Les auteurs souhaitent remercier Jeanette Hayes-Klug et Kelly Anderson pour la gestion de la colonie de muntjac, le Dr Alan Young pour nous avoir présenté le muntjac et M. Cleve Tedford de Cervid Solutions Inc. pour avoir fourni la graine de muntjac pour ce projet. Ce travail a été soutenu par la subvention R01AI093634 des NIH.

1. Préparation procédurale
Toutes les procédures animales décrites ont été examinées et approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université d’État du Colorado, une association pour l’évaluation et l’accréditation des soins aux animaux de laboratoire (AAALAC), institution accréditée intl.
<ol><li>Avant l’examen, immobiliser les animaux à l’aide de protocoles appropriés de sédation ou d’anesthésie pour assurer la relaxation et permettre un positionnement approprié. Un maître-chien retient le cerf tandis qu’une deuxième personne administre la sédation à l’animal. Remarque : Les auteurs ont trouvé la combinaison suivante pour fournir la sédation efficace dans cette espèce : butorphanol (0.45 mg/kg), azaperone (0.035 mg/kg), et médetomidine (0.04 mg/kg), administrés par voie intramusculaire dans les muscles fessiers.</li>
	<li>Une fois que la blouse a atteint un plan de sédation qui permet une manipulation conforme, placez-la en occupation dorsale ou latérale sur une table d’examen ou dans une auge en V. Élever légèrement la tête, le cou et le thorax (environ 20-30°) pour réduire le risque de régurgitation et d’aspiration du contenu rumenal et pour faciliter une ventilation appropriée pendant la procédure. Remarque : Chez la plupart des cervidés ou d’autres espèces de ruminants, l’échographie abdominale est effectuée chez les animaux debout; cependant, la petite taille et les considérations comportementales de cette espèce exigent la sédation lourde pour l’examen et le positionnement sternal est donc plus difficile et peut exclure la technique efficace de formation image. Le positionnement de l’animal à mi-chemin entre la réamence sternale et latérale peut être idéal pour réduire le risque de régurgitation et d’hypoventilation et devrait être envisagé si possible. Dans toute position couchée, il est essentiel de surveiller attentivement les respirations des animaux et d’arrêter immédiatement l’examen et de placer l’animal en récumbency sternale si une régurgitation ou une hypoventilation est notée.</li>
	<li>Si nécessaire, coupez les poils de la région de l’abdomen à examiner afin d’obtenir un contact adéquat entre l’empreinte du transducteur et la peau. Remarque : Au début de la gestation, des signes de grossesse peuvent être détectés dans l’abdomen caudal près des glandes mammaires. Cette région du muntjac est typiquement sans poils, et donc le rasage peut ne pas être indiqué pour le moment. Au fur et à mesure que le fœtus grandit et que l’utérus se distend pour occuper une position plus crânienne dans l’abdomen, une coupure des cheveux sera nécessaire avant l’imagerie. Il faut prendre soin d’éviter de causer des traumatismes mécaniques à la peau, y compris des lacérations causées par des lames de rasoir ou des blessures thermiques causées par des tondeuses électriques.</li>
	<li>Placez l’unité d’échographie dans un endroit qui permet au technicien de visualiser facilement le moniteur tout en effectuant l’examen avec sa main dominante. Entrez les informations d’identification des animaux (nom, numéro d’identification, etc.)dans le système pour étiqueter automatiquement les images et les boucles vidéo enregistrées.</li>
</ol>2. Examen échographique de reproduction transabdominal
<ol><li>Appliquez une quantité généreuse de gel de couplage acoustique sur l’abdomen caudal.</li>
