Une biopsie, comme la plupart d’entre vous le savent, est l’ablation d’un peu de tissu de l’organe d’intérêt et dans ce cas, c’est la glande mammaire. L’échantillon de biopsie est très utile si vous allez faire des choses comme l’analyse de l’expression des gènes, si vous allez faire des choses comme de prendre une partie du tissu et faire une analyse histologique, pour regarder la structure au niveau microscopique de la glande mammaire, également très utile pour déterminer des choses comme les voies de signalisation liées à l’action hormonale, par exemple , donc l’une des mises en garde que vous devez être conscient de quand vous faites une sorte d’échantillonnage de tissus mammaires, est-ce que vous avez pris un échantillon qui est vraiment représentatif? Parce que, vous pouvez capturer un lobule, qui serait comme un groupe de raisins, ou vous pouvez capturer des alvéoles individuelles qui ne représentent vraiment pas la normale, donc, l’espoir que vous avez quand vous faites votre biopsie mammaire, c’est que vous collectez des tissus parenchymaux, qui est juste un mot de fantaisie pour dire le tissu fonctionnel responsable de la production de lait , un échantillon représentatif.
La plupart des terminaisons sensorielles nerveuses de la glande mammaire sont associées à la peau, et il est donc important de réaliser et d’apprécier que, une fois que vous avez fait la bonne préparation de la zone où vous allez faire l’incision initiale, pour anesthésier la peau, alors il ya très peu dans la voie des terminaisons nerveuses sensorielles associées au tissu parenchymal lui-même , et donc l’inconfort que l’animal ressentirait est principalement associé à la peau. Donc, il ya une variété de choses qui peuvent être faites avec ce tissu, et il permet effectivement de recueillir plus d’informations sur la façon dont cet animal fonctionne, par rapport à ce qui pourrait être obtenu en observant simplement ce qui a été donné à l’animal et les réponses dans la production de protéines du lait ou la production de composants laitiers. Toutes les méthodes décrites ont été approuvées par le Virginia Tech Institutional Animal Care and Use Committee.
Un jour avant la biopsie prévue, laver et frotter l’animal, en particulier, le pis, pour enlever le fumier et les matières souillées. Évaluer la santé, la condition physique et le comportement de l’animal. N’utilisez que des vaches en bonne santé.
Traire complètement la vache. Déplacez l’animal dans la goulotte de compression, idéalement dans les deux heures suivant la traite afin de minimiser la présence de lait dans les glandes. Retenez l’animal avec une porte de tête.
Placez un licol de corde sur la tête de la vache pour empêcher le mouvement vers l’arrière et vers l’avant. Tirez la tête de l’animal d’un côté et attachez la corde à la goulotte de compression à l’aide d’un nœud à libération rapide pour maintenir la tête en place. Nettoyez la zone d’injection avec un écouvillon d’alcool à 70 % d’isopropylique et administrez la méglumine flunixin 1,1 à 2,2 milligrammes par kilogramme de poids corporel par voie intraveineuse, par voie intraveineuse, par la veine jugulaire, 15 à 20 minutes avant la biopsie.
Localiser la veine jugulaire. Soulever la veine jugulaire par application de pression à la base de la rainure jugulaire. Vérifiez qu’il n’y a pas de bulles dans la seringue.
Insérez l’aiguille dans la veine jugulaire surélevée et dessinez deux fois 0,5 millilitres de sang dans la seringue et mélangez avec le contenu. Si aucun sang ne se présente dans la seringue, déplacez l’aiguille. Si l’aiguille réside dans la veine, injectez le contenu.
Retirez doucement l’aiguille, appliquez la gaze avec la pression douce au site d’injection pour empêcher le saignement. Administrer l’hydrochlorure de xylazine par voie intraveineuse, de 0,01 à 0,05 milligramme par kilogramme de poids corporel dans le vaisseau coccygeal environ cinq à dix minutes avant la biopsie pour laisser suffisamment de temps pour l’établissement de la sédation. Soulevez la queue et nettoyez la zone d’injection avec un écouvillon d’alcool à 70 % d’isopropylique.
