Cette méthodologie peut être employée pour produire reproductiblement des tumeurs de réservoir souple utilisant le cancérogène de BBN et pour l’image la taille et l’extension de la charge de tumeur de réservoir souple par MRI. Cette technique utilise une approche d’imagerie rapide indépendante de l’opérateur avec de courts temps d’acquisition à une qualité diagnostique élevée pour effectuer des analyses à haut débit de souris aux stades intermédiaires du développement tumoral. Pour induire la formation de tumeur de cancer de réservoir souple, ajoutez 0.05%BBN à un récipient opaque d’eau potable et fournissez l’eau à 6 semaines C57 noir six souris ad libitum.
Surveillez ensuite les animaux deux fois par semaine pour les signes de détresse associés aux tumeurs de la vessie conformément aux directives locales de l’IACUC. 16 à 24 semaines après l’exposition, chargez une seringue d’un millilitre munie d’une aiguille de calibre 25 à 27 avec 100 à 200 microlitres de solution saline stérile et injectez la solution saline sous-cutanée dans un animal traité au BBN. Après 10 minutes, transférez la souris dans le support d’imagerie d’un imageur de résonance magnétique et insérez une sonde de température rectale reliée à l’ordinateur d’enregistrement physiologique pour surveiller la température corporelle de l’animal.
Ensuite, placez une bobine de récepteur de quadrature à 4 canaux au-dessus du bas-ventre de la souris et lancez des ajustements automatiques dans le logiciel d’imagerie intégré pour acquérir un ensemble triaxial d’images de l’ensemble du corps de la souris. À partir de cet ensemble d’images de référence, identifiez la région d’intérêt et acquérez trois ensembles d’images orthogonales tranchées le long des plans axial, coronal et sagittal. En utilisant la véritable imagerie rapide avec séquence d’imagerie de progression à l’état stable, réglez le TR à 900 millisecondes, le TE à deux millisecondes, et le FA à 70, 14 moyennes.
Sélectionnez ensuite les paramètres géométriques appropriés dans le logiciel de plate-forme d’imagerie pour obtenir une série de tranches sur toute la vessie de 0,5 millilitre d’épaisseur et une résolution en plan de 0,148 millimètres. Lorsque toutes les images ont été obtenues, exportez l’ensemble des tranches couvrant toute la vessie vers un logiciel approprié d’analyse d’image médicale et faites défiler les images générées pour localiser une tranche au milieu de la vessie qui permet la visualisation de la paroi vésicale et lumen pour sélectionner la vue axiale représentative au centre de la vessie pour une analyse quantitative. Tracez ensuite les limites autour du bord extérieur et du lumen intérieur de la vessie pour délimitér soigneusement la région d’intérêt dans la vue axiale représentative sélectionnée et soustraire le lumen intérieur du bord extérieur pour calculer la surface de la paroi vésicale.
20 semaines après l’exposition au BBN, nettoyez la zone d’incision avec 70% d’éthanol et utilisez des forceps pour soulever la peau de la paroi abdominale. Faire une incision médiane de la symphyse pubienne au processus xiphoïde et saisir le péritoine pour permettre une incision nette de la cavité péritonéale. Identifiez la vessie dans le bas-ventre de la ligne médiane, à l’aide de forceps pour saisir le dôme de la vessie.
Disséquer la vessie loin des structures environnantes, y compris les vésicules séminales, le rectum et la graisse. Couper le ligament ombilical médian reliant le dôme de la vessie à l’ombilicus et à la paroi abdominale. Couper les uretères près de la vessie et soulever la vessie céphalad, couper l’urètre pour enlever la vessie.
Rincez ensuite la vessie excisée avec du PBS et pesez immédiatement le tissu sur un équilibre. Ici, la vraie image rapide représentative avec des images de résonance magnétique de progression à l’état régulier des reconstructions 3D de mur de réservoir souple et des images pathologiques d’une souris avec une grande tumeur et d’une souris de contrôle sans tumeur sont montrées. L’épaisseur de la paroi de la vessie, dérivée de l’imagerie par résonance magnétique, est corrélée chaque semaine avec les mesures de poids de la vessie obtenues par ex vivo.
L’examen de l’épaisseur de la paroi vésicale dérivée de l’IRM et des données ex vivo obtenues sur le poids de la vessie démontre également une association avec le stade tumoral ainsi qu’une association lors de la stratification de la pathologie par cancer de la vessie invasif non musculaire et cancer de la vessie invasif musculaire. Gardez à l’esprit qu’il est préférable d’acquérir les images chez la souris quand ils ont une vessie pleine. Après la formation image de MR des tumeurs de réservoir souple, les souris peuvent être divisées en cohortes avec des caractéristiques semblables de tumeur, le cas échéant.
Cette technique permet aux chercheurs d’explorer de nouvelles immunothérapies et d’autres traitements pour améliorer les résultats pour nos patients. Il est important de se rappeler que bbn est un carcinogène et que la précaution appropriée doit toujours être prise lors de la manipulation de ce composé.
