Ce protocole permettra aux chercheurs d’effectuer des mesures répétées de la fonction pulmonaire chez les souris individuelles, en diminuant la variabilité expérimentale et en réduisant le nombre de souris nécessaires pour chaque expérience. Le principal avantage de ce protocole est qu’il ne nécessite pas la visualisation de la trachée par la cavité buccale ou la dissection traumatique du cou pour l’intubation. Cette méthode sera d’une valeur particulière pour les chercheurs qui étudient les maladies pulmonaires chroniques et progressives comme l’asthme, la MPOC, l’emphysème et la fibrose pulmonaire.
La démonstration visuelle de ce protocole est essentielle parce que la compréhension de la façon d’identifier la trachée à travers la peau du cou ventral est au cœur de la méthode. Kate Nolan, vétérinaire de mon laboratoire, démontrera la technique avec Andrew Nelson. Pour créer une plate-forme d’intubation, pliez une longueur de 15 à 20 centimètres de soie 3-0 en deux et collez les extrémités du fil au sommet d’un liant à trois anneaux de trois pouces.
Sélectionnez une canule de la taille et de la longueur appropriées et coupez un biseau à l’extrémité distale du cathéter. Lisser la surface coupée avec du papier abrasif pour créer une pointe arrondie et faire délicatement un léger virage dans la canule à environ un centimètre du biseau. Lorsque les matériaux sont prêts, confirmer un manque de réponse au pincement des orteils dans une souris anesthésiée et accrocher les incisives supérieures autour du fil de soie en haut de la surface inclinée de la plate-forme pour suspendre la souris en position supinée.
Une fois que la souris est carrément positionnée dans la récumbence dorsale, saisissez doucement la base de la queue et rétractez la queue vers la table. Placez un morceau de ruban adhésif sur la base de la queue pour fixer la souris et appliquez de la crème depilatory sur la région ventrale-cervicale. Après 30 à 45 secondes, utiliser de la gaze sèche pour enlever la crème et bien rincer la peau avec de l’eau saline ou distillée.
À l’aide de forceps dans la main non dominante, rétractez doucement la langue d’une manière qui ouvre suffisamment la bouche pour l’introduction de la canule. Avec la main dominante, avancez la canule dans la bouche de telle sorte que l’extrémité qui est distale à la légère courbure est contre le toit de la bouche de l’animal. Relâchez la langue et faites glisser le bord plat des forceps fermés caudally le long du cou ventral jusqu’à ce que le manubrium soit atteint pour déplacer latéralement les glandes salivaires et pour aplatir le muscle couvrant la trachée.
La trachée apparaîtra transcutanément comme une ligne blanche. Si nécessaire, faites pivoter les forceps dans une direction craniodorsale tout en maintenant la tension sur la peau dans une direction caudale pour provoquer le pic des glandes salivaires déplacées latéralement et pour créer plus de contraste autour de la trachée. Supinant la main dominante avec la flexion simultanée du poignet, avancez la canule tout en balançant simultanément la pointe distale de la canule ventrally.
Si la canule a été correctement placée, elle sera observée dans la trachée. Pour confirmer un placement approprié, connectez une ampoule d’inflation pulmonaire à la canule et observez l’expansion thoracique avec la dépression simultanée de l’appareil. Sans déplacer la canule, déballer soigneusement les incisives de la souris de la plate-forme d’intubation et transférer la souris sur une plate-forme horizontale, puis fixer la canule à l’adaptateur sur le ventilateur et, à la suite d’une inflation profonde, ventiler la souris pendant 60 secondes avant de mesurer la résistance respiratoire.
Une fois la procédure terminée, transférez la souris sur une plate-forme réchauffée et fournissez une stimulation constante par des pincements légers d’orteil ou de queue pour encourager la respiration spontanée. Une fois la respiration spontanée observée, continuer à surveiller visuellement l’animal. Lorsque le taux de respiration revient à la normale, saisir la canule au niveau du moyeu et tirer doucement le tube cranially et loin de la souris jusqu’à ce que la canule est complètement retiré de la bouche de l’animal.
Une fois extubé, transférer la souris dans une cage de récupération propre avec un soutien thermique avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit entièrement ambulatoire. Dans cette expérience représentative, la résistance respiratoire a été mesurée les jours 0, 3, 10 et 17, en utilisant la technique d’oscillation forcée suivant une inflation profonde à 25 centimètres d’eau retenue pendant cinq et 60 secondes de ventilation mécanique. Aucune différence significative dans la résistance respiratoire mesurée n’a été observée entre l’un ou l’autre des points de temps dans chaque souche, ce qui suggère que l’absence d’une augmentation de la résistance respiratoire au fil du temps indique un manque d’inflammation fonctionnellement significative liée aux traumatismes par intubation dans le système respiratoire sur quatre points de temps successifs.
Cette procédure d’intubation peut être utilisée pour donner accès à la trachée pour l’installation de substances expérimentales et la surveillance en série de la fonction respiratoire. Cette technique permet l’évaluation de la fonction pulmonaire sans trachéostomie invasive, facilitant la surveillance à plusieurs moments dans les maladies chroniques et progressives au sein d’une même souris.