	<li>Placez un transducteur linéaire incurvé de 5 à 10 MHz sur la peau de l’abdomen caudal, immédiatement crânien au pubis, et déplacez-le lentement dans une direction crânienne pour évaluer les structures dans la cavité pelvienne. Balayez les quarts de cercle gauche et droit de l’abdomen caudal pour évaluer les deux cornes du muntjac' utérus bicorne de s. Remarque : L’échographie abdominale complète implique l’évaluation de tous les viscères abdominaux, y compris le foie, les reins, la rate, le tractus gastro-intestinal, la vessie et l’appareil reproducteur. Aux fins de ce protocole, seul l’examen de la grossesse sera discuté en détail; cependant, l’aspect normal d’autres organes abdominaux caudaux devrait être identifié car ces structures sont susceptibles d’être produites pendant l’étude. Les organes le plus généralement vus dans cet endroit incluent des segments de l’appareil gastro-intestinal, du réservoir souple urinaire, et de l’appareil reproducteur. Le gros intestin et l’intestin grêle sont identifiés par l’aspect caractéristiquement stratifiée de la paroi intestinale. La lumière peut ou non être prononcée selon le type et la quantité de contenu, qui peut inclure des particules de liquide, de gaz, de mucus ou de nourriture. Le réservoir souple urinaire peut être difficile à identifier à moins que distendu avec l’urine, et les couches du mur de réservoir souple sont sensiblement moins distinctes que ceux des intestins. Outre l’utérus, les ovaires peuvent également être trouvés lors de l’échographie de l’appareil reproducteur du muntjac femelle. Les ovaires apparaîtront comme des structures ovoïdes près du pôle caudal des reins, et leur apparence peut changer au cours du cycle œstrus. La présence de multiples follicules mûrs et remplis de fluide dans le cortex est suggestive de l’oestrus. Remarque : En faisant tourner et/ou en « ventilant » la tête de balayage du transducteur, les structures peuvent être évaluées dans des plans transversaux ou sagittals.<ol>
<li>Si nécessaire pour différencier un utérus gravide de la vessie, videz la vessie manuellement en appliquant une pression douce sur l’abdomen caudal ou en plaçant un cathéter urinaire et en répétant la scintigraphie. Remarque : L’expression manuelle de la vessie ne doit être tentée que lorsque l’animal est en position sternale ou verticale, ce qui facilite une orientation plus naturelle des viscères abdominaux et réduit le risque de traumatisme pour d’autres structures. L’utérus peut également être différencié de la vessie en évaluant l’épaisseur de la paroi de l’organe. L’épaisseur typique d’une vessie modérément distendue est d’environ 1,4 mm24, tandis que les auteurs ont constaté que la paroi plus musculaire de l’utérus gravid dans le muntjac mesure généralement entre 7-8 mm. Remarque : Il est difficile diagnostiquer la grossesse tôt définitivement dû à un manque de structures foetales identifiables, et en fait la première indication de la grossesse peut simplement être une petite poche liquide dans l’abdomen caudal. S’il est vu à ce moment-là, l’embryon en développement apparaîtra comme une structure hyperéchoïque, ovoïde à amorphe dans l’utérus (Figure 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Apportez des ajustements à la profondeur, à la fréquence et au gain si nécessaire pour améliorer le contraste et les détails de l’image. Remarque: des fréquences plus élevées sont associées à des longueurs d’onde plus courtes, qui sont nécessaires pour améliorer la résolution de l’image. La plupart des transducteurs sont capables de fonctionner dans une gamme de fréquences (par exemple, 6-10 MHz)24. La fréquence peut être ajustée à l’aide des commandes du scanner sur l’unité à ultrasons, et l’augmentation de la fréquence se traduira par une image plus claire. L’augmentation simultanée de la fréquence diminue la profondeur de pénétration des ondes sonores; par conséquent, la réduction de la fréquence peut être nécessaire pour visualiser des structures plus profondes, mais la résolution peut devenir compromise24. Pour cette raison, il est important de sélectionner la fréquence la plus élevée possible pour atteindre la profondeur de tissu souhaitée. Les réglages des contrôles de gain vont altérer l’amplification des ondes sonores revenant au transducteur à partir des tissus et affecter le degré de contraste dans l’image24. Le gain doit être réglé à un point où le contraste optimal entre les tissus hyperéchoïques et hypoéchoïques est atteint, et ces paramètres peuvent devoir être ajustés en fonction des structures qui sont enticacées.</li>
