Técnicas de biópsia da glândula mamária bovina

Uma biópsia, como eu acho que a maioria de vocês sabe, é a remoção de um pouco de tecido do órgão de interesse e, neste caso, é a glândula mamária. A amostra de biópsia é muito útil se você vai fazer coisas como análise de expressão genética, se você vai fazer coisas como pegar um pouco do tecido e fazer uma análise histológica, olhar para a estrutura no nível microscópico da glândula mamária, também muito útil para determinar coisas como sinalizar caminhos relacionados à ação hormonal, por exemplo , então um dos cuidados que você precisa estar ciente quando você faz qualquer tipo de amostragem de tecido mamário, você pegou uma amostra que é realmente representativa? Porque, você pode capturar um lobule, que seria como um aglomerado de uvas, ou você pode capturar alguns alvéolos individuais que realmente não representam o normal, então, a esperança que você tem quando você faz sua biópsia mamária é que você está coletando tecido parenchímico, que é apenas uma palavra chique para dizer o tecido funcional responsável pela produção de leite , uma amostra que é representativa.

A maioria das terminações nervosas sensoriais na glândula mamária estão associadas à pele, e por isso é importante perceber e apreciar que, uma vez que você tenha feito a preparação adequada da área onde você vai fazer a incisão inicial, para anestesiar a pele, então há muito pouco no caminho de quaisquer terminações nervosas sensoriais associadas com o tecido paríno em si , e assim o desconforto que o animal sentiria está principalmente associado com a pele. Então, há uma variedade de coisas que podem ser feitas com este tecido, e ele realmente permite reunir mais informações sobre como esse animal funciona, em comparação com o que pode ser obtido simplesmente observando o que foi alimentado com o animal e as respostas na produção de proteína do leite ou na saída de componentes do leite. Todos os métodos descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Virginia Tech.

Um dia antes da biópsia programada, lave e esfregue o animal, particularmente o úbere, para remover estrume e material sujo. Avalie a saúde, a condição física e o comportamento do animal. Use apenas vacas saudáveis.

Ordenha completamente a vaca. Mova o animal para o paraquedas de espremer, idealmente dentro de duas horas de ordenha para minimizar a presença do leite nas glândulas. Contenha o animal com um portão da cabeça.

Coloque uma cabeleira de corda na cabeça da vaca para evitar movimentos para trás e para frente. Puxe a cabeça do animal para um lado e amarre a corda no paraquedas usando um nó de liberação rápida para manter a cabeça no lugar. Limpe a área de injeção com um cotonete de álcool isopropílico de 70% e administre a meglumina de flunixina de 1,1 a 2,2 miligramas por quilograma de peso corporal por via intravenosa, através da veia jugular, 15 a 20 minutos antes da biópsia.

Localize a veia jugular. Levante a veia jugular por aplicação de pressão na base do sulco jugular. Verifique se não há bolhas na seringa.

Insira a agulha na veia jugular levantada e desenhe 0,5 mililitros de sangue na seringa duas vezes e misture com o conteúdo. Se não aparecer sangue na seringa, realoque a agulha. Se a agulha estiver residente na veia, injete o conteúdo.

Retire suavemente a agulha, aplique gaze com pressão suave no local da injeção para evitar sangramento. Administre a cloridrato de xilazina por via intravenosa, de 0,01 a 0,05 miligramas por quilograma de peso corporal no vaso coccygeal aproximadamente cinco a 10 minutos antes da biópsia para permitir tempo suficiente para o estabelecimento da sedação. Levante a cauda e limpe a área de injeção com um cotonete de álcool isopropílico de 70%.

Verifique se não há bolhas na seringa. Insira a agulha no vaso da cauda, desenhe 0,2 mililitros de sangue na seringa e misture com o conteúdo para garantir que a agulha esteja residente no vaso. Se a agulha for residente, injete o conteúdo da seringa.

Retire delicadamente a agulha. Aplique gaze com pressão suave no local da injeção. É muito importante ter uma reversão alfa dois na mão, como tolazolina, isso é porque as vacas leiteiras são sensíveis aos efeitos da xilazina, e uma overdose de xilazina pode causar edema pulmonar, o que pode ser fatal para a vaca leiteira, então observe sua vaca em busca de sinais de sedação excessiva e se isso ocorrer, então a quantidade apropriada de tolazolina pode ser dada.

Queremos que nossas vacas fiquem de pé durante um procedimento. Muita xilazina pode fazer com que eles se sentem. Tenha um assistente amarrando a cauda para o procedimento, selecione o local da biópsia na úbere, tipicamente em uma área superior para minimizar a coleta de tecido conjuntivo e evitar penetração na cisterna da glândula.