Vérifiez qu’il n’y a pas de bulles dans la seringue. Insérez l’aiguille dans le récipient arrière, dessinez 0,2 millilitres de sang dans la seringue et mélangez-la avec le contenu pour vous assurer que l’aiguille réside dans le navire. Si l’aiguille est résidente, injectez le contenu de la seringue.
Retirer délicatement l’aiguille. Appliquer la gaze avec une légère pression sur le site d’injection. Il est vraiment important d’avoir un renversement alpha deux sous la main, comme la tolazoline, c’est parce que les vaches laitières sont sensibles aux effets de la xylazine, et une surdose de xylazine peut causer un œdème pulmonaire, qui pourrait potentiellement être mortelle pour la vache laitière, alors surveillez votre vache pour les signes de sursedation et si elles se produisent, alors la quantité appropriée de tolazoline peut être donnée.
Nous voulons que nos vaches soient debout pendant une procédure. Trop de xylazine peut les amener à s’asseoir. Avoir un assistant attacher la queue pour la procédure, sélectionnez le site de biopsie sur le pis, généralement dans une zone supérieure pour minimiser la collecte de tissu conjonctif et d’éviter la pénétration dans la citerne de la glande.
Observez et palpez la peau avec une attention particulière pour identifier tous les grands vaisseaux sanguins sous-cutanés afin d’éviter ces vaisseaux pendant la biopsie. Couper les cheveux à partir d’une zone carrée de 15 par 15 centimètres autour du site de biopsie, préparer la zone de biopsie avec un povidone-iode, 0,75 pour cent d’iode disponible, ou gommage au gluconate de chlorhexidine. Alternez l’alcool isopropylique à 70 % au moins trois fois pour enlever tous les débris visibles et invisibles.
Appliquez la solution de gommage aseptique et l’alcool d’isopropyle dans un mouvement circulaire, en utilisant l’approche à l’intérieur. Assurez-vous que la solution de gommage antiseptique reste en contact avec la peau pendant au moins cinq minutes. Utilisez un ensemble d’infusion de papillons avec une aiguille de 18 G pour déposer six millilitres d’hydrochlorure de lidocaïne à deux pour cent sous-cutanée au site d’incision pour créer un bloc de ligne.
Ne pénètrez pas dans les tissus plus profonds. Laissez l’anesthésique local se diffuser pendant trois à cinq minutes, effectuer une autre répétition de la solution de gommage et de l’alcool avant l’incision. En attendant, préparez les instruments de biopsie.
Ce que vous voulez faire en termes de fournir l’analgésie est de désensibiliser la peau. C’est parce que nous avons plus d’innervation neuronale à la peau et les tissus sous-cutanés, et dans le parenchyme, nous ne parlons vraiment que de récepteurs stretch, et ceux-ci ne ressentent pas de douleur chirurgicale de la même façon que la peau et les tissus sous-cutanés ne. En fait, si vous finissez par mettre l’anesthésie locale à travers dans le parenchyme, vous pouvez augmenter votre risque de saignement pendant la procédure.
Utilisez des techniques aseptiques lors de la manipulation des outils de biopsie et pour l’incision. Lavez-vous les mains pour éliminer toute contamination visible et appliquez des gants chirurgicaux stériles. Disposer les instruments chirurgicaux dans une zone stérile par ordre d’utilisation.
Portez un scalpel numéro 10, une gaze stérile et assemblez l’instrument de biopsie et une serviette stérile pour l’homéostasie. Procédure 1, instrument de biopsie de base. Assembler l’instrument de biopsie de base à l’aide de gants chirurgicaux.
Déposer les sept pièces stériles sur un drapé stérile. Insérez la lame dans le système d’amarrage sur la deuxième pièce. Insérez la troisième pièce sur la deuxième pièce, en veillant à ce que la station d’amarrage s’aligne.