</ol>3. Obtention de mesures fœtales
Note: L’âge gestationnel chez de nombreuses espèces animales domestiques peut être estimé à l’aide de plages de référence établies pour les mesures fœtales obtenues à partir d’un examen échographique. Les mesures les plus couramment utilisées comprennent la longueur droite de la couronne et de la croupe (SCRL), la profondeur de la poitrine (CD) et la longueur de la tête (HL)17. Bien que suffisamment de données n’aient pas encore été recueillies pour élaborer des lignes directrices fiables sur l’âge gestationnel chez le cerf muntjac de Reeves, des mesures peuvent être recueillies afin de commencer à établir ces références. Il a été démontré chez d’autres espèces de cervidés et de ruminants que la fréquence cardiaque fœtale (FHR) augmente linéairement à mesure que la gestation progresse jusqu’à un certain point (généralement vers le 60e jour de la gestation), moment auquel la fréquence cardiaque commence à diminuerde 17. FHR peut être utilisé pour estimer l’âge gestationnel en conjonction avec d’autres observations échographiques, mais il est plus couramment utilisé comme mesure de la viabilité fœtale17,24. Le FHR a été calculé dans le muntjac de Reeves dès 35 jours après l’accouplement observé.
<ol><li>Pour mesurer scrl, localisez l’utérus sur le moniteur et effectuez de fins ajustements à la position du transducteur jusqu’à ce qu’une vue sagittale de l’ensemble du fœtus soit obtenue(figures 2 et 3). Figez l’image et mesurez la distance entre l’aspect le plus dorsal du crâne et la base du sacrum(figures 2 et 3).</li>
	<li>Pour mesurer la CD, obtenir une vue sagittale du fœtus (la même image peut être utilisée pour mesurer la SCRL) et mesurer la distance entre les aspects dorsaux et ventraux du thorax(figures 2 et 3).</li>
	<li>Pour mesurer le LH, en utilisant la même vue sagittale du fœtus que celle décrite pour les mesures scrl et CD, mesurer la distance entre la crête occipitale et la base du nez(figures 2 et 3).</li>
	<li>Pour calculer la fréquence cardiaque fœtale, identifiez le cœur dans la cavité thoracique du fœtus en visualisant ses contractions rythmiques. Calculez la fréquence cardiaque en comptant le nombre de contractions (battements cardiaques) qui se produisent dans un laps de temps de 1 min. Remarque : Si l’unité d’ultrason étant utilisée a des capacités de Doppler, cette caractéristique peut être employée pour aider davantage à distinguer le coeur d’autres mouvements foetaux non spécifiques.</li>
	<li>Vérifiez que toutes les images et boucles vidéo enregistrées incluent toutes les informations d’identification nécessaires, y compris le nom ou le numéro de l’animal, la date, les mesures et les étiquettes de structure appropriées.</li>
</ol>4. Conclusions procédurales et rétablissement
<ol><li>Retirez tout le gel de contact échographique résiduel de l’abdomen de l’animal à l’aide d’un chiffon doux ou d’essuie-tout. Nettoyez le gel du transducteur avant l’entreposage.</li>
	<li>Si vous utilisez le protocole de sédation décrit à l’étape 1.1, administrer de l’atipamezole par voie sous-cutanée à une dose de 0,25 mg/kg pour inverser les effets de la médétomidine. Si vous utilisez un protocole de sédation différent dans lequel un antagoniste est disponible, administrer cet agent à l’animal selon les doses publiées à la fin de la procédure pour accélérer la récupération.</li>
	<li>Placez le muntjac sur une surface molle en recumbency sternal, avec la tête légèrement surélevée pour réduire le risque de régurgitation et d’aspiration du contenu rumenal. Surveillez l’animal de près jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli et capable de se déplacer autour de l’enclos sans aide.</li>
</ol>

