L’objectif global de ce prétraitement est de générer des souris et que les canaux TRPV1 sont désensibilisés aux régions supraspinales. Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine neuropharmacologique. Le principal avantage de cette technique est que la désensibilisation sélective supraspinale TRPV1 peut être induite d’une manière assez simple.
Pour commencer cette procédure, anesthésier une souris avec du sodium pentobarbital intraperitoneally et vérifier la perte de réflexe de droitage. Pour un traitement sous-cutané, injecter rtx à 20 microgrammes par millilitre dans l’arrière du cou à un volume de 0,1 millilitre par 10 grammes de poids corporel. Pour le groupe témoin, injectez le véhicule de la même manière.
Passez une aiguille jetables de calibre 27 à travers un tube métallique pour exposer la pointe de 3 à 3,5 millimètres de l’aiguille. Ensuite, maintenez fermement les os squamosal de la souris avec les doigts. Déplacez l’aiguille latéralement sur le cuir chevelu et de trouver la suture sagittale que la pointe de l’aiguille est accroché sur la suture.
Déplacez la pointe d’environ un millimètre vers la droite, puis déplacez la pointe de façon rostrale pour trouver la suture coronale. Par la suite, insérez l’aiguille lentement et verticalement. Injectez la solution RTX plus de 10 secondes et maintenez-la encore 10 secondes par la suite.
Par la suite, retirez l’aiguille lentement et retournez la souris dans sa cage d’origine. Une semaine après l’injection de RTX, au moins 60 minutes avant le test, transférez la souris à la salle de test. Au moins 30 minutes avant l’essai, placez la souris dans une cage en plexiglas afin de lui permettre de s’acclimater à l’environnement.
Puis 20 minutes avant le test, administrer l’acétaminophène à 300 milligrammes par kilogramme à la souris intraperitoneally. Tenez la souris lâchement dans un petit sac en tissu et insérez une aiguille de calibre 30 dans le talon de la patte arrière droite. Avancez l’aiguille sous-cutanée à proximité de la garniture de marche et injectez 20 microlitres de solution RTX à 0,05 microgramme par millilitre.
Par la suite, mesurez la période de léchage et de comportement mordant dans la région glabre de la patte affectée dans chaque bloc de cinq minutes. Une semaine après l’injection rtx, transférer la souris à la salle de test. Placez la souris dans une cage en plexiglas.
Marquez les taches à 1,5 et 2,5 centimètres de la base de la queue. Ensuite, tenez la souris lâchement dans un petit sac en tissu et appliquez une pression sur les taches avec une sonde contondante. Veuillez noter que la pression de coupure de 250 grammes est imposée pour éviter des dommages de tissu.
Déterminez la pression nécessaire pour obtenir un comportement d’évacuation et calculez le seuil nociceptif en faisant la moyenne de la pression déterminée aux deux endroits. Répétez les procédures toutes les 15 minutes. Après avoir obtenu la ligne de base, administrer de l’acétaminophène à 300 microgrammes par kilogramme à la souris intraperitoneally, puis répéter le test de pression de la queue toutes les 15 minutes jusqu’à ce qu’il atteigne 90 minutes.
Ces deux chiffres montrent la réactivité des souris traitées par SC ou ICV à l’injection intraplantaire de RTX. Le comportement léchant et mordant des souris traitées par véhicule a été remarquable dans les 10 premières minutes. Bien que les souris prétraitées sc n’aient pas montré le comportement léchant et mordant du tout, les souris prétraitées d’ICV ont normalement répondu à l’injection plantaire de RTX.
En outre, l’administration intraperitoneal de l’acétaminophène a réduit le comportement léchant et mordant des souris traitées de véhicule ICV, mais pas chez les souris traitées par RTX ICV. Ce graphique montre les effets analgésiques de l’acétaminophène à 300 microgrammes par kilogramme dans le test de pression de la queue. L’acétaminophène a réduit la réponse nociceptive des souris prétraitées de véhicule dans les deux essais, mais les effets analgésiques de l’acétaminophène ont été inhibés chez les souris qui ont été prétraitées ICV avec RTX.
Une fois maîtrisée, cette technique d’injection iCV peut être appliquée à d’autres médicaments. N’oubliez pas que travailler avec resiniferatoxin peut être extrêmement dangereux et assurez-vous d’utiliser des gants en caoutchouc et des lunettes pour la protection lors de la manipulation.
