Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés sur le traitement à base de cellules souches des neuropathies périphériques, en particulier pour la neuropathie laryngéale récurrente équine. Les principaux avantages de cette technique sont que la récolte de cellules souches est peu invasive, et que la méthode d’injection peut également être transférée à d’autres neuropathies périphériques. Les implications de cette technique s’étendent à d’autres études d’autres types de cellules, car les cellules souches peuvent être différenciées en d’autres cellules d’intérêt avant l’injection.
La démonstration visuelle de cette méthode est critique, car le contrôle endoscopique vidéo des mouvements laryngeal et la manipulation des techniques de stimulateur nerveux peuvent être difficiles à apprendre. Identifier le site de l’échantillon dans la longue tête du muscle du triceps par inspection visuelle et palpation, vers la ligne médiane entre le point du coude et le point de l’épaule. Utilisez des tondeuses électriques pour raser une zone d’environ deux par deux centimètres, et appliquez un gommage chirurgical composé de savon liquide poly-iodure et de compresses d’alcool pendant une minute sur la peau exposée.
À l’aide d’une aiguille de calibre 25, injectez sous-cutanément une solution de lidocaïne de 2 % au centre de la zone désinfectée. Après avoir désinfecté avec du savon antibactérien propre pour les mains et enfilé des gants stériles, placez une aiguille de biopsie semi-automatique de calibre 14 sur un drapé stérile jetable et tirez sur le mécanisme de ressort pour armer l’aiguille. Assembler une canule et un obturateur en position verrouillée pour former un trochar, et introduire le trochar perpendiculairement à travers la peau désensibilisée, environ 1,5 centimètres dans le tissu musculaire sous-jacent.
Retirez ensuite le trochar et placez l’obturateur sur un drapé stérile. Introduire l’aiguille à travers la canule. Ensuite, introduire l’aiguille et la canule à travers l’incision cutanée dans le muscle, jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille est au milieu de la longue tête du muscle triceps.
Relâchez ensuite l’aiguille de biopsie, tirez l’aiguille et la canule hors du muscle ensemble, et retirez l’aiguille de la canule. Tirez le ressort d’une main tout en tenant l’aiguille avec l’autre main, jusqu’à ce que le spécimen devienne visible à la pointe de l’aiguille de biopsie. Avec l’aide d’un assistant, ouvrez un tube d’échantillon contenant le milieu de l’échantillon et utilisez une aiguille hypodermique de calibre 19 pour transférer le petit morceau musculaire de l’aiguille de biopsie dans le milieu d’échantillonnage.
Fermez le tube avec le bouchon de vis et inclinez doucement le tube deux fois pour vous assurer que l’échantillon flotte dans le milieu. Puis ré-armer l’aiguille de biopsie et réintroduire la canule par l’incision cutanée pour recueillir deux à trois autres échantillons jusqu’à ce qu’environ 20 milligrammes de tissu musculaire a été acquis. Pour injecter les cellules, après avoir réchauffé la suspension cellulaire à température ambiante, aspirer un millilitre de cellules dans une seringue de deux millilitres et confirmer que le cheval est dans la position tête baissée qui est indicative de la sedation complète.
Ensuite, coupez une zone de vingt par dix centimètres au-dessus de la région laryngeal gauche, et appliquez un gommage chirurgical de savon poly-iodure et d’alcool à la région exposée. Placez un endoscope vidéo standard flexible à travers le nare gauche du cheval vers le nasopharynx, en ajustant la position de l’endoscope jusqu’à ce qu’une vue complète des cartilages aryténoïdes et de l’épiglotte soit obtenue. Connectez l’aiguille d’injection de stimulation à l’électrode négative du stimulateur nerveux.
Connectez la seringue contenant la suspension cellulaire à la ligne d’injection et remplissez le tube pour éliminer l’air du système. Connectez l’électrode positive du stimulateur nerveux à un patch d’électrode qui sera collé à la zone de la peau exposée. Chargez une seringue avec un volume de solution saline stérile égale au volume préressouvi du tube, et introduisez l’aiguille d’injection de stimulation vers l’aspect dorsolateral du larynx, en commençant le stimulateur nerveux dans le mode de stimulation Hertz un, avec un courant de deux milliamps à l’approche de l’aspect latéral dorsal du larynx.
Déplacez doucement l’aiguille vers le nerf laryngeal récurrent. Dès que le mouvement d’enlèvement du cartilage aryténoïde gauche est visible, réduisez le courant, jusqu’à ce que le mouvement disparaisse, tout en gardant l’aiguille en place. Lorsqu’une perte de réponse motrice à 0,5 milliamps est observée, maintenez la position de l’aiguille et injectez un millilitre des cellules souches autologues, suivie de tout le volume de solution saline pré-préparée.
Maintenir l’aiguille dans une position stable au cours de ce processus, car la distance aux nerfs est contrôlée par les courants qui produisent une réponse motrice et de minuscules mouvements de l’aiguille peut produire une perte soudaine de réponse. Retirez ensuite l’aiguille et l’endoscope, et laissez le cheval récupérer avec surveillance. Dans des études antérieures, aucun effet indésirable n’a été observé pendant ou après l’échantillonnage, et aucune inflammation n’a été observée pendant ou après la stimulation ou l’injection des cellules souches.
En outre, aucune différence entre les scores de pré-injection des fonctions laryngeal, et les scores obtenus les jours un, sept, et 28 après l’injection de cellules souches ont été mesurés. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler que la procédure de collecte des cellules souches est non invasive et permet la culture d’un grand nombre de cellules souches mésenchymales autologues dans un court laps de temps. Suite à cette procédure, d’autres méthodes, comme l’injection de cellules pré-différenciées, peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur la question de savoir si les cellules de Schwann sont plus susceptibles de contribuer à la détermination des nerfs.
Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs en médecine régénérative pour explorer l’utilisation des cellules souches dans la neuropathie laryngéale récurrente équine.
