Tecniche di biopsia della ghiandola mammaria bovina

Una biopsia, come credo molti di voi sappiano, è la rimozione di un po' di tessuto dall'organo di interesse e in questo caso, è la ghiandola mammaria. Il campione di biopsia è molto utile se avete intenzione di fare cose come l'analisi dell'espressione genica, se avete intenzione di fare cose come prendere parte del tessuto e fare un'analisi istologica, per guardare la struttura a livello microscopico della ghiandola mammaria, anche molto utile per determinare cose come percorsi di segnalazione legati all'azione ormonale, per esempio , quindi una delle avvertenze di cui devi essere consapevole quando fai qualsiasi tipo di campionamento dei tessuti mammari, è che hai preso un campione che è veramente rappresentativo? Perché, si può catturare un lobulo, che sarebbe come un gruppo di uva, o si possono catturare alcuni singoli alveoli che in realtà non rappresentano il normale, quindi, la speranza che si ha quando si fa la biopsia mammaria è che si sta raccogliendo tessuto parenchimico, che è solo una parola fantasiosa per dire il tessuto funzionale responsabile della produzione di latte , un campione rappresentativo.

La maggior parte delle terminazioni nervose sensoriali nella ghiandola mammaria sono associate alla pelle, e quindi è importante rendersi conto e apprezzare che, una volta fatta la corretta preparazione dell'area in cui si sta andando a fare l'incisione iniziale, per anestetizzare la pelle, allora c'è molto poco in termini di terminazioni nervose sensoriali associate al tessuto parenchimico stesso , e quindi il disagio che l'animale sentirebbe è per lo più associato alla pelle. Quindi, c'è una varietà di cose che si possono fare con questo tessuto, e in realtà permette di raccogliere maggiori informazioni su come funziona quell'animale, rispetto a ciò che si potrebbe ottenere semplicemente osservando ciò che è stato somministrato all'animale e le risposte nella produzione di proteine del latte o nella produzione di componenti del latte. Tutti i metodi descritti sono stati approvati dal Virginia Tech Institutional Animal Care and Use Committee.

Un giorno prima della biopsia programmata, lavare e strofinare l'animale, in particolare la mammella, per rimuovere il letame e il materiale sporco. Valutare la salute, le condizioni fisiche e il comportamento dell'animale. Usa solo mucche sane.

Mungere completamente la mucca. Spostare l'animale nello scivolo di compressione, idealmente entro due ore dalla mungitura per ridurre al minimo la presenza di latte nelle ghiandole. Trattenete l'animale con un cancello della testa.

Posizionare una cavezza di corda sulla testa della mucca per evitare movimenti avanti e indietro. Tirare la testa dell'animale da un lato e legare la corda allo scivolo di compressione usando un nodo a rilascio rapido per tenere la testa in posizione. Pulire l'area di iniezione con un tampone alcolico isopropile al 70% e somministrare meglumina flunixina da 1,1 a 2,2 milligrammi per chilogrammo di peso corporeo per via endovenosa, attraverso la vena giugulare, da 15 a 20 minuti prima della biopsia.

Individuare la vena giugulare. Sollevare la vena giugulare mediante applicazione della pressione alla base della scanalatura giugulare. Verificare che non vi siano bolle nella siringa.

Inserire l'ago nella vena giugulare sollevata e disegnare 0,5 millilitri di sangue nella siringa due volte e mescolare con il contenuto. Se nella siringa non viene visualizzato sangue, spostare l'ago. Se l'ago è residente nella vena, iniettare il contenuto.

Rimuovere delicatamente l'ago, applicare una garza con una leggera pressione sul sito di iniezione per prevenire il sanguinamento. Somministrare cloridrato di xiazina per via endovenosa, da 0,01 a 0,05 milligrammi per chilogrammo di peso corporeo nel recipiente coccigeo circa cinque-10 minuti prima della biopsia per consentire un tempo sufficiente per la determinazione della sedazione. Sollevare la coda e pulire l'area di iniezione con un tampone alcolico isopropile al 70%.

Verificare che non vi siano bolle nella siringa. Inserire l'ago nel vaso di coda, prelevare 0,2 millilitri di sangue nella siringa e mescolare con il contenuto per assicurarsi che l'ago sia residente nel vaso. Se l'ago è residente, iniettare il contenuto della siringa.

Rimuovere delicatamente l'ago. Applicare una garza con una leggera pressione sul sito di iniezione. È davvero importante avere un'inversione alfa due a portata di mano, come la tolazolina, questo perché le vacche da latte sono sensibili agli effetti della xiazina e un sovradosaggio di xiazina può causare edema polmonare, che potrebbe potenzialmente essere fatale per la mucca da latte, quindi guarda la tua mucca per i segni di sedazione troppo e se questi si verificano, allora può essere data la quantità appropriata di tolazolina.

Vogliamo che le nostre mucche siano in piedi durante una procedura. Troppa xiazina può farli sedere. Avere un assistente legare la coda per la procedura, selezionare il sito di biopsia sulla mammella, in genere in un'area superiore per ridurre al minimo la raccolta del tessuto connettivo ed evitare la penetrazione nella cisterna della ghiandola.

