Ce protocole démontre qu’il est possible d’inculquer du matériel de recherche dans la trachée des ratons néonatals, âgés de cinq jours, par visualisation directe. Cette méthode améliore la fiabilité de l’administration de matériel de recherche ou de médicament dans la trachée par visualisation directe. En évitant l’injection dans la trachée, cette méthode réduit la douleur et, plus important encore, les saignements dans la trachée, ce qui permet une meilleure survie.
Le développement de compétences fines est nécessaire pour effectuer ce protocole, y compris le positionnement approprié de l’animal, l’utilisation correcte de l’autoscope opératoire pour visualiser les cordes vocales et l’efficacité de l’administration dans les poumons. Tara Sudhadevi, une boursière postdoctorale de mon laboratoire, et Alison Ha, une étudiante diplômée, feront la démonstration de la procédure. Avant de commencer l’expérience, confirmez une perte du réflexe de queue et de pédale chez un rat anesthésié de cinq jours et utilisez du ruban d’étiquetage de laboratoire pour retenir le chiot en position couchée sur une plate-forme plate inclinée à 45 degrés.
Utilisez une pince émoussée pour tirer doucement la langue d’un côté et, à l’aide d’un spéculum d’otoscope de deux millimètres de diamètre, maintenez doucement la langue en place pour que le larynx soit visible. En utilisant l’otoscope opératoire avec le spéculum de la bonne taille, localisez les cordes vocales à travers la lentille grossissante de l’otoscope. Pour l’instillation intratrachéale, chargez une seringue d’un millilitre équipée d’une pointe de pipette à long angle et chargée de gel avec 0,9 centimètre cube d’air, suivie de 30 à 50 microlitres de la substance d’intérêt.
Pliez la pointe de la pipette à un angle de 30 degrés et insérez la pointe de la pipette chargée à travers le spéculum à environ deux millimètres au-delà des cordes vocales. Poussez le piston de la seringue pour administrer la substance d’intérêt et l’air à travers le spéculum dans les cordes vocales. Lorsque toute la substance a été administrée, placez le chiot sur un coussin chauffant à liquide circulant intégré de 38 degrés Celsius avec surveillance jusqu’à la respiration régulière, avant de réunir le chiot avec le barrage.
Pour évaluer la distribution de la substance dans un échantillon de tissu pulmonaire, essuyez la poitrine et l’abdomen des ratons euthanasiés avec de l’alcool éthylique à 70% et utilisez une technique stérile pour enlever les poumons selon les protocoles standard pour leur évaluation visuelle. Dans cette étude, l’efficacité de la technique d’instillation intra-trachéale a été évaluée par un examen visuel du tissu pulmonaire prélevé sur un chiot rat de cinq jours instillé avec du colorant bleu Evans. L’instillation était presque efficace à 100%, car le colorant s’est répandu dans le poumon immédiatement après l’administration et distribué sur tous les lobes du tissu pulmonaire.
Le colorant n’a été observé dans aucun tissu à l’extérieur des poumons, confirmant la capacité de la technique à être utilisée pour l’administration sélective d’un traitement d’intérêt pour les poumons. Placer l’animal initialement à l’angle correct sur une surface ferme est essentiel pour le succès de l’étape suivante de visualisation des cordes vocales à l’aide de l’autoscope de fonctionnement.
