Isolement, culture et caractérisation de cellules souches de la pulpe dentaire à partir de dents de lait et permanentes humaines

Commencez par fixer la dent humaine extraite en place à l’aide d’une pince dentaire. Ensuite, coupez la dent à l’aide d’un disque diamanté relié à une pièce à main dentaire et à un liquide de refroidissement. À l’aide d’une excavatrice dentaire, retirez le tissu pulpaire de la dent.

Ensuite, utilisez une lame chirurgicale stérile pour hacher soigneusement le tissu pulpaire en petits fragments. Placez ensuite ces fragments dans un mini broyeur de tissus avec du PBS pour former un mélange homogène. Transférez les fragments de tissu haché dans un tube de 15 millilitres et digérez-les à l’aide d’un mélange de collagénase de type un et de dispase.

Incuber le tissu dans le mélange d’enzymes à 37 degrés Celsius pendant deux heures. Après l’incubation, neutralisez les enzymes. Ensuite, transférez le tissu digéré dans un tube de 15 millilitres et faites-le tourner à 300 g pendant cinq minutes à température ambiante.

Ensuite, jetez soigneusement le surnageant et remettez la pastille en suspension dans du DMEM frais, complété par 10 à 20 % de FBS. Pour la culture cellulaire, transférez soigneusement la suspension cellulaire dans une fiole de culture de 25 centimètres carrés. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius dans 5% de dioxyde de carbone.

Après deux à trois jours, à l’aide d’une pipette sérologique stérile, aspirez soigneusement le milieu et remplacez-le par un milieu frais. Ensuite, pour la caractérisation des DPSC, allumez le cytomètre en flux et confirmez la nature des cellules souches mésenchymateuses des cellules isolées. La différenciation réussie des DPSC en ostéoblastes, adipocytes et chondrocytes valide la nature multi-potente des DPSC.

Le temps de doublement des DPSC était cohérent avec celui rapporté pour les cellules souches mésenchymateuses, suggérant une population cellulaire saine et proliférative. L’analyse par cytométrie en flux a montré que la majorité des DPSC étaient positifs pour CD-90, CD-73 et CD-105, confirmant leur identité en tant que cellules souches mésenchymateuses. De plus, moins de 2 % des cellules étaient positives pour le CD-34, le CD-45 et le HLADR, confirmant l’absence de contamination significative des cellules hématopoïétiques ou endothéliales.