Cette méthode peut aider à répondre aux questions sur l’état efficace ou motivant des animaux dans différentes conditions de douleur. Il s’agit d’une étape importante dans l’amélioration de la traduction de la recherche préclinique. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est relativement rapide et facile à exécuter, tout en évaluant des motivations complexes qui influencent le comportement lié à la douleur.
Commencez par construire les parois latérales, le sol et le plafond de la chambre un en utilisant un acrylique blanc opaque de trois millimètres d’épaisseur. Pour le mur orienté vers l’avant, utilisez un acrylique transparent de trois millimètres d’épaisseur. Fixez le couvercle de la chambre un avec une charnière afin que les souris puissent être facilement placées et récupérées dans la chambre.
Fixez ensuite du ruban adhésif à diode électroluminescente autocollante à la surface interne du couvercle pour fournir un éclairage d’environ 4 800 lux. Faites glisser une feuille d’acrylique opaque dans et hors de sa position pour fermer la première chambre du reste de l’appareil MCA. Ensuite, construisez une chambre non éclairée de 270 millimètres de long, la chambre d’essai MCA, en utilisant de l’acrylique rouge foncé translucide sur tous les côtés avec un couvercle articulé sur le dessus.
Placez ensuite une grille de 13 x 31 ayant deux trous de millimètre sur le sol de la chambre à travers lesquels un ensemble de sondes contondantes avec des pointes de 0,5 millimètre de diamètre peuvent faire saillie. Ajustez la hauteur des sondes en plaçant des feuilles d’acrylique supplémentaires sous la plaque de base de la sonde. En utilisant cette approche, configurez l’appareil avec des hauteurs de sonde nulles, deux et cinq millimètres.
Comme alternative aux broches de carte émoussées ou à des matériaux similaires, utilisez les fichiers de l’imprimante 3D pour imprimer le sol de la chambre deux et la plaque de sonde avec un matériau lavable et biocompatible tel que le plastique nylon 12. Enfin, construisez une chambre sombre trois en utilisant de l’acrylique rouge foncé translucide de tous les côtés avec un couvercle articulé similaire aux chambres un et deux. Placez-le à l’extrémité opposée de la chambre un pour servir de zone d’évacuation sombre des sondes mécaniques de la chambre deux.
Un jour avant de planifier le test de base, acclimatez les souris à l’unité MCA pendant 5 à 15 minutes avec leurs compagnons de cage pour faciliter l’exploration sociale de l’ensemble de l’appareil. Assurez-vous que les LED de la chambre un sont éteintes, que la barrière entre les chambres un et deux est maintenue ouverte et que les sondes ne dépassent pas à travers le plancher de la chambre deux. Ensuite, configurez une caméra vidéo capable d’enregistrer des séquences de 1080 pixels sur un trépied avec une vue latérale de l’ensemble de l’appareil MCA.
Ajustez le champ de vision de manière à ce que le MCA remplisse l’image enregistrée. Une fois l’enregistrement commencé, tenez une planche d’effacement à sec portative dans la vue de champ de la caméra pour étiqueter le début de la vidéo avec des informations d’identification sur les tests de l’animal. Pour la première exécution, réglez la hauteur de la sonde à zéro et transférez la souris à tester de sa cage d’origine à la première chambre avec la porte barrière en place.
Démarrez une minuterie visible dans le métrage enregistré. Après 10 secondes, allumez la chambre une LED. Une fois que la souris a été dans la chambre allumée pendant 20 secondes, retirez la barrière entre les chambres un et deux.
Observez l’animal pendant deux minutes et mesurez les latences ou les temps d’arrêt avec un chronomètre pendant que le test est en cours. Enregistrez la latence à la première entrée de la chambre deux, la latence à traverser plus de la moitié de la chambre deux, le temps de séjour total dans la chambre deux, la latence pour atteindre la chambre trois et le temps de séjour total dans chaque chambre en deux minutes et convertissez-les en proportions. Une fois le test terminé, retournez la souris dans sa cage d’origine.
Nettoyez les chambres MCA avec de l’éthanol à 70% et laissez-les sécher complètement. Après avoir exécuté toutes les souris de la cohorte avec la hauteur de la sonde réglée sur zéro, insérez une feuille d’acrylique de trois millimètres sous la plaque de base de la sonde mécanique et répétez la course avec une hauteur de sonde de deux millimètres. Après avoir exécuté toutes les souris avec la hauteur de la sonde réglée sur deux millimètres, insérez une autre feuille d’acrylique de trois millimètres sous la plaque de base de la sonde et répétez la course avec une hauteur de sonde de cinq millimètres.
Effectuez un nettoyage final avec un désinfectant à la fin de la séance de test. Dans le modèle complet de douleur inflammatoire induite par un adjuvant de Freund, une injection saline ne modifie pas la latence d’échappement par rapport à la ligne de base. Les souris injectées avec l’adjuvant ont montré une augmentation significative de la latence d’échappement quatre jours après l’injection, mais seulement lorsque la hauteur de la sonde a été portée à cinq millimètres.
Cette latence accrue n’a pas été observée chez les souris ayant reçu du carprofène 90 minutes avant le début des tests. Le modèle de lésion nerveuse épargnée de la douleur neuropathique a considérablement augmenté la latence pour s’échapper par rapport à la ligne de base lorsque la hauteur de la sonde a été fixée à cinq millimètres. Cette augmentation a été évitée par l’administration de l’analgésique opioïde buprénorphine 90 minutes avant le test.
Une latence d’échappement accrue a également été observée chez les souris qui n’ont pas subi une série de tests MCA de base avant une lésion nerveuse. L’augmentation de la latence d’échappement chez les souris atteintes de lésions nerveuses épargnées à cinq millimètres a été évitée par la gabapentine administrée 90 minutes avant le test. Dans le modèle de fracture ou de coulée, la latence pour s’échapper de la chambre un augmentait proportionnellement à la hauteur de la sonde avant la blessure.
Après la blessure, la latence est restée inchangée à zéro millimètre, mais a considérablement augmenté à la hauteur de sonde de deux millimètres et de cinq millimètres pour les hommes et à la hauteur de sonde de cinq millimètres pour les femmes par rapport à la ligne de base. La chose la plus importante à retenir lors de la tentative de cette procédure est de s’assurer que toutes les souris sont habituées au dispositif MCA et de maintenir une randomisation et une mise en aveugle appropriées tout au long de l’étude. Cette méthode peut être utilisée avec d’autres mesures de la sensibilité à la douleur, y compris von Frey ou la préférence de lieu conditionnelle.