<ol>
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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ce protocole décrit l’application de l’échographie de transabdominal pour le diagnostic de grossesse dans Reeves' cerf de muntjac. Compatible avec d’autres études d’ultrason, l’équipement approprié et la compétence technique sont impératifs à un examen reproducteur réussi de la bche de muntjac. L’examen soigneux de l’anatomie de mammifère de base, des principes physiques de l’ultrason diagnostique, et de l’aspect ultrasonographic typique des viscères abdominaux aidera à la réduction des dia...

L’examen ultrasonographique est une méthode bien décrite de diagnostic de grossesse chez les bovins1,les moutons2,3,les chèvres4,les chevaux5,les animaux de compagnie6,7et d’autres espèces animales domestiques. Cette modalité d’imagerie a également été identifiée comme un outil précieux pour la détection de la grossesse et l’estimation de l’âge fœtal chez plusieurs espèces de cervidés captifs, y compris lesdaims 8-11,les cerfs rouges12-16,les cerfs sika d’Hokkaido17et les rennes18,19. Dans de nombreux cas, l’échographie a produit des taux de précision plus élevés que d’autres mécanismes de détection de grossesse, tels que la progestérone sérique ou l’analyse des glycoprotéines associées à la grossesse9,18. En outre, la visualisation ultrasonographic de l’appareil reproducteur peut fournir des informations additionnelles concernant la viabilité foetale, l’âge gestational, et l’identification des anomalies développementales qui seraient autrement difficiles à évaluer. L’utilité de l’échographie pour évaluer l’état reproducteur suggère que cette méthodologie devrait être adaptée à d’autres espèces chez lesquelles des programmes de reproduction actifs sont utilisés.
Le cerf muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) est une petite espèce de cervidés originaire d’Asie du Sud-Est20. Bien que le cycle de reproduction de ces animaux ne soit pas bien caractérisé dans leurs territoires d’origine, les études des populations sauvages dans certaines parties du sud de l’Angleterre ont amélioré la compréhension de leurs schémas de reproduction20. Contrairement à la plupart des cervidés, le muntjac de Reeves semble se reproduire toute l’année, sans pics de fauve saisonniers apparents20-22. Le muntjac femelle donne généralement naissance à un seul faon après une période de gestation de 210 jours, et entre de manière fiable dans un oestrus post-partum dans les 24 heures20-22. Est-ce que ne pas concevoir au cours de cette période post-partum reviendra à l’oestrus environ 24-25 jours plus tard20. Dans les situations captives, la reproduction est généralement obtenue par le logement avec un ou plusieurs mâles intacts. Ce système produit des taux de conception satisfaisants et nécessite peu de compétences techniques pour le personnel, mais les dates de reproduction exactes sont difficiles, voire impossibles, à déterminer.
Les muntjac sont couramment utilisés dans les études cytogénétiques en raison de la large gamme de nombres de chromosomes diploïdes et du taux élevé de diversification caryotypique parmi les différentes espèces23. Ces animaux font également l’objet d’une étude en tant que modèle de pathogenèse et de transmission des maladies à prions, avec un intérêt particulier accordé à l’étude de la transmission verticale de la maladie déchéante chronique (MDC) chez les cervidés. L’importance du muntjac dans un certain nombre d’applications de recherche différentes suggère que des technologies de reproduction améliorées devraient être établies pour compléter les procédures d’enquête actuelles. Plus précisément, les mécanismes non invasifs pour évaluer la période gestationnelle pourraient potentiellement élucider des variations critiques dans la performance reproductive et la croissance et le développement foetaux dans différentes conditions expérimentales. De plus, l’élaboration de références de mesure fœtale en temps réel pourrait être utile pour estimer l’âge gestationnel dans les situations où les dates de reproduction ne peuvent pas être déterminées. Des études antérieures ont décrit des mécanismes d’utilisation des mesures fœtales, telles que la longueur de la croupe couronne (LCR), la profondeur thoracique (CD) et la longueur de la tête (LH) pour estimer le stade approximatif de gestation chez les espèces de cervidés11-14, 16,17. De plus, certaines de ces études ont également établi des lignes directrices décrivant quand des jalons spécifiques du développement, tels que la minéralisation squelettique ou le rythme cardiaque fœtal, peuvent être identifiés8-19. Bien que ces données puissent être utiles pour aider à guider l’analyse échographique reproductive dans le muntjac, la plupart des autres espèces de cervidés étudiées ont une taille corporelle beaucoup plus grande et des périodes gestationnelles plus longues, réduisant ainsi la valeur translationnelle de ces études pour les applications de muntjac.
Le protocole décrit ici décrit l’échographie de transabdominal du muntjac femelle aux fins de diagnostiquer et de surveiller la grossesse. L’exécution réussie de ce protocole peut faciliter la détection et l’évaluation tôt de grossesse de la croissance et du développement foetaux. Cette technique a des applications précieuses dans la conduite d’études sur la reproduction, le développement in utero, ou la transmission verticale des maladies infectieuses dans un modèle de petit cervidés et peut également être utile à des fins cliniques dans des opérations d’élevage en captivité.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="547">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa</td>
			<td style="width:64px;">NADA 135-780</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Azaperone tartrate (0.035 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">ZooPharm</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Medetomidine HCl (0.04 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">ZooPharm</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Ultrasound contact gel</td>
			<td style="width:127px;">Medline, Mundelein, Illinois</td>
			<td style="width:64px;">MDS092005</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg)</td>
			<td style="width:127px;">Orion Corporation, Espoo, Finland</td>
			<td style="width:64px;">NADA 141-033</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table 2 Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:187px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:127px;">Company</td>
			<td style="width:64px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="201">
			<td height="201" style="height:201px;width:187px;">V-trough (optional)</td>
			<td style="width:127px;">N/A</td>
			<td style="width:64px;">N/A</td>
			<td style="width:171px;">Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">Electrical clippers or razor blades for hair removal</td>
			<td style="width:127px;">Oster, McMinnville, Tennessee</td>
			<td style="width:64px;">78005-140</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound</td>
			<td style="width:127px;">E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td>
			<td style="width:64px;">Ibex Pro</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:187px;">5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array</td>
			<td style="width:127px;">E.I. Medical Imaging, Loveland, CO</td>
			<td align="right" style="width:64px;">290420</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:187px;">3 ml syringes</td>
			<td style="width:127px;">Covidien</td>
			<td align="right" style="width:64px;">1.18E+09</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:187px;">22 G needles</td>
			<td style="width:127px;">Covidien</td>
			<td align="right" style="width:64px;">8.88E+09</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transabdominal ultrasound for pregnancy diagnosis in reeves' muntjac deer