Observe e palpa a pele com atenção especial para identificar quaisquer vasos sanguíneos subcutâneos grandes, a fim de evitar esses vasos durante a biópsia. Corte o cabelo de uma área quadrada de 15 por 15 centímetros ao redor do local da biópsia, prepare a área de biópsia com um iodo povidone, 0,75% de iodo disponível, ou esfoliante de gluconato de clorexidina. Alterne o álcool isopropílico de 70% pelo menos três vezes para remover todos os detritos visíveis e invisíveis.

Aplique a solução de esfoliação asséptica e o álcool isopropílico em movimento circular, utilizando abordagem de dentro para fora. Certifique-se de que a solução antisséptica permanece em contato com a pele por pelo menos cinco minutos. Use um conjunto de infusão de borboletas com uma agulha de 18 G para depositar seis mililitros de dois por cento de cloridrato de lidocaína subcutânea no local da incisão para criar um bloco de linha.

Não penetre nos tecidos mais profundos. Permitir que o anestésico local se difunda por três a cinco minutos, realize outra repetição da solução de esfoliação e do álcool antes da incisão. Enquanto espera, prepare os instrumentos de biópsia.

O que você quer fazer em termos de fornecer analgesia é dessensibilizar a pele. Isso porque temos mais inervação neural na pele e tecidos subcutâneos, e no parenchyma, estamos realmente falando apenas de receptores elásticos, e estes não sentem dor cirúrgica da mesma forma que a pele e os tecidos subcutâneos. Na verdade, se você acabar colocando anestésico local no parnchyma, você pode aumentar o risco de sangramento durante o procedimento.

Use técnicas assépticas ao manusear as ferramentas de biópsia e para a incisão. Lave as mãos para remover toda a contaminação visível e aplique luvas cirúrgicas estéreis. Disponha os instrumentos cirúrgicos em uma área estéril por ordem de uso.

Tenha um bisturi número 10, gaze estéril, e monte o instrumento de biópsia e uma toalha estéril para homeostase. Procedimento um, instrumento de biópsia do núcleo. Monte o instrumento de biópsia do núcleo usando luvas cirúrgicas.

Coloque as sete peças estéreis em uma cortina estéril. Insira a lâmina no sistema de acoplamento na peça dois. Insira a peça três em cima da peça dois, garantindo que a estação de acoplamento se alinhe.

Engaje a borda final da lâmina no sistema de acoplamento da peça quatro. Empurre a peça quatro e observe se a peça quatro está próxima da peça três. Insira a peça cinco no dispositivo.

Certifique-se de que a estação de acoplamento está alinhada. Insira a peça seis na parte superior da peça dois. Certifique-se de que a estação de acoplamento está alinhada.

Insira o parafuso de bloqueio na estação de acoplamento. Empurre a peça três para cobrir o parafuso de bloqueio. Ative a ferramenta, empurrando para a frente a peça quatro e observe a lâmina fora da ferramenta.

Puxe a peça quatro para trás para retrair a lâmina na ferramenta. Certifique-se de que a vaca está suficientemente sedada e que o local da biópsia seja suficientemente anestesiado, belisque a pele para garantir que não haja reação. Faça uma incisão vertical de dois a três centímetros através da pele e tecidos subcutâneos de proximal a distal usando um bisturi número 10.

Conecte o instrumento de biópsia a uma broca sem fio usando técnicas estéreis. Coloque a broca contra a ferramenta de biópsia e verifique se a ferramenta está firmemente ligada à broca. Certifique-se de contenção adequada, fazendo com que um indivíduo eleve a cauda durante todos os procedimentos.

Ligue a broca usando rotação no sentido horário e uma baixa velocidade. Avance toda a ferramenta de biópsia em torno de 7,5 centímetros na úbere através da incisão enquanto a ferramenta está girando. Desligue a broca e amplie manualmente a peça quatro da ferramenta, ligue a broca usando rotação no sentido horário e uma baixa velocidade, remova o instrumento que contém o núcleo tecidual da úbere.

Aplique forte pressão imediatamente na ferida usando uma toalha estéril por pelo menos 20 minutos. Insira a cânula no tecido. Empurre a peça para a frente para ativar a ferramenta.

Gire em uma rotação lenta no sentido horário. A amostra de tecido está agora dentro da cânula. Remova o tecido da ferramenta de biópsia usando pinças.

Mantenha a amostra em um x fosfato tamponado e avalie a quantidade de tecido. Pegue os sinais vitais da vaca a cada 10 minutos após a biópsia por pelo menos 30 minutos. Verifique se há sangramento após 20 minutos de pressão no local da biópsia.