Osservare e palpare la pelle con particolare attenzione per identificare eventuali grandi vasi sanguigni sottocutanei al fine di evitare questi vasi durante la biopsia. Ritagliare i capelli da un'area quadrata di 15 per 15 centimetri intorno al sito della biopsia, preparare l'area della biopsia con un povidone-iodio, lo iodio disponibile allo 0,75% o uno scrub al gluconato di clorexidina. Alternare l'alcol isopropile al 70% almeno tre volte per rimuovere tutti i detriti visibili e invisibili.

Applicare la soluzione di scrub asettico e l'alcol isopropile in un movimento circolare, utilizzando un approccio inside-out. Assicurarsi che la soluzione di scrub antisettico rimanga a contatto con la pelle per almeno cinque minuti. Utilizzare un set di infusione di farfalle con un ago da 18 G per depositare sei millilitri di cloridrato di lidocaina al due per cento per via sottocutanea nel sito di incisione per creare un blocco di linea.

Non penetrare nei tessuti più profondi. Lasciare diffondere l'anestetico locale per tre o cinque minuti, eseguire un'altra ripetizione della soluzione di scrub e dell'alcol prima dell'incisione. In attesa, prepara gli strumenti per la biopsia.

Quello che vuoi fare in termini di fornitura di analgesia è desensibilizzare la pelle. Questo perché abbiamo più innervazione neurale sulla pelle e sui tessuti sottocutanei, e nel parenchima, stiamo parlando solo di recettori elastici, e questi non sentono dolore chirurgico uguale alla pelle e ai tessuti sottocutanei. Infatti, se finisci per inserire l'anestetico locale nel parenchima, potresti aumentare il rischio di sanguinamento durante la procedura.

Utilizzare tecniche asettiche durante la manipolazione degli strumenti di biopsia e per l'incisione. Lavarsi le mani per rimuovere ogni contaminazione visibile e applicare guanti chirurgici sterili. Disporre gli strumenti chirurgici in un'area sterile in ordine di utilizzo.

Avere un bisturi numero 10, garza sterile e assemblare lo strumento biopsia e un asciugamano sterile per l'omeostasi. Procedura uno, strumento di biopsia di base. Assemblare lo strumento di biopsia del nucleo usando guanti chirurgici.

Posizionare i sette pezzi sterili su un drappo sterile. Inserire la lama nel sistema di aggancio sul pezzo due. Inserire il pezzo tre sopra il pezzo due, assicurando che l'alloggiamento di inserimento si allinei.

Innestare il bordo finale della lama nel sistema di aggancio del pezzo quattro. Spingere in avanti pezzo quattro e osservare se il pezzo quattro è accanto al pezzo tre. Inserire il pezzo cinque sul dispositivo.

Assicurarsi che l'alloggiamento di tura sia allineato. Inserire il pezzo sei nella parte superiore del pezzo due. Assicurarsi che l'alloggiamento di tura sia allineato.

Inserire la vite di bloccaggio nell'alloggiamento di entrata. Spingere in avanti il pezzo tre per coprire la vite di bloccaggio. Attivare l'utensile, spingendo in avanti il pezzo quattro e osservare la lama all'esterno dell'utensile.

Tirare il pezzo quattro indietro per ritrarre la lama nell'utensile. Assicurarsi che la mucca sia sufficientemente sedata e che il sito di biopsia sia sufficientemente anestetizzato, pizzicare la pelle per garantire alcuna reazione. Fai un'incisione verticale da due a tre centimetri attraverso la pelle e i tessuti sottocutanei da prossimale a distale usando un bisturi numero 10.

Attaccare lo strumento di biopsia a un trapano cordless utilizzando tecniche sterili. Posizionare il trapano contro lo strumento di biopsia e verificare se l'utensile è saldamente collegato al trapano. Garantire un adeguato contenimento avendo un individuo elevare la coda durante tutte le procedure.

Accendere il trapano utilizzando una rotazione in senso orario e una bassa velocità. Far avanzare l'intero strumento di biopsia di circa 7,5 centimetri nella mammella attraverso l'incisione mentre lo strumento sta ruotando. Spegnere il trapano ed estendere manualmente il pezzo quattro dell'utensile, accendere il trapano utilizzando una rotazione in senso orario e una bassa velocità, rimuovere lo strumento contenente il nucleo del tessuto dalla mammella.

Applicare immediatamente una forte pressione sulla ferita utilizzando un asciugamano sterile per almeno 20 minuti. Inserire la cannula nel tessuto. Spingere il pezzo in avanti per attivare l'utensile.

Ruotare in una lenta rotazione in senso orario. Il campione di tessuto è ora all'interno della cannula. Rimuovere il tessuto dallo strumento di biopsia utilizzando una pinzetta.

Conservare il campione in una salina tamponata con fosfato X e valutare la quantità di tessuto. Prendere i segni vitali della mucca ogni 10 minuti dopo la biopsia per almeno 30 minuti. Verificare la presenza di sanguinamento dopo 20 minuti di pressione sul sito di biopsia.