Le cerf muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) est une petite espèce de cervidés originaire d’Asie du Sud-Est, et sont actuellement à l’étude comme un modèle potentiel de transmission de maladies à prions et de pathogenèse. La transmission verticale est un domaine d’intérêt pour les chercheurs qui étudient les maladies infectieuses, y compris les maladies à prions, et ces recherches nécessitent des méthodes efficaces pour évaluer les effets de l’infection maternelle sur la performance reproductive. L’examen ultrasonographique est un outil bien établi pour diagnostiquer la grossesse et évaluer la santé fœtale chez de nombreuses espèces animales1-7,y compris plusieurs espèces de cervidés d’élevage8-19,mais cette technique n’a pas été décrite chez le cerf muntjac de Reeves. Ici nous décrivons l’application de l’ultrason de transabdominal pour détecter la grossesse dans le muntjac fait et pour évaluer la croissance et le développement foetaux tout au long de la période gestational. À l’aide de cette procédure, les femelles gravides ont été identifiées dès 35 jours après l’appariement bêler bêler-bouc, ce qui était un moyen efficace de surveiller la grossesse en toute sécurité à intervalles réguliers. Les objectifs futurs de ce travail comprendront l’établissement de références normales de mesure fœtale pour l’estimation de l’âge gestationnel, la détermination de la sensibilité et de la spécificité de la technique de diagnostic de la grossesse à divers stades de la gestation, et l’identification des variations dans la croissance et le développement du fœtus dans différentes conditions expérimentales.

Utilisant le protocole décrit ici, la grossesse peut être diagnostiquée et surveillée chez reeve' cerf muntjac de s avec des techniques d’une façon minimum invahissantes. Le point de temps le plus tôt que la grossesse a pu être détectée par les auteurs était approximativement 35 jours suivant le comportement d’accouplement observé.
Aux parties de la gestation, la grossesse a été diagnostiquée en visualisant un utérus liquide-rempli identifié comme espace anechoic dans l’a...

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Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

L’échographie transabdominale est décrite comme un moyen efficace et non invasif d’évaluer le statut reproducteur chez reeves' cerf muntjac. Ces méthodes peuvent être employées pour réaliser le diagnostic tôt de grossesse et pour évaluer la viabilité foetale. Les applications futures de cette technique incluent l’estimation de l’âge gestational et des effets de la maladie maternelle sur le développement foetal.

Échographie transabdominale pour le diagnostic de grossesse chez le cerf muntjac de Reeves

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

transabdominal-ultrasound-for-pregnancy-diagnosis-reeves-muntjac

Research

JoVE Journal

Medicine

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

10.2K vues.  Colorado State University. L’échographie transabdominale est décrite comme un moyen efficace et non invasif d’évaluer le statut reproducteur chez reeves' cerf muntjac. Ces méthodes peuvent être employées pour réaliser le diagnostic tôt de grossesse et pour évaluer la viabilité foetale. Les applications futures de cette technique incluent l’estimation de l’âge gestational et des effets de la maladie maternelle sur le développement foetal.