Se houver gotas de sangue, continue a aplicar pressão por mais cinco a 10 minutos. Feche as incisões usando grampos de aço inoxidável em intervalos de cinco milímetros depois que todo o sangramento parou. Aplique um curativo de aerossol na área da biópsia.

Observe o animal por 50 minutos após o procedimento. Procedimento dois, instrumento de biópsia de agulha. Siga as instruções do fabricante para o dispositivo.

Remova a agulha de biópsia da embalagem usando técnicas estéreis. Descarte a agulha se houver algum dano. Coloque a agulha no dispositivo.

Feche a tampa e engatilhar o dispositivo. Certifique-se de que a vaca está suficientemente sedada e que o local da biópsia seja suficientemente anestesiado, belisque a pele para garantir que não haja reação. Faça uma incisão vertical de um a dois centímetros através da pele e tecidos subcutâneos de proximal a distal usando um bisturi número 10.

Insira a agulha de biópsia no local da incisão, em torno de 10 a 13 centímetros da pele. Ative o dispositivo da agulha da biópsia para coletar o tecido. Remova a agulha da úbere.

Aplique pressão forte imediata na ferida usando uma toalha estéril por pelo menos 20 minutos. Após remover o tecido da agulha, siga o procedimento descrito anteriormente para fechar a incisão. Todo o procedimento leva cerca de 45 minutos para ser concluído, por animal.

Coágulos sanguíneos precisam ser retirados da biópsia do quarto. Além disso, é necessário observar a produção de leite e a ingestão alimentar, se possível. Certifique-se sempre da saúde e do bem-estar do animal antes, durante e depois do procedimento.

Documente todas as drogas administradas aos animais. Verifique a presença de sangue no leite por sete a dez dias após a biópsia. Tire os coágulos sanguíneos do trimestre biópsia em ordenhas subsequentes e garanta que ocorra a remoção completa do leite.

Observe a produção de leite e, se possível, a ingestão diária individual de ração até que os grampos cirúrgicos tenham sido removidos. Monitore o animal duas vezes por dia para temperatura corporal, respiração e batimentos cardíacos, e comportamento, até que os grampos cirúrgicos sejam removidos. Verifique o local da biópsia duas vezes por dia para inchaço, ternura e quaisquer sinais de drenagem até que os grampos cirúrgicos tenham sido removidos.

Se estes forem observados, consulte um veterinário. Remova os grampos do local da incisão 10 a 14 dias após a biópsia, dependendo da taxa de cicatrização. Consulte um veterinário se algum sinal de infecção local ou sistêmica for observado.

Assim que a biópsia é feita, você interrompeu o sangue e, portanto, o suprimento de nutrientes e oxigênio para esse tecido, e assim, se você não for muito rápido em remover esse núcleo tecidual, e de alguma forma parar a atividade tecidual, as concentrações que você pode medir em um momento posterior no tempo no laboratório pode não ser verdadeiramente reflexiva do que estava acontecendo naquele animal no momento da biópsia. Normalmente, removeríamos rapidamente o tecido, e o congelávamos em nitrogênio líquido para tentar preservar essa atividade. A outra coisa que se pode fazer com esse tecido, e isso é realmente algo que fizemos com o tecido que coletamos, foi se isolar e cultivar as células que estão presentes nesse tecido em um sistema de cultura.

No nosso caso, estamos interessados nas células epiteliais que estão dentro desse tecido, porque essas são as células que realmente sintetizam e secretam os componentes do leite, e assim, essas células desses pedaços de tecido foram colocadas na cultura, e na verdade, elas ainda estão crescendo hoje. Os animais foram observados duas vezes por dia durante 10 dias após o procedimento. Não houve complicações durante o procedimento ou no período pós-operatório, com parâmetros vitais das vacas permanecendo dentro dos limites normais.

Os modelos lineares mostram que 10 dias antes da biópsia, os animais produziam 23,35 quilos de leite por dia. Os animais não apresentaram alterações significativas na produção de leite de 10 dias antes para 10 dias após a biópsia. A biópsia da glândula mamária bovina é um procedimento minimamente invasivo, permitindo que o animal tenha um curto tempo de recuperação.

Portanto, este procedimento de biópsia pode ser usado em muitos ensaios nutricionais e outros tipos de ensaios onde podemos usar medidas repetidas sobre os animais, por isso, por exemplo, se tivermos quatro períodos com quatro tratamentos nutricionais diferentes, poderíamos facilmente biópsia dessas vacas quatro vezes diferentes no final de cada período, permitindo talvez uma semana de descanso entre cada período , para garantir que os animais voltem à sua produção normal.