Traçage de lignée et analyse clonale dans le développement du cortex cérébral à l’aide de l’analyse mosaïque avec des marqueurs doubles (MADM)

Mosaic Analysis avec double marqueurs technologie est une méthode puissante qui peut fournir des informations hautement quantitatives sur le comportement de prolifération et les sorties de cave des cellules souches individus. Une caractéristique unique de cette technique, c’est qu’elle permet le traçage de lignée et l’analyse génétique fonctionnelle des gènes candidats au niveau de la cellule unique. Pour induire des événements de recombinaison MADM chez des souris expérimentales, utilisez une seringue de 1 ml équipée d’une aiguille de calibre 25 pour livrer une seule injection de Tamoxifène Intraperitoneal dans une période jusqu’à la mère enceinte. De l’analyse clonale MADM aux points de temps postnatals. Les jours embryonnaires 18 à 19, placer une souris enceinte dans la position supine et désinfecter la fourrure avec 70% d’éthanol. Faire une petite incision dans la peau dans le bas-ventre au-dessus de l’utérus et faire une deuxième incision à travers les muscles et la paroi musculaire abdominale pour révéler le péritoine. Utilisez des ciseaux pour séparer l’utérus des tissus environnants et placez l’utérus intact dans un gant avec de l’eau chaude. Ensuite, utilisez des ciseaux à pointe fine et les doigts pour ouvrir soigneusement les parois utérine pour libérer les embryons. Nettoyez les chiots en appuyant doucement sur la poitrine de temps en temps pour commencer à respirer avant de transférer les animaux prénatals à une mère adoptive. Pour recueillir le tissu clone MADM neural placer un animal anesthésié dans la position supine sur un plateau de chirurgie de perfusion et désinfecter la fourrure avec 70% d’éthanol. Utilisez des ciseaux et des forceps pour faire une incision à travers la peau et une incision à travers la couche musculaire. Lorsque la cavité thoracique est visible, renifler et soulever le diaphragme pour révéler le cœur et soigneusement couper et épingler la cage thoracique au tray.insert chirurgical une aiguille reliée à un tube pompe périssaliste rempli de PBS dans le ventricule inférieur gauche du cœur et utiliser de petits ciseaux Iris pour faire une incision dans l’extrémité postérieure de l’oreillette droite. Perfuser le système cardiovasculaire avec le PBS suivi immédiatement par perfusion avec de la glace fraîchement préparée froid 4%paraformaldéhyde dans PBS. Lorsque la perfusion est terminée, enlever le cerveau par dissection soigneuse et placer l’organe récolté dans au moins cinq fois le volume cérébral de 4% de paraformaldéhyde frais pendant la nuit à 4