Vidéo: Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a cohort generated by assisted reproduction technology (ART). This selection may be required because of familial monogenic disease (e.g. cystic fibrosis), or because one partner carries a chromosome rearrangement (e.g. a two-way reciprocal translocation). PGD is available for couples who have had previous affected children, and/or in the case of chromosome rearrangements, recurrent miscarriages, or infertility. Oocytes aspirated following ovarian stimulation are fertilized by in vitro immersion in semen (IVF) or by intracytoplasmic injection of an individual spermatozoon (ICSI). Pre-implantation cleavage-stage embryos are biopsied, usually by the removal of a single cell on day 3 post-fertilization, and the biopsied cell is tested to establish the genetic status of the embryo. Fluorescence in situ hybridization (FISH) on the fixed nuclei of biopsied cells with target-specific DNA probes is the technique of choice to detect chromosome imbalance associated with chromosome rearrangements, and to select female embryos in families with X-linked disease for which there is no mutation-specific test. FISH has also been used to screen embryos for spontaneous chromosome aneuploidy (also known as PGS or PGD-AS) in order to try and improve the efficiency of assisted reproduction; however, the predictive value of this test using the spreading and FISH technique described here is likely to be unacceptably low in most people's hands and it is not recommended for routine clinical use. We describe the selection of suitable probes for single-cell FISH, spreading techniques for blastomere nuclei, and in situ hybridization and signal scoring, applied to PGD in a clinical setting.

This article describes the selection of suitable probes for single-cell FISH, spreading techniques for blastomere nuclei, and in situ hybridization and signal scoring, applied to pre-implantation genetic diagnosis (PGD) in a clinical setting.

FISH pour le diagnostic préimplantatoire génétique

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

Recherche

Médecine

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, une plateforme informatique pour aider les cliniciens dans le diagnostic et d’analyse cardiovasculaire

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Consensus d’experts internationaux et recommandations pour le diagnostic d’échographie de pneumothorax néonatal et la procédure de thoracentesis à ultrasons

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Test d’activation basophile pour le diagnostic des allergies

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...

Endoscopic Ultrasound-Guided Biliary Drainage: Endoscopic Ultrasound-Guided Hepaticogastrostomy in Malignant Biliary Obstruction

Patients with unresectable malignant biliary obstruction often require biliary drainage to decompress the biliary system. Endoscopic Retrograde Cholangiopancreatography (ERCP) is the primary biliary drainage method whenever possible. Percutaneous Transhepatic Biliary Drainage (PTBD) is used as a salvage method if ERCP fails. Endoscopic Ultrasound-Guided Biliary Drainage (EUS-BD) provides a feasible alternative biliary drainage method where one of the methods is EUS guided Hepaticogastrostomy (EUS-HGS). Here we describe the EUS-HGS technique in a case of unresectable malignant hilar biliary obstruction to achieve biliary drainage.
Presented here is the case of a 71-year-old female with painless jaundice and weight loss for 2 weeks. Computed Tomography (CT) imaging showed a 4 x 5 cm hilar tumor with lymphadenopathy and liver metastasis. EUS fine needle biopsy (FNB) of the lesion was consistent with cholangiocarcinoma. Her bilirubin levels were 212 &#181;mol/L (&lt;15) during presentation.
A linear echoendoscope was used to locate the left dilated intrahepatic ducts (IHD) of the liver. The segment 3 dilated IHD was identified and punctured using a 19 G needle. Contrast was used to opacify the IHDs under fluoroscopic guidance. The IHD was cannulated using a 0.025-inch guidewire. This was followed by the dilation of the fistula tract using a 6 Fr electrocautery dilator along with a 4 mm biliary balloon dilator. A partially covered metallic stent of 10 cm in length was deployed under fluoroscopic guidance. The distal part opens in the IHD and the proximal part was deployed within the working channel of the echoendoscope that subsequently released into the stomach. The patient was discharged three days after the procedure. Follow up performed in the second and fourth weeks showed that the bilirubin levels were 30 &#181;mol/L and 14 &#181;mol/L, respectively. This indicates that EUS-HGS is a safe method for biliary drainage in unresectable malignant biliary obstruction.