Se ci sono gocce di sangue, continuare ad applicare pressione per altri cinque-10 minuti. Chiudere le incisioni utilizzando graffette in acciaio inossidabile a intervalli di cinque millimetri dopo che tutto il sanguinamento si è fermato. Applicare una benda aerosol sull'area della biopsia.

Osservare l'animale per 50 minuti dopo la procedura. Procedura due, strumento di biopsia dell'ago. Seguire le istruzioni del produttore per il dispositivo.

Rimuovere l'ago della biopsia dalla confezione utilizzando tecniche sterili. Scartare l'ago se si osservano danni. Attaccare l'ago al dispositivo.

Chiudi il coperchio e cazzi il dispositivo. Assicurarsi che la mucca sia sufficientemente sedata e che il sito di biopsia sia sufficientemente anestetizzato, pizzicare la pelle per garantire alcuna reazione. Fai un'incisione verticale da uno a due centimetri attraverso la pelle e i tessuti sottocutanei da prossimale a distale usando un bisturi numero 10.

Inserire l'ago della biopsia nel sito di incisione, a circa 10-13 centimetri dalla pelle. Attivare il dispositivo dell'ago della biopsia per raccogliere il tessuto. Rimuovere l'ago dalla mammella.

Applicare una forte pressione immediata sulla ferita utilizzando un asciugamano sterile per almeno 20 minuti. Dopo aver rimosso il tessuto dall'ago, seguire la procedura descritta in precedenza per chiudere l'incisione. L'intera procedura richiede circa 45 minuti per finire, per animale.

I coaguli di sangue devono essere rimossi dal quarto biopsiato. Inoltre, è necessario osservare la produzione di latte e l'assunzione di cibo, se possibile. Garantire sempre la salute e il benessere dell'animale prima, durante e dopo la procedura.

Documentare tutti i farmaci somministrati agli animali. Verificare la presenza di sangue nel latte per sette o 10 giorni dopo la biopsia. Togliere a mano i coaguli di sangue dal trimestre biopsied alle successive mungitura e assicurarsi che si verifichi la completa rimozione del latte.

Osservare la produzione di latte e, se possibile, l'assunzione giornaliera individuale di mangime fino a quando le graffette chirurgiche non sono state rimosse. Monitorare l'animale due volte al giorno per la temperatura corporea, la respirazione e la frequenza cardiaca e il comportamento, fino a quando le graffette chirurgiche non sono state rimosse. Controllare il sito di biopsia due volte al giorno per gonfiore, tenerezza ed eventuali segni di drenaggio fino a quando le graffette chirurgiche non sono state rimosse.

Se questi vengono osservati, consultare un veterinario. Rimuovere le graffette dal sito di incisione da 10 a 14 giorni dopo la biopsia, a seconda del tasso di guarigione. Consultare un veterinario se si osservano segni di infezione locale o sistemica.

Quindi, non appena viene presa la biopsia, avete interrotto il sangue e quindi l'apporto di nutrienti e ossigeno a quel tessuto, e quindi se non siete molto veloci nel rimuovere quel nucleo tissutale, e in qualche modo fermare l'attività tissutale, le concentrazioni che si potrebbero misurare in un secondo momento in laboratorio potrebbero non essere realmente riflettenti di ciò che stava succedendo in quell'animale al momento della biopsia. Tipicamente, rimuovemmo rapidamente il tessuto, e lo congelammo in azoto liquido per cercare di preservare quell'attività. L'altra cosa che si può fare con quel tessuto, e questo è qualcosa che abbiamo fatto con il tessuto che abbiamo raccolto, è che si possono isolare e far crescere le cellule presenti in quel tessuto in un sistema di coltura.

Nel nostro caso, siamo interessati alle cellule epiteliali che si trovano all'interno di quel tessuto, perché queste sono le cellule che sintetizzano e secernono i componenti del latte, e quindi, quelle cellule di quei pezzi di tessuto sono state messe in coltura, e in realtà, stanno ancora crescendo oggi. Gli animali sono stati osservati due volte al giorno per 10 giorni dopo la procedura. Non si sono verificate complicazioni durante la procedura o nel periodo post operatorio, con parametri vitali delle mucche che rimangono entro i limiti normali.

I modelli lineari mostrano che 10 giorni prima della biopsia, gli animali producevano 23,35 chilogrammi di latte al giorno. Gli animali non hanno mostrato cambiamenti significativi nella produzione di latte da 10 giorni prima a 10 giorni dopo la biopsia. La biopsia della ghiandola mammaria bovina è una procedura minimamente invasiva, che consente all'animale di avere un breve tempo di recupero.

Pertanto, questa procedura di biopsia può essere utilizzata in molti studi nutrizionali e altri tipi di sperimentazioni in cui potremmo utilizzare misure ripetute sugli animali, quindi, ad esempio, se abbiamo quattro periodi con quattro diversi trattamenti nutrizionali, potremmo facilmente biopsia queste mucche quattro volte diverse alla fine di ogni periodo, consentendo forse una settimana di riposo tra ogni periodo , per garantire che gli animali ritornino alla loro normale produzione.