 MSC의 임상 적용에 대한 큰 잠재력을 보여줍니다.

Since the first isolation of Mesenchymal Stem Cells (MSCs) from Wharton&#39;s jelly (WJ) in 1991, these multipotent stem cells have gained significant attention from researchers due to their regenerative properties and multilineage differentiation capacity1. MSCs can be isolated from various sources, including bone marrow, peripheral blood, dental pulp, adipose tissue, fetal (human abortion), and birth-related tissues2. The umbilical cord (UC) has emerged as a promising reservoir due to its non-invasive nature, abundant cell yield and differentiation capacity, exhibiting a high rate of proliferation, differentiation potential, and immune modulation properties3. Fetal MSCs exhibit strong stemness and immune properties, making them the primary focus of clinical trials and basic research conducted over the past two decades2,4,5. UC-derived MSCs have superior therapeutic potential compared to other sources of MSC, such as bone marrow or adipose tissue6,7.
The UC is composed of amniotic epithelium, three vessels (two arteries and one vein), and the gelatinous substance known as WJ3. Intriguingly, the UC constitutes a simple vasculature, consisting only of the endothelium and mesothelium, but not the tunica adventitia; the WJ does not contain lymph or nerves8. The UC presents a unique structure ideal for segmental separation. UC-MSCs are primarily located in the WJ. MSCs could be isolated from different compartments of the WJ, including amnion, subamnion (the amnion and subamnion also designated as cord lining region), and the perivascular area of the WJ8. Each region of the WJ has its own structure, immunohistochemical characteristics, and function3,6.
MSCs isolated from the WJ of the UC are widely regarded as having superior clinical utility compared to those from other regions3. WJ-MSCs have been extensively studied in preclinical and clinical settings for the treatment of various diseases due to their multi-line differentiation potential, immunomodulatory properties, paracrine effects, anti-inflammatory effects, and immune-privileged properties2,3. WJ-MSCs have been proven to hold promise in treating a range of diseases, including graft-versus-host disease (GvHD), graft rejection, Crohn&#39;s disease, autoimmune diseases, and cardiovascular diseases9,10,11,12,13,14. As clinical demand for WJ-MSCs continues to increase, the shortage supply of umbilical cords is currently an impediment to their widespread applications.
The yield of WJ-MSCs is dependent on the method used for cell extraction15. While WJ-MSCs can be isolated through explant culture or enzyme digestion, the latter method has a longer propagation time that may increase the risk of cell damage and decrease cell viability16. However, numerous studies have shown that the explant culture method increases cell yields and viability, and that paracrine factors released from explant tissues also help promote cell proliferation17,18.
This study applied a unique dissection approach to obtain whole WJ, yielding MSCs with enhanced proliferative capacity, viability, and quantity, while minimizing damage to the WJ. This innovative method offers a streamlined strategy for isolating WJ-MSCs, addressing critical needs in MSC applications.

저자 스포트라이트: Advancements in Stem Cell-derived Vascularized Organoids(줄기세포 유래 혈관 오가노이드의 발전 및 MSC 생산 향상을 위한 Wharton's Jelly의 최적화된 분리)의 발전

Exclusion Derived Mesenchymal Stem Cells with High Yields and Low Damage(높은 수율과 낮은 손상의 탯줄 유래 중간클립 줄기세포의 분리)

Our research used human stem cells to create various organoids. They can mimic human organs. We developed unique techniques for mesoderm and endoderm co-differentiation.They enable these organoids with rich blood networks. These organoids will promote organ development, regeneration medicine, disease model, drug screening, and personalized medicine, such as organoid transplantation. Our protocol addresses a research gap in optimizing the isolation of intact Wharton's jelly from the umbilical cord, while preserving its perivascular and subamniotic components.This method aims to enhance the yield, viability, and proliferative ability of mesenchymal stem cells, offering a cost-effective approach to augment MSC production. The advantage of our protocol lies in its ability to obtain a higher Wharton's jelly's yield and harvest more MSCs with better proliferative ability compared to traditional methods.

UC-MSC를 수집 및 배양하는 절차와 후속 분석은 그림 1에 요약되어 있습니다. UC는 독특한 방법을 사용하여 여러 섹션으로 깔끔하게 해부되었습니다. 주요 절차의 특정 작동 다이어그램은 그림 2에 설명되어 있습니다. 외식물 배양에서 얻은 세포의 성장은 정기적으로 모니터링되고 기록되었습니다. 부착성 방추형 세포는 외식물을 배양한 후 약 4일 후에 ?...

이 연구는 Wharton's jelly(WJ)의 무결성을 보존하기 위한 고유한 둔부 해부 절차를 제시하여 WJ가 덜 손상되고 수확된 중간엽 줄기 세포(MSC)의 양과 생존력을 높입니다. 이 방법은 기존의 날카로운 해부 방법에 비해 우수한 수율과 증식 능력을 보여줍니다.

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells with remarkable regenerative and immunomodulatory properties. Wharton's jelly (WJ) ...

isolation-umbilical-cord-derived-mesenchymal-stem-cells-with-high

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells with High Yields and Low Damage

827 조회수.  Beijing University of Chinese Medicine. 본 연구는 인간 줄기세포를 이용하여 다양한 오가노이드를 생성하였습니다. 그들은 인간의 장기를 모방 할 수 있습니다. 우리는 중배엽과 내배엽 공분화를 위한 독특한 기술을 개발했습니다.이를 통해 이러한 오가노이드는 풍부한 혈액 네트워크를 가질 수 있습니다. 이러한 오가노이드는 장기 개발, 재생 의학, 질병 모델, 약물 스크리닝 및 오?...