Endoscopic Ultrasound-Guided Biliary Drainage (EUS-BD) is an alternative method of biliary decompression in malignant biliary obstruction. Here we describe the technique of EUS guided-Hepaticogastrostomy (EUS-HGS) in a case of unresectable malignant hilar biliary obstruction.

Drainage biliaire guidé par échographie endoscopique: hépaticogastrostomie endoscopique guidée par ultrasons dans l’obstruction biliaire maligne

Patients with unresectable malignant biliary obstruction often require biliary drainage to decompress the biliary system. Endoscopic Retrograde ...

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have recently emerged as a promising system to model gastrointestinal pathologies. However, currently utilized methods for enteroid manipulation either lack access to the apical surface of the epithelium (three-dimensional [3D]) or are time-consuming and resource-intensive (two-dimensional [2D] monolayers). These methods often require additional steps, such as microinjection, for the model to become physiologically translatable. Here, we describe a physiologically relevant and inexpensive protocol for studying NEC in vitro by reversing enteroid polarity, resulting in the apical surface facing outward (apical-out). An immunofluorescent staining protocol to examine enteroid barrier integrity and junctional protein expression following exposure to tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) or lipopolysaccharide (LPS) under normoxic or hypoxic conditions is also provided. The viability of 3D apical-out enteroids exposed to normoxic or hypoxic LPS or TNF-&#945; for 24 h is also evaluated. Enteroids exposed to either LPS or TNF-&#945;, in combination with hypoxia, exhibited disruption of epithelial architecture, a loss of adherens junction protein expression, and a reduction in cell viability. This protocol describes a new apical-out NEC-in-a-dish model which presents a physiologically relevant and cost-effective platform to identify potential epithelial targets for NEC therapies and study the preterm intestinal response to therapeutics.

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

This protocol describes an apical-out necrotizing enterocolitis (NEC)-in-a-dish model utilizing small intestinal enteroids with reversed polarity, allowing access to the apical surface. We provide an immunofluorescent staining protocol to detect NEC-related epithelial disruption and a method to determine the viability of apical-out enteroids subjected to the NEC-in-a-dish protocol.

In vitro Modèle entéroïde apical-out de l’entérocolite nécrosante

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have ...

Point-of-Care Ultrasound: A Review of Ultrasound Parameters for Predicting Difficult Airways

Airway management remains a crucial part of perioperative care. The conventional approach to assessing potentially difficult airways emphasizes the LEMON method, which looks for and evaluates the Mallampati classification, signs of obstruction, and neck mobility. Clinical findings help predict a higher likelihood of difficult tracheal intubation, but no clinical result reliably excludes difficult intubation. Ultrasound as an adjunct to clinical examination can provide the clinician with a dynamic anatomical airway assessment, which is impossible with clinical examination alone. In the hands of anesthesiologists, ultrasound is becoming more popular in the perioperative period. This method is particularly applicable for identifying proper endotracheal tube positioning in specific patient populations, such as those who are morbidly obese and patients with head and neck cancer or trauma. The focus is on identifying the normal anatomy, correctly positioning the endotracheal tube, and refining the parameters that predict difficult intubation. Several ultrasound measurements are clinical indicators of difficult direct laryngoscopy in the literature. A meta-analysis revealed that the distance from the skin to the epiglottis (DSE) is most associated with a difficult laryngoscopy. An ultrasound of the airway could be applied in routine practice as an adjunct to the clinical examination. A full stomach, rapid sequence intubation, gross visual anatomical abnormalities, and restricted neck flexibility prevent using ultrasound to assess the airway. The airway evaluation is performed with a linear array transducer of 12-4 MHz, with the patient in the supine position, with no pillow, and with the head and neck in a neutral position. The central axis of the neck is where the ultrasound parameters are measured. These image acquisitions guide the standard ultrasound examination of the airway.

A point-of-care ultrasound (POCUS) is a simple, non-invasive, and portable tool that enables dynamic airway assessment. Several studies have attempted to determine the role of ultrasound parameters as an adjunct to clinical examination in predicting difficult laryngoscopies.

Échographie au point d’intervention : examen des paramètres échographiques pour prédire les voies respiratoires difficiles

Airway management remains a crucial part of perioperative care. The conventional approach to assessing potentially difficult airways emphasizes the LEMON ...

