Ce projet a été financé par le NIH / NCI numéro de subvention R00 CA127357 et l&#39;Université du Kansas cancer dotation Center.

<ol>
	<li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li><li>Cunha, G., Hom, Y. K., Young, P., Brody, J., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Ethier, S. P., Ammerman, C. A., Dziubinski, M. L., Asch, B. B., Ip, M. 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Les expérimentations animales: Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le comité IACUC à l&#39;Université du Kansas Medical Center.

La contribution fonctionnelle des fibroblastes dans la progression tumorale a été démontrée par des modèles de transplantation, dans lequel le carcinome fibroblastes associés co-transplantés avec bénignes mammaires des résultats des cellules épithéliales dans la croissance tumorale et l&#39;invasivité accrue 5. Approches de transplantation conventionnelle ont impliqué l&#39;utilisation de souris SCID ou nude à la co-transplantation de cellules stromales et épithéliales de différentes origines...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> Souris C57BL/6N </td><td> Harlan </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> MMTV-PyVmT souris transgéniques </td><td> Laboratoires Jackson </td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Fisher </td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine </td><td> Fisher </td><td> MT-30-001 </td><td></td></tr><tr><td> amphotéricine </td><td> Fisher </td><td> BP2645-20 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon de filtration colonnes Ultracel 50k </td><td> Millipore </td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes pour Beckman TI du rotor </td><td> Beckman </td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td> Collagène de queue de rat </td><td> Fisher </td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> EBSS 10x </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7510-100ML </td><td></td></tr><tr><td> Trypsine 1X, 0,25% dans HBSS w / o de calcium et de magnésium </td><td> Fisher </td><td> MT-25-050-CI </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;acide acétique glacial </td><td> Fisher </td><td> A491-212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie bleue </td><td> Fisher </td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td> Trypsine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T3924-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Une collagénase </td><td> Sigma AldrichC0130-50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td> Standard de protéines Kaléidoscope </td><td> Biorad </td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td> Lames de verre </td><td> Fisher </td><td> 12545-78 </td><td></td></tr><tr><td> Verre lamelles </td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentine anticorps S-20 </td><td> Santa Cruz Biotechnology </td><td> SC-7558 </td><td></td></tr><tr><td> α-actine musculaire lisse d&#39;anticorps </td><td> Abcam </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14 d&#39;anticorps </td><td> Santa Cruz Biotechnology </td><td> sc-53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18 d&#39;anticorps </td><td> Abcam </td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-souris biotinylé </td><td> Laboratoires Vecteur </td><td> BA9200 </td><td> Distribués au travers de Fisher </td></tr><tr><td> Anti-souris-alexa-568 </td><td> Invitrogen </td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-souris-alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidine alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td> Prolongez Antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P-36930 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux chirurgicaux </td><td> Outils Fine Science </td><td> 91400-12 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux beau printemps </td><td> Outils Fine Science </td><td> 15000-02 </td><td></td></tr><tr><td> Blunt pince </td><td> Outils Fine Science </td><td> 11002-12 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 pinces fines </td><td> Outils Fine Science </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> De suture chromique Gut </td><td> Fisher </td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td> Pasteur en verre pipette </td><td> Fisher </td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td> Éthanol </td><td> Fisher </td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> bétadine </td><td> Fisher </td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td> Clips des plaies </td><td> Fisher </td><td> 12032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Base des plaies </td><td> Fisher </td><td> 12031-07 </td><td></td></tr></tbody></table>

mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice

L&#39;influence de cellules stromales, y compris les fibroblastes sur la progression de la tumeur mammaire a été bien documenté par l&#39;utilisation de modèles de souris, en particulier grâce à la transplantation de cellules stromales et les cellules épithéliales de la glande mammaire de souris. Modèles de transplantation actuels impliquent souvent l&#39;utilisation de la souris immunodéprimées en raison de la génétique de différentes origines cellules stromales et les cellules épithéliales. Matrices extracellulaires sont souvent utilisés pour intégrer les deux types cellulaires différents pour cohérentes interactions cellule-cellule, mais impliquent l&#39;utilisation de Matrigel ou de collagène de queue de rat, qui sont des substrats immunogène. Le manque de cellules T fonctionnelles des souris immunodéprimées empêche une évaluation précise des cellules stromales sur la progression de la tumeur mammaire in vivo, avec des implications importantes sur le développement de médicaments et d&#39;efficacité. Par ailleurs, les souris immunodéprimées sont coûteux, difficiles à reproduire et exigent des conditions de soins spéciaux. Pour surmonter ces obstacles, nous avons développé une approche de la transplantation orthotopique de cellules stromales et les cellules épithéliales des souris de la même bagage génétique pour induire la formation de tumeurs cohérente. Ce système implique la récolte normale, le carcinome fibroblastes associés, PyVmT cellules de carcinome mammaire et du collagène de souris C57BL/6J donateurs. Les cellules sont ensuite intégrés dans le collagène et transplantées dans les glandes mammaires inguinales des souris C57BL/6J femelles. La transplantation de cellules PyVmT seuls forment des tumeurs palpables greffe 30-40 jours après. Analyse Endpoint moins 60 jours indique que la co-transplantation avec des fibroblastes améliore la croissance des tumeurs mammaires par rapport aux cellules transplantées PyVmT seul. Alors que les cellules et la matrice de souris C57BL/6J ont été utilisées dans ces études, l&#39;isolement de cellules et la matrice et l&#39;approche de transplantation peuvent être appliquées sur des souris de différentes origines génétiques démontrant la polyvalence. En résumé, ce système peut être utilisé pour étudier les interactions moléculaires entre les cellules stromales et les cellules épithéliales, et surmonte les limitations critiques dans les modèles murins immunodéprimés.

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Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

Dans ce rapport, nous démontrons un système pour isoler les cellules du donneur et de la culture de la glande mammaire de la souris, et la transplantation orthotopique ces cellules dans des souris bénéficiaires d&#39;analyser stromales: interactions épithéliales pendant le développement de tumeurs mammaires.

Transplantation mammaires de cellules stromales et les cellules de carcinome chez les souris C57BL/6J

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

mammary-transplantation-stromal-cells-carcinoma-cells-c57bl6j

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Medicine

17.5K vues.  University of Kansas Medical Center. Dans ce rapport, nous démontrons un système pour isoler les cellules du donneur et de la culture de la glande mammaire de la souris, et la transplantation orthotopique ces cellules dans des souris bénéficiaires d'analyser stromales: interactions épithéliales pendant le développement de tumeurs mammaires.