Engagez le bord final de la lame dans le système d’amarrage de la pièce quatre. Poussez vers l’avant pièce quatre et d’observer si la pièce quatre est à côté de la pièce trois. Insérez la cinquième pièce sur l’appareil.
Assurez-vous que la station d’accueil est alignée. Insérez la pièce six dans le haut de la pièce deux. Assurez-vous que la station d’accueil est alignée.
Insérez la vis de verrouillage dans la station d’amarrage. Poussez la pièce trois vers l’avant pour couvrir la vis de verrouillage. Activez l’outil, en poussant la pièce quatre vers l’avant et observez la lame à l’extérieur de l’outil.
Tirez la pièce quatre vers l’arrière pour retirer la lame dans l’outil. Assurez-vous que la vache est suffisamment sous sedated et que le site de biopsie est suffisamment anesthésié, pincez la peau pour ne pas réagir. Faire une incision verticale de deux à trois centimètres à travers la peau et les tissus sous-cutanés de proximal à distal à l’aide d’un scalpel numéro 10.
Attachez l’instrument de biopsie à une perceuse sans fil à l’aide de techniques stériles. Placez la perceuse contre l’outil de biopsie et vérifiez si l’outil est fermement attaché à la perceuse. Assurez-vous d’une retenue adéquate en faisant élever la queue par une personne pendant toutes les procédures.
Allumez la perceuse à l’aide d’une rotation dans le sens des aiguilles d’une montre et d’une faible vitesse. Avancez l’outil de biopsie entier autour de 7.5 centimètres dans le pis par l’incision tandis que l’outil tourne. Éteignez la perceuse et prolongez manuellement la pièce quatre de l’outil, allumez la perceuse à l’aide d’une rotation dans le sens des aiguilles d’une montre et d’une basse vitesse, retirez l’instrument contenant le noyau tissulaire du pis.
Appliquez immédiatement une forte pression sur la plaie à l’aide d’une serviette stérile pendant au moins 20 minutes. Insérez la canule dans le tissu. Poussez la pièce vers l’avant pour activer l’outil.
Tournez dans le sens des aiguilles d’une montre. L’échantillon de tissu est maintenant à l’intérieur de la canule. Retirer le tissu de l’outil de biopsie à l’aide d’une pince à épiler.
Gardez l’échantillon dans une solution saline tamponnée d’un X phosphate et évaluez la quantité de tissu. Prenez les signes vitaux de la vache toutes les 10 minutes après la biopsie pendant au moins 30 minutes. Vérifiez s’il y a des saignements après 20 minutes de pression sur le site de la biopsie.
S’il y a des gouttes de sang, continuez d’appliquer de la pression pendant cinq à dix minutes supplémentaires. Fermez les incisions à l’aide d’agrafes en acier inoxydable à intervalles de cinq millimètres après que tous les saignements se sont arrêtés. Appliquer un bandage en aérosol sur la zone de biopsie.
Observez l’animal pendant 50 minutes après l’intervention. Procédure 2, instrument de biopsie d’aiguille. Suivez les instructions du fabricant pour l’appareil.
Retirer l’aiguille de biopsie de l’emballage à l’aide de techniques stériles. Jetez l’aiguille si des dommages sont observés. Attachez l’aiguille à l’appareil.
Fermez le couvercle et arméz l’appareil. Assurez-vous que la vache est suffisamment sous sedated et que le site de biopsie est suffisamment anesthésié, pincez la peau pour ne pas réagir. Faire une incision verticale d’un à deux centimètres à travers la peau et les tissus sous-cutanés de proximal à distal à l’aide d’un scalpel numéro 10.
Insérez l’aiguille de biopsie dans le site d’incision, environ 10 à 13 centimètres de la peau. Activez le dispositif d’aiguille de biopsie pour recueillir le tissu. Retirer l’aiguille du pis.