Managing Gestational Vomiting with Ear Plaster Therapy

Ear Plaster Therapy as a Safe and Effective Treatment for Gestational Vomiting

Nausea and vomiting in pregnancy (NVP) are common symptoms that often complicate early pregnancy for many women. While clinical treatments such as fasting, fluid infusion, and nutritional support are conventionally applied to manage NVP, their effectiveness varies. However, traditional ear plaster therapy offers a promising alternative that effectively relieves symptoms and poses no known risk to the development of embryos or fetuses. This therapy is known for its ease of application, cost-effectiveness, and favorable outcomes. Previous studies have demonstrated the efficacy of combining ear plaster therapy with conventional treatments in alleviating symptoms of nausea and vomiting in pregnant women, surpassing the results achieved with conventional treatment alone. The protocol presented herein describes a method to relieve NVP using round, smooth, and hard cowherb seeds applied to specific ear points. These seeds are gently rubbed onto the surface of the ear, utilizing the principles of acupressure. By stimulating the designated ear points, this procedure aims to regulate the body's energy flow and restore balance, thereby reducing the severity and frequency of NVP. The application of cowherb seeds on specific ear points is a straightforward technique that healthcare professionals can easily implement or self-administered by pregnant women under appropriate guidance. Overall, ear plaster therapy presents a safe, effective, and economical approach for managing gestational vomiting, offering women a potential solution to alleviate their discomfort during pregnancy.

Author Spotlight: Alleviating Nausea and Vomiting in Pregnancy with Safe and Effective Auricular Acupuncture 

The presented protocol describes a traditional Chinese medicine treatment procedure known for its safety and effectiveness in managing gestational vomiting.

La thérapie par plâtre auriculaire comme traitement sûr et efficace des vomissements gestationnels

Nausea and vomiting in pregnancy (NVP) are common symptoms that often complicate early pregnancy for many women. While clinical treatments such as ...

Preparation for Ear Plaster Therapy to Treat Pregnancy Vomiting

Begin by preparing the ear plasters for ear plaster therapy. To do so, cut a medical adhesive tape into squares, each measuring 0.6 by 0.6 square centimeters. Then position one or two smooth cow herb seeds at the center of each tape square.Next, instruct the patient to assume a comfortable seated position. Examine the skin on the patient's ear to ensure that it is intact and free from any abnormalities before selecting the acupoints. To locate the potential acupoints, stabilize the ear oracle by pinching and lifting the ear helix backward and upward using the thumb and index finger of one hand, making sure the area is fully exposed.Then, using the sterile probe in the other hand, gently examine the patient's ear to identify sensitive pressure points near the six auricular points. The stomach or CO4, cardia or CO3, belly or AH8, shenmen or TF4, subcortex or AT4, and liver or CO12.

Préparation à la thérapie par plâtre auriculaire pour traiter les vomissements de grossesse

Ear Plaster Therapy for Nausea and Vomiting in Pregnancy

To begin, ensure the patient's ear auricle area has dried after disinfecting it with 75%alcohol, Then stabilize the auricle by pinching the ear helix with the thumb and index finger of one hand and lifting it backward and upward. Next, use the forceps to pick up the prepared ear plaster and place it onto the selected acupoint in the patient's ear, such that the cow herb seeds in the center of the plaster touches the selected point. Ask for the patient's assurance that the seed placement aligns with a sensitive or sore spot.Positioning the thumb and index finger in front of and behind the auricle. Apply moderate and tolerable pressure with rhythmic, pressing and relaxing motion to stimulate the cow herb seeds at the auricular site. Continue the rhythmic press and release at each site for three to five minutes, maintaining an even pace.Monitor the patient's overall condition for 15 minutes post-treatment. Instruct the patient or their family to stimulate the seeds by rubbing the concerned area three times a day, in the morning, at midday, and in the evening. After three days, remove the ear plaster and repeat the procedure on the opposite ear, alternating treatment between both ears.Compared to the control group, the experimental group, which received ear plaster therapy, had a significantly shorter average hospital stay and also required a significantly lower time for ketone bodies to turn negative. These suggested that ear plaster therapy can effectively reduce the treatment time for gestational vomiting. Prior to treatment, there were no statistically significant differences in PUQE scores between the experimental and control groups.However, after five days of treatment, both showed a significant reduction in the scores. But the score of the experimental group was significantly lower than that of the control group.