Appliquer une forte pression immédiate sur la plaie à l’aide d’une serviette stérile pendant au moins 20 minutes. Après avoir enlevé le tissu de l’aiguille, suivez la procédure décrite précédemment pour fermer l’incision. L’ensemble de la procédure prend environ 45 minutes pour terminer, par animal.
Les caillots sanguins doivent être retirés du quart de biopsie. En outre, il est nécessaire d’observer le rendement laitier et l’apport alimentaire, si possible. Assurez-vous toujours de la santé et du bien-être de l’animal avant, pendant et après l’intervention.
Documenter tous les médicaments administrés aux animaux. Vérifiez la présence de sang dans le lait pendant sept à dix jours après la biopsie. Dépouillez les caillots sanguins du quartier biopsié lors des traites subséquentes et assurez-vous que l’élimination complète du lait se produit.
Observez le rendement laitier et, si possible, l’apport alimentaire quotidien individuel jusqu’à ce que les aliments de base chirurgicaux aient été enlevés. Surveillez l’animal deux fois par jour pour la température corporelle, la respiration et les fréquences cardiaques, et le comportement, jusqu’à ce que les agrafes chirurgicales aient été enlevées. Vérifiez le site de biopsie deux fois par jour pour l’enflure, la tendresse, et tous les signes de drainage jusqu’à ce que les agrafes chirurgicales aient été enlevées.
Si ceux-ci sont observés, consultez un vétérinaire. Retirer les agrafes du site d’incision 10 à 14 jours après la biopsie, selon le taux de guérison. Consultez un vétérinaire si des signes d’infection locale ou systémique sont observés.
Donc, dès que la biopsie est prise, vous avez interrompu le sang et donc l’approvisionnement en nutriments et en oxygène à ce tissu, et donc si vous n’êtes pas très rapide à enlever ce noyau tissulaire, et en quelque sorte arrêter l’activité tissulaire, les concentrations que vous pourriez mesurer à un moment ultérieur dans le laboratoire peut ne pas être vraiment le reflet de ce qui se passe chez cet animal au moment de la biopsie. Typiquement, nous enlevions rapidement le tissu, et flash le congelons dans l’azote liquide pour essayer de préserver cette activité. L’autre chose que l’on peut faire avec ce tissu, et c’est en fait quelque chose que nous avons fait avec le tissu que nous avons recueilli, c’est qu’on peut isoler et cultiver les cellules qui sont présentes dans ce tissu dans un système de culture.
Dans notre cas, nous nous intéressons aux cellules épithéliales qui se trouvent dans ce tissu, parce que ce sont les cellules qui synthétisent et sécrètent réellement les composants du lait, et donc, ces cellules de ces morceaux de tissu ont été placées en culture, et en fait, elles continuent de croître aujourd’hui. Les animaux ont été observés deux fois par jour pendant 10 jours après l’intervention. Aucune complication ne s’est produite pendant la procédure ou pendant la période postopératoire, les paramètres vitaux des vaches restant dans les limites normales.
Les modèles linéaires montrent que 10 jours avant la biopsie, les animaux produisaient 23,35 kilogrammes de lait par jour. Les animaux n’ont pas montré de changements significatifs dans le rendement laitier de 10 jours avant à 10 jours après la biopsie. La biopsie des glandes mammaires bovines est une procédure mini-invasive, ce qui permet à l’animal d’avoir un court temps de récupération.
Par conséquent, cette procédure de biopsie peut être utilisée dans de nombreux essais nutritionnels et d’autres types d’essais où nous pourrions utiliser des mesures répétées sur les animaux, donc par exemple, si nous avons quatre périodes avec quatre traitements nutritionnels différents, nous pourrions facilement biopsier ces vaches quatre fois différentes à la fin de chaque période, permettant peut-être une semaine de repos entre chaque période , pour s’assurer que les animaux retournent à leur production